復(fù)方中藥制劑“芪苓湯”對(duì)人工感染雞大腸桿菌病的治療試驗(yàn)

摘要：為了觀察復(fù)方中藥制劑“芪苓湯”對(duì)人工感染雞大腸桿菌病的治療效果，以大腸桿菌Ｏ７８株人工感染１２日齡海蘭褐公雛致其發(fā)病，于接種后灌服不同劑量的復(fù)方中藥制劑。結(jié)果表明，分別按每只０．０５、０．１0、０．２0ｍＬ“芪苓湯”的劑量給藥，對(duì)人工感染雞大腸桿菌病均有較好的治療作用，各組治愈率分別為７０．００％、８３．３３％、９０．００％，中、高劑量組與氧氟沙星組療效相當(dāng)。同時(shí)可顯著或極顯著（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）提高病雞的增重，但與健康組比較差異不顯著（Ｐ＞０．０５）。上述結(jié)果表明，“芪苓湯”對(duì)人工感染雞大腸桿菌病療效顯著，其作用優(yōu)于或相當(dāng)于氧氟沙星。

關(guān)鍵詞：復(fù)方中藥制劑；雞大腸桿菌病；治療

中圖分類號(hào)：Ｓ８５３．７３文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：１００７－２７３Ｘ（２０11）09-0013-02

雞大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌所引起的傳染病，不僅可單獨(dú)發(fā)生，而且可與慢性呼吸道疾病、新城疫、傳染性支氣管炎及傳染性法氏囊炎等混合感染。近年來(lái)，雞大腸桿菌病的發(fā)病率越來(lái)越高，再加上其血清型眾多，給防制工作帶來(lái)了極大困難，給養(yǎng)雞業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。該病迄今尚無(wú)有效的疫苗用于防控，臨床常用抗生素和其他化學(xué)抗菌藥物進(jìn)行治療，但因目前病原耐藥性日趨嚴(yán)重，藥物殘留危害人體健康而受到強(qiáng)烈關(guān)注與質(zhì)疑，因而，尋求新的防治藥物已成當(dāng)務(wù)之急［１－４］。

經(jīng)參考各種資料［５］，組成中藥配方，制成了復(fù)方中藥制劑并命名為“芪苓湯”，為觀察其治療人工感染雞大腸桿菌病的有效性，本試驗(yàn)采用大腸桿菌Ｏ７８菌株人工感染１２日齡海蘭褐公雛致其發(fā)病，然后在其飲水中加入不同劑量的復(fù)方中藥制劑，觀察該藥治療人工感染性雞大腸桿菌病的效果。該研究成果將為臨床上雞大腸桿菌病的防治提供一定的理論依據(jù)，為大腸桿菌病的診治提供理論支撐。

１材料與方法

１．１材料

１．１．１復(fù)方中藥制劑由黃芪３０ｇ、茯苓２０ｇ、香附２０ｇ組成。將以上中藥烘干后，準(zhǔn)確稱取組方配伍中所需劑量，加入蒸餾水（１∶１０，Ｍ／Ｖ）浸泡３０ｍｉｎ煎煮，煮沸后文火煎１ｈ，用4層紗布過(guò)濾，藥渣加入沸騰蒸餾水（１∶８，Ｍ／Ｖ），煎煮１ｈ，過(guò)濾，合并兩次藥液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至藥液中生藥含量為１．０ｇ／ｍＬ，置于４℃冰箱保存，備用。

１．１．２菌株及標(biāo)準(zhǔn)血清大腸桿菌Ｏ７８株與大腸桿菌Ｏ抗原定型血清，購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

１．１．３試劑ＬＢ培養(yǎng)基、肉湯培養(yǎng)基購(gòu)自青島海博生物技術(shù)有限公司。

１．１．４試驗(yàn)動(dòng)物未經(jīng)雞大腸桿菌疫苗免疫的１日齡健康海蘭褐公雛210只，飼喂無(wú)抗生素添加劑的飼料，自由采食與飲水。

１．２方法

１．２．１大腸桿菌感染液制備將凍干的大腸桿菌Ｏ７８于室溫下融化，無(wú)菌條件下劃線接種于ＬＢ培養(yǎng)基上，３７℃培養(yǎng)２４ｈ后挑取生長(zhǎng)良好的單個(gè)菌落接種于肉湯培養(yǎng)基中，３７℃培養(yǎng)２４ｈ。用倍比稀釋進(jìn)行計(jì)數(shù)，使細(xì)菌濃度為１．０×１０９ＣＦＵ／ｍＬ，４℃保存?zhèn)溆谩?/p>

１．２．２試驗(yàn)雞分組與處理將供試雞隨機(jī)分為７組，每組３０只。至１２日齡時(shí)，除健康組外每組雞只均胸肌注射大腸桿菌培養(yǎng)液０．２ｍＬ／只（１．０×１０９CFU／ｍＬ）攻毒，各組動(dòng)物分別進(jìn)行處理，為準(zhǔn)確把握給藥劑量，采用灌胃方式給藥，各組不同劑量的藥物稀釋成同體積灌服。其中，Ａ組為健康對(duì)照組，隔離飼養(yǎng)，不攻毒，不用藥；Ｂ組為感染對(duì)照組，攻毒不給藥；Ｃ、D、Ｅ組分別為中藥低、中、高劑量治療組，攻毒感染發(fā)病后，分別按每只０．０５、０．１０、０．２０ｍＬ復(fù)方中藥制劑的劑量給藥；Ｆ組為氧氟沙星組，攻毒感染發(fā)病后，按每１ｋｇ體重０．１ｍＬ氧氟沙星的劑量，以溫開(kāi)水溶解后灌服，每日１次，連續(xù)５ｄ。

１．２．３結(jié)果記錄分別計(jì)算各組的發(fā)病率、感染死亡率、治愈率、增重率等。計(jì)算公式如下：發(fā)病率＝組內(nèi)發(fā)病數(shù)／該組試驗(yàn)雞數(shù)×１００％；感染死亡率＝組內(nèi)死亡數(shù)／該組試驗(yàn)雞數(shù)×１００％；治愈率＝組內(nèi)治愈數(shù)／該組試驗(yàn)雞發(fā)病數(shù)×１００％；增重率＝組內(nèi)最終平均體重－初始平均體重／初始平均體重×１００％。

１．２．４統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)以ＳＰＳＳ１２．０軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以（ｘ±s）表示。

２結(jié)果

２．１人工感染發(fā)病情況

試驗(yàn)雞攻毒２ｈ后，各組雞開(kāi)始陸續(xù)發(fā)病，最初出現(xiàn)精神沉郁，活動(dòng)減少，蹲伏或擁擠扎堆。４ｈ后除中藥預(yù)防組僅有少數(shù)雞只發(fā)病外，其余各組全部發(fā)病。病雞精神萎靡，閉目呆立，或扎堆而臥，羽毛蓬亂，食欲減退，排黃色或黃綠色稀便；部分雞呼吸困難，張口伸頸，氣促喘粗；有的雞站立不穩(wěn)，腿翅無(wú)力或癱軟臥地。攻菌８ｈ后開(kāi)始有雞死亡，１０ｈ后死亡數(shù)增加，２４～４８ｈ后達(dá)死亡高峰，７２ｈ后死亡明顯減少。各組雞發(fā)病和死亡情況見(jiàn)表１。

２．２剖檢變化

病死雞鼻腔及口腔存有泡沫狀液體，肛門及其周圍羽毛粘附糞污，早期死亡雞剖檢僅見(jiàn)急性敗血癥病變。中后期死亡病雞出現(xiàn)典型的心包炎、肝周炎、氣囊炎病變。心包腔積有淡黃色渾濁滲出液，心包壁增厚，不透明，附著纖維素性滲出物，嚴(yán)重的可見(jiàn)黃色干酪樣物質(zhì)；肝臟腫大，表面覆蓋灰白色纖維素性滲出物，容易剝離，肝實(shí)質(zhì)偶有灰色壞死區(qū)；氣囊壁混濁，不均勻增厚，呼吸面被覆干酪樣滲出物；嗉囊內(nèi)容物充實(shí)，酸臭氣味濃烈；腺胃、肌胃內(nèi)容物有酸臭氣味；十二指腸、空腸、回腸、盲腸等黏膜出血、脫落，腸系膜充血、出血；腎臟腫大充血。

２．４“芪苓湯”對(duì)人工感染雞大腸桿菌病的治療作用

雛雞接種大腸桿菌發(fā)病后，“芪苓湯”治療組分別按每只０．０５、０．１０、０．２０ｍＬ的劑量稀釋成同體積灌服給藥，使病情很快得到控制。８ｈ后，病情逐漸趨于緩解，病雞精神漸顯活潑，活動(dòng)增加；２４ｈ后飲、食欲明顯好轉(zhuǎn)；４８ｈ后病雞臨床癥狀基本消失，飲、食欲基本恢復(fù)正常。各治療組療效均極顯著優(yōu)于感染對(duì)照組（Ｐ＜０．０１）。其中，低劑量治療組療效顯著低于氧氟沙星治療組（Ｐ＜０．０５），其余各治療組間無(wú)明顯差異（Ｐ＞０．０５）（表１）。試驗(yàn)期間沒(méi)有發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)雞對(duì)復(fù)方中藥制劑有明顯的不良反應(yīng)。

２．５“芪苓湯”對(duì)試驗(yàn)雞增重的影響

試驗(yàn)雞體重變化情況見(jiàn)表２。

由表２可見(jiàn)，各組雞在１２日齡時(shí)平均體重差異不顯著（Ｐ＞０．０５）。在１７日齡各組雞停藥后，感染對(duì)照組增重率極顯著低于其他各組（Ｐ＜０．０１）；“芪苓湯”高劑量組增重率極顯著高于其他各組（Ｐ＜０．０１）；中劑量組增重率與健康對(duì)照組無(wú)顯著差異（Ｐ＞０．０５），但顯著高于氧氟沙星治療組（Ｐ＜０．０５），同時(shí)極顯著高于感染對(duì)照組和低劑量治療組（Ｐ＜０．０１）；低劑量治療組增重率極顯著高于感染對(duì)照組，同時(shí)極顯著低于其余各組（Ｐ＜０．０１）。

３討論

（１）研究證實(shí)，黃芪對(duì)肺炎雙球菌、痢疾桿菌、溶血性鏈球菌Ａ、Ｂ、Ｃ及金黃色、檸檬色、白色葡萄球菌等均有抑制作用，對(duì)流感仙臺(tái)ＢＢ１病毒及口腔病毒的致病作用也有一定的抑制作用，但無(wú)直接滅活作用［６］。黃芪可促進(jìn)機(jī)體體液免疫和細(xì)胞免疫功能。茯苓多糖具有增強(qiáng)免疫的作用，既可增強(qiáng)細(xì)胞免疫，又可增強(qiáng)體液免疫。羧甲基茯苓多糖還具有免疫調(diào)節(jié)、保肝降酶、間接抗病毒、誘生和促誘生白細(xì)胞調(diào)節(jié)素等多種生理活性。茯苓具有抗菌作用，對(duì)金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、炭疽桿菌、綠膿桿菌、甲型鏈球菌、大腸桿菌、乙型鏈球菌等均有抑制作用［７］。香附提取物對(duì)由變形鏈球菌引起的齲齒有預(yù)防作用，對(duì)念珠菌性腹膜炎有治療作用，香附根莖提取的總黃酮類和乙酸乙酯提取部分對(duì)腸炎沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和糞腸球菌有顯著抑制作用［８－１０］。

（２）人工感染雞發(fā)病后，按每只０．０５、０．１０、０．２０ ｍＬ的劑量灌服“芪苓湯”，每日１次，連用５ｄ，可使病情很快得到控制，其治愈率分別為７０．００％、８３．３３％、９０．００％，表明復(fù)方中藥制劑“芪苓湯”對(duì)雞大腸桿菌病具有較好的治療作用。每只０．２０ｍＬ的高劑量“芪苓湯”內(nèi)服也沒(méi)有引起明顯的不良反應(yīng)，表明該制劑具有較高的臨床用藥安全性。

（３）試驗(yàn)雞感染大腸桿菌Ｏ７８后，其生長(zhǎng)發(fā)育受到嚴(yán)重影響，“芪苓湯”內(nèi)服在一定程度上抵消了大腸桿菌感染對(duì)雞生長(zhǎng)發(fā)育的影響，與感染對(duì)照組相比，可極顯著提高病雞的增重率（Ｐ＜０．０1），其中以高劑量組增重效果最明顯，其增重率極顯著高于其他各組（Ｐ＜０．０１），進(jìn)一步從體重變化角度證明了復(fù)方中藥制劑“芪苓湯”對(duì)人工感染雞大腸桿菌病的治療作用。

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