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熱區(qū)小飛蓬水浸液化感作用的初步研究

2011-12-31 00:00:00朱朝華,張宇,王萌,范志偉,戴進用,鄭偉麗
湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2011年11期

摘要:以熱帶地區(qū)常見植物蘿卜、綠豆、黃瓜、柱花草和莧菜為受體植物,測定小飛蓬的水浸液對受體植物的種子萌發(fā)和幼苗生長的化感作用。結(jié)果表明,小飛蓬水浸液顯著抑制5種受體植物種子的萌發(fā),如0.20 g/mL小飛蓬莖葉水浸液對莧菜種子的萌發(fā)率和萌發(fā)指數(shù)的RI值分別為-0.822和-0.892。小飛蓬水浸液對蘿卜、柱花草以及莧菜3種受體植物幼苗的生長表現(xiàn)出抑制作用。當(dāng)根部水浸液的濃度為0.15 g/mL時,這3種受體植物幼苗的根都受到了極顯著的抑制,其RI值分別為-0.399、-0.622和-0.667。綜合各項指標(biāo)分析,小飛蓬水浸液對不同受體植物之間的化感作用強弱差異顯著,其中莧菜受到的化感作用最強,柱花草次之。小飛蓬水浸液中的化感物質(zhì)大部分能溶于乙酸乙酯中。

關(guān)鍵詞:小飛蓬;化感作用;綜合效應(yīng)

中圖分類號:S451文獻標(biāo)識碼:A文章編號:0439-8114(2011)11-2254-05

Preliminary Study on Allelopathy of Aqueous Extracts from Conyza canadensis on

Five Kinds of Receptor Plants in the Tropical Area

ZHU Chao-hua1,2,ZHANG Yu2,WANG Meng2,FAN Zhi-wei1,DAI Jin-yong2,ZHENG Wei-li2

(1.Research Institute of Environment and Plant Protection,Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Danzhou 571737,Hainan,China; 2.Key Laboratory of the Ministry of Education about Protection and Development of Tropical Crop Germplasm Resources / College of Environment and Plant Protection,Hainan University, Haikou 570228,China)

Abstract: Take Raphanus sativus,Vigna radata,Cucumis sativus, Stylosanthes guianensias and Acalypha hainanensis which were common plants in the tropical area as acceptor plants, allelopathic effects of the aqueous extracts from Conyza canadensis on the seed germination and seedling of the acceptor plants were determined. The test results showed that the aqueous extracts from Conyza canadensis obviously suppressed the germination of the 5 kinds of acceptor plant’s seeds, for instance, the RI value of 0.20 g/mL aqueous extracts from Conyza canadensis stem leaf on the germination rate and germination index of A. hainanensis seeds were -0.822 and -0.892 respectively. The aqueous extracts from Conyza canadensis showed inhibitory effect on R. sativus,S. guianensias and A. hainanensis seedling growth. When the concentration of the aqueous extracts of root was 0.15 g/mL, the seedling's root of these 3 acceptor plant was extremely suppressed, their RI value was -0.399,-0.622 and -0.667 respectively. According to synthetic analysis, the allelopathic effects of aqueous extracts from Conyza canadensis to different acceptor plants were reamarkably different, the allelopathic effects on A. hainanensis was the strongest; while the next best was S. guianensias. The majority of the allelochemicals in aqueous extracts from Conyza canadensis could dissolve in ethyl acetate.

Key words: Conyza canadensis; allelopathy; synthesis effects

小飛蓬(Conyza canadensis (L.) Cronq.),別名小白酒草、小蓬草、小飛蓮、破布艾、魚膽草、竹葉艾、臭艾、小山艾,俗稱狼尾蒿,為菊科(Compositae)白酒菊屬(Conyza)植物。小飛蓬原產(chǎn)于北美,19世紀(jì)末先后傳入我國[1]。現(xiàn)今已經(jīng)成為我國分布最廣的入侵物種之一,在我國的分布群體大、危害重,是區(qū)域性惡性雜草,已經(jīng)引起了相關(guān)研究人員的重視。

高興祥等[2]研究發(fā)現(xiàn)小飛蓬乙酸乙酯和乙醇提取物對高粱、黃瓜、小麥和油菜等4種供試植物幼苗的生長具有很強的抑制作用,表明小飛蓬的化學(xué)成分中含潛在的除草活性成分。小飛蓬的水浸液對小麥、油菜和稗草等植物的種子萌發(fā)和幼苗生長有一定的抑制作用,初步研究發(fā)現(xiàn)小飛蓬具有一定的化感作用[3,4]。為了系統(tǒng)研究小飛蓬特別是熱帶地區(qū)小飛蓬的化感作用,本試驗以不同科屬的植物為受體植物,探索并補充小飛蓬與其他植物之間的化感作用特點,以期為完善小飛蓬化感作用的研究工作提供有價值的資料,為開發(fā)植物源除草劑和利用小飛蓬的化感潛力來防除、控制雜草等生物防治方法提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1供試植物以小飛蓬為供試材料,2009年7月采集于海南大學(xué)儋州校區(qū)環(huán)境與植物保護學(xué)院教學(xué)基地附近坡地;以蘿卜(Raphanus sativus)、綠豆(Vigna radata)、黃瓜(Cucumis sativus)、柱花草(Stylosanthes guianensias SW.)以及莧菜(Amaranthus mangostanus L.)為受體植物。其中,柱花草的種子購于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院品種資源研究所,其他植物的種子購于海南大學(xué)儋州校區(qū)市場。

1.1.2試驗儀器MP2002電子天平,上海恒平科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn);富華105A生化培養(yǎng)箱,江蘇金壇市富華儀器有限公司生產(chǎn);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52,上海安亭電子儀器廠;DF-1015低溫冷卻液循環(huán)泵,上海比朗儀器有限公司。

1.1.3試驗試劑乙酸乙酯和正丁醇均為AR級,為廣州化學(xué)試劑廠產(chǎn)品。

1.2試驗方法

1.2.1水浸液的制備選取健康、生長盛期的小飛蓬植株洗凈,待表面水分晾干后,將莖葉與根部分開,分別剪成5 cm左右的小段。稱取200.0 g的莖葉(根部)碎段裝入1 500 mL試劑瓶中,加入蒸餾水800.0 mL。于室溫下靜置48 h后,連續(xù)抽濾2次,濾液為濃度0.25 g/mL的供試母液,低溫保存。試驗時用蒸餾水將浸提液稀釋至0.25、0.20、0.15、0.10和0.05 g/mL共5個濃度進行測定。

1.2.2水浸液對受體植物種子萌發(fā)影響的測定取不同濃度的水浸液各10 mL(莧菜的處理為7 mL),加到12 cm培養(yǎng)皿中的濾紙上,對照直接加相同體積的蒸餾水。每皿擺入50粒(綠豆和黃瓜為30粒)經(jīng)預(yù)處理的受體植物種子,放入溫度為(27±1)℃的培養(yǎng)箱內(nèi)暗培養(yǎng),每個處理設(shè)3個重復(fù),每過24 h觀察種子的萌發(fā)情況,連續(xù)記錄3 d,并計算其萌發(fā)率及萌發(fā)指數(shù),計算公式如下:

種子萌發(fā)率(GR)=(最終發(fā)芽數(shù)/供試種子數(shù))

×100%;

萌發(fā)指數(shù)(GI)=∑(Gt/Dt)

式中,Gt為第t天的發(fā)芽數(shù),Dt為相應(yīng)的發(fā)芽天數(shù)。

1.2.3水浸液對受體植物幼苗生長影響的測定處理方法同1.2.2,每皿擺入50粒(綠豆和黃瓜為30粒)已露白的受體植物種子,并放入溫度為(27±1)℃、光照時間為10 h/d的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),每個處理設(shè)置3個重復(fù)。連續(xù)培養(yǎng)5 d,然后在每個培養(yǎng)皿中隨機抽取20株幼苗,測量其根長、莖長及20株幼苗的總鮮重,對各培養(yǎng)皿內(nèi)平均根長、莖長及鮮重進行統(tǒng)計分析。

1.2.4水浸液的初步分離及生物測定制備小飛蓬全草水浸液400 mL,方法同1.2.1。依次用乙酸乙酯和水飽和正丁醇對水浸液進行充分萃取,直至上層萃取液近無色為止。合并相同的萃取液后,40 ℃下將各萃取液減壓濃縮,并真空干燥后稱重,計算3種萃取相的提取率分別為0.76%、0.97%和3.12%,然后低溫保存?zhèn)溆谩⒏飨噍腿∥锓謩e溶解于400 mL蒸餾水后,用于處理綠豆、蘿卜和柱花草的種子和幼苗,方法同1.2.2和1.2.3。分別計算其萌發(fā)率及萌發(fā)指數(shù),測量幼苗的根長,根據(jù)下式計算抑制率,進行統(tǒng)計分析。

抑制率=(對照組平均值-處理組重復(fù)值)/對照組平均值×100%

1.3數(shù)據(jù)分析

試驗數(shù)據(jù)用SAS軟件9.1版進行方差分析,采用鄧肯氏法分析處理間差異顯著性。數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析方法參照Williamson[5]的方法,利用化感作用效應(yīng)指數(shù)(RI)進行分析。即:RI=1-C/T(當(dāng)T≥C時),RI=T/C-1(當(dāng)T≤C時)。其中,C是對照值,T是處理值,RI代表化感效應(yīng),當(dāng)RI>0時表示促進作用,當(dāng)RI<0時為抑制作用,RI的絕對值代表化感強度的大小。綜合效應(yīng)為同一受體植物各項指標(biāo)RI的算術(shù)平均值。

2結(jié)果與分析

2.1小飛蓬水浸液對受體植物種子萌發(fā)的化感作用

2.1.1小飛蓬水浸液對受體植物種子萌發(fā)率的影響由表1可知,除綠豆外,小飛蓬不同部位的水浸液對受體植物種子的萌發(fā)率均產(chǎn)生了顯著影響,且抑制效果隨水浸液濃度的增大而增強。對于莖葉水浸液來說,濃度為0.20 g/mL的水浸液對蘿卜、綠豆、柱花草和莧菜這4種受體植物種子萌發(fā)率的抑制作用均達到了極顯著水平。而0.15 g/mL的小飛蓬根部水浸液顯著地抑制了蘿卜、黃瓜、柱花草和莧菜這4種受體植物種子的萌發(fā)率。

2.1.2小飛蓬水浸液對受體植物種子萌發(fā)速率的影響由表2可看出,小飛蓬水浸液均顯著延遲了受體植物種子的萌發(fā)速率,且達到了極顯著水平。與萌發(fā)率的趨勢一樣,作用效果隨水浸液濃度的增大而增強。當(dāng)莖葉水浸液濃度為0.20 g/mL時,蘿卜、綠豆、柱花草和莧菜這4種受體植物種子的萌發(fā)速率受到的延遲效果達到了極顯著水平。而0.15 g/mL的小飛蓬根部水浸液對蘿卜、黃瓜、柱花草和莧菜這4種受體植物種子萌發(fā)速率的延遲效果也達到了極顯著水平。

2.2小飛蓬水浸液對受體植物幼苗的化感作用

2.2.1小飛蓬水浸液對受體植物幼苗根長的影響由表3可知,小飛蓬不同部位的水浸液均顯著抑制了受體植物幼苗根的生長。當(dāng)莖葉水浸液的濃度為0.25 g/mL時,蘿卜、綠豆、黃瓜、柱花草和莧菜這5種受體植物幼苗根的生長均受到了極顯著的抑制,其RI值分別為-0.789、-0.414、-0.585、-0.678和

-0.664。而相同濃度的根部水浸液對這5種受體植物幼苗根的生長的抑制效果更為明顯,其RI值分別為-0.739、-0.750、-0.815、-0.766和-0.686。

2.2.2小飛蓬水浸液對受體植物幼苗莖長的影響由表4可知,綠豆、柱花草和莧菜這3種受體植物幼苗的莖長均明顯受到了小飛蓬莖葉水浸液的抑制作用,且作用效果隨濃度增大而增強。當(dāng)小飛蓬莖葉水浸液的濃度為0.10 g/mL時,其對這3種受體植物幼苗莖長的RI值分別為-0.335、-0.324和

-0.155;當(dāng)濃度增大至0.20 g/mL時,RI值則分別變?yōu)椋埃常罚丁ⅲ埃罚叮埠停埃常福怠6}卜和黃瓜幼苗的莖長則受到了莖葉水浸液在低濃度范圍內(nèi)促進高濃度范圍內(nèi)抑制的雙重效果。當(dāng)水浸液濃度為0.05 g/mL時,蘿卜幼苗的莖長受到的促進作用的RI值為0.292;當(dāng)濃度增大至0.25 g/mL時,RI值則變?yōu)?/p>

-0.252。小飛蓬根部水浸液對這5種受體植物幼苗莖長的作用特點與莖葉水浸液的情況一致。

2.2.3小飛蓬水浸液對受體植物幼苗鮮重的影響由表5可知,除黃瓜外,蘿卜、綠豆、柱花草和莧菜這4種受體植物幼苗的鮮重均受到了小飛蓬水浸液的顯著影響。蘿卜和綠豆在小飛蓬的莖葉水浸液作用下,幼苗鮮重受到了“低促高抑”的雙重效應(yīng)。而柱花草和莧菜則受到了小飛蓬水浸液的抑制作用,且作用效果隨濃度增大而增強,當(dāng)濃度增至0.15 g/mL時,達顯著水平,RI值分別為-0.350和-0.423。而根部水浸液對蘿卜、綠豆和莧菜這3種受體植物幼苗的鮮重也表現(xiàn)出了相似的雙重效應(yīng)。

2.3小飛蓬水浸液對受體植物化感作用的綜合效應(yīng)

2.3.1小飛蓬水浸液化感作用影響因素分析為了分析小飛蓬不同部位水浸液對不同受體植物的化感作用的影響因素,并探究其二者之間是否存在互作效應(yīng),將相同測試指標(biāo)不同濃度處理的RI之間的平均值進行雙因素方差分析,得到小飛蓬不同部位水浸液對不同受體植物的化感作用方差分析,結(jié)果(表6)可知,小飛蓬水浸液對不同受體植物之間的化感作用效應(yīng)的強弱差異顯著,而小飛蓬不同部位之間的化感作用強弱差異并不明顯,且與受體植物之間并未表現(xiàn)出互作效應(yīng)。

2.3.2小飛蓬不同部位水浸液對受體植物化感作用的綜合效應(yīng)由表7可得出,不同濃度小飛蓬水浸液處理的綜合效應(yīng)的大小表現(xiàn)為RICK>RI0.05>RI0.10>RI0.15>RI0.20>RI0.25,即隨著水浸液濃度的增大,受體植物受到的抑制作用不斷增強。從整體上看,莧菜受到的抑制效果最為明顯,柱花草次之。

綜合以上試驗結(jié)果,下一步進行活性物質(zhì)的初步分離時,采用的是小飛蓬全草,而選用受體種子的萌發(fā)率、萌發(fā)指數(shù)和幼苗的根長作為其活性評價的主要標(biāo)準(zhǔn)。

2.4小飛蓬水浸液活性組分初步分離結(jié)果

不同萃取相的萃取物處理受體植物的種子和幼苗,得到小飛蓬不同萃取相的萃取物對受體植物的影響,結(jié)果見表8。由表8可以看出,在供試濃度上,小飛蓬乙酸乙酯相萃取物對綠豆、蘿卜和柱花草這3種受體植物種子的萌發(fā)和幼苗的生長率均表現(xiàn)出了極顯著的抑制效果。在乙酸乙酯相萃取物的處理液中,蘿卜和柱花草這2種受體植物種子萌發(fā)率受到的抑制率分別為98.37%和100.00%,即柱花草種子經(jīng)其處理后無法萌發(fā)。與對萌發(fā)率的作用一致,綠豆、蘿卜和柱花草這3種受體植物種子的萌發(fā)指數(shù)受乙酸乙酯相萃取物的抑制效果均表現(xiàn)極顯著。乙酸乙酯相萃取物同樣抑制了綠豆、蘿卜和柱花草這3種受體植物幼苗根的生長,效果均達到了極顯著水平,抑制率分別是42.15%、93.09%和84.84%。

所以,在小飛蓬的水浸液中所含有的化感物質(zhì),大部分能溶解在乙酸乙酯中。

3討論

王璞等[6]認為,化感物質(zhì)生物活性的大小首先由化感物質(zhì)的濃度決定。本試驗結(jié)果表明,小飛蓬的水浸液對5種受體植物的種子萌發(fā)以及幼苗生長均表現(xiàn)出了較強的化感作用,且作用效果隨濃度的增大而增強,與前人研究的結(jié)果相符。小飛蓬水浸液抑制了受體植物種子的萌發(fā),其抑制效果不僅表現(xiàn)在抑制受體植物種子的萌發(fā)率,更大程度上表現(xiàn)為延遲受體植物種子的萌發(fā)速率。如0.20 g/mL小飛蓬莖葉水浸液對莧菜種子的萌發(fā)率和萌發(fā)速率的RI值分別為-0.822和-0.892。除綠豆和黃瓜外,小飛蓬水浸液對受體植物幼苗的生長表現(xiàn)出了明顯的抑制作用。當(dāng)根部水浸液的濃度為0.15 g/mL時,這3種受體植物幼苗的根都受到了極顯著的抑制,其RI值分別為-0.399、-0.622和-0.667。雖然個別相對低濃度的水浸液促進了幼苗期的受體植物的莖生長或鮮重增大,但其對受體植物幼苗根的生長表現(xiàn)出抑制作用,且作用效果更為明顯。

據(jù)研究,影響植物化感作用大小的因素有許多方面,如遺傳因素[7,8]、環(huán)境因素[9]等。其中遺傳因素主要是指植物類型、品種等之間的差異。如在本試驗中,從單獨對應(yīng)的處理來看,小飛蓬根部的水浸液對部分受體植物表現(xiàn)出比莖葉水浸液更強的化感效應(yīng),但對另一種受體植物所表現(xiàn)的情況則是相反的。綜合分析了小飛蓬不同部位的水浸液對不同受體植物之間化感作用的差異,結(jié)果表明小飛蓬植株中,不同受體植物之間對小飛蓬植株水浸液的反應(yīng)表現(xiàn)顯著差異,即不同受體植物對小飛蓬化感作用強弱的體現(xiàn)有影響,其中莧菜受到的抑制效果最為明顯,柱花草次之。然而,小飛蓬莖葉水浸液和根部水浸液對供試的5種受體植物所表現(xiàn)的化感作用不存在明顯差異,且其與受體植物之間也并未存在著相互效應(yīng)。故而,欲比較幾種植物之間,或是同一種植物不同部位之間的化感活性差異,需進行全面的分析。

小飛蓬水浸液活性組分初步分離及生物測定的結(jié)果表明,小飛蓬水浸液中,具有化感活性的物質(zhì)多能溶解于乙酸乙酯中,這與高興祥等[2]的研究結(jié)果具有一定的相似性。下一步的工作應(yīng)對小飛蓬水浸液乙酸乙酯相萃取物進行純化分離,可以從中得到小飛蓬產(chǎn)生化感作用的活性單體或組分。

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