獨一味環烯醚萜苷外用止血作用研究

張泉龍，邱建國，李茂星，尉麗力，何希瑞，賈正平

(蘭州軍區總醫院藥材科，全軍高原環境損傷防治重點實驗室，蘭州 730050)

藏藥獨一味［Lamiophlomis rotata(Benth．)Kudo］為唇形科獨一味屬植物［1］，其具有活血鎮痛、化瘀止血之功效，用于治療各種外科手術后的刀口疼痛、出血，外傷骨折，筋骨扭傷，風濕痹痛以及崩漏、痛經、牙齦腫痛、出血等［2-4］。現代藥理學研究顯示，獨一味具有止血、鎮痛、抗炎、促進傷口愈合以及保護神經元的作用［5-7］，并且發現獨一味總環烯醚萜苷為其止血作用有效部位［8］。目前獲得國家藥品批準文號的獨一味制劑劑型有片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、分散片、咀嚼片、滴丸劑等口服劑型，獨一味的外用制劑很少，但臨床已有將獨一味膠囊外用于治療鼻出血，拔牙后出血的應用報道，且止血療效顯著［9-10］。筆者在本課題組前期研究的基礎上，將獨一味水提物及其有效部位總環烯醚萜苷制成外用散劑，考察其外用止血效果，為新型止血藥物的研制提供藥效學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試藥 獨一味水提物購自甘肅省瑪曲縣黃河首曲藥源開發有限公司;獨一味總環烯醚萜苷由本實驗室制備，純度＞56%;云南白藥(云南白藥集團股份有限公司，批號:20040320);淀粉。

1.1.2 實驗動物 昆明種小鼠80只，雄性，體質量20～25 g，購自甘肅省生物制品研究所;健康SD大鼠30只，雄性，體質量200～250 g，單籠飼養，自由飲水進食，由蘭州大學動物中心提供，動物合格證號:SCXK(甘)2009-0004。新西蘭大耳白兔，雌雄各半，由蘭州生物制品所提供，動物合格證號:SCXK(甘)2009-0012。

1.2 實驗方法

1.2.1 小鼠斷尾出血模型 參考文獻［11］的方法。將昆明種小鼠隨機分為4組，即淀粉組、獨一味水提物組、總環烯醚萜苷組、云南白藥組，每組20只。禁食12～16 h后，將小鼠置于固定器中，使其尾部垂直，在距尾尖1 cm處剪斷，待有血流出時，將尾巴插入受試藥散中浸沒30 s，然后每隔10 s用濾紙輕輕吸去血滴1次，至血液自然停止(濾紙吸時無血)，計算從剪斷尾巴至止血的時間。若出血量多，可以稱濾紙的質量以計算出血量。

1.2.2 兔腹主動脈、耳中動脈出血模型 參考文獻［12］的方法。將新西蘭大耳白兔隨機分為4組，即淀粉組、獨一味水提物組、總環烯醚萜苷組、云南白藥組，每組8只。將已禁食24 h的動物用3%戊巴比妥鈉0.9%氯化鈉溶液9 mL耳緣靜脈麻醉，固定，手術暴露腹主動脈，眼科剪于腹主動脈縱向剪開創口約2 mm。將藥物粉末0.5 g均勻涂灑在創口表面及四周，上鋪一層紗布5 cm×10 cm，將砝碼200 g外包薄塑料膜壓于創口之上，2 min后移除砝碼，觀察是否止血，若未止血則繼續以砝碼壓住創面，直到止血為止，記錄止血時間。將已禁食24 h的動物麻醉后，固定于兔固定架上，固定耳朵并暴露耳中動脈，手術刀割開約2 mm長創口，將藥物粉末0.5 g均勻涂灑在創口表面及四周，上輔一層紗布5 cm×10 cm，將砝碼200 g外包薄塑料膜壓于創口之上，2 min后移除砝碼，觀察是否止血，若未止血則繼續以砝碼壓住創面，直到止血為止，記錄止血時間。

1.2.3 大鼠肝損傷模型 參考文獻［12］的方法。SD大鼠28只，隨機分為淀粉組、獨一味水提物組、總環烯醚萜苷組、云南白藥組，每組7只。大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉40mg·kg-1，麻醉后仰面固定于手術臺上。腹部去毛，用酒精棉球消毒。沿腹中線打開腹腔，取出肝左下葉，用10號手術刀造創面0.8 cm×0.2 cm，擦去血液，立即將藥物0.05 g撒于創口，不進行任何處理，觀察10 min，以不再滲血為“止血”，記錄止血時間。

2 結果

2.1 小鼠斷尾出血時間 實驗結果表明，獨一味總環烯醚萜苷組停止出血時間為(64.8±25.0)s，獨一味水提物組為(97.2±44.0)s，云南白藥組為(105.1±65.0)s，淀粉對照組為(124.8±43.2)s。獨一味總環烯醚萜能明顯縮短小鼠斷尾出血時間，與淀粉對照組比較差異有統計學意義(P＜0.05)，獨一味水提物組和云南白藥組與淀粉對照組比較差異無統計學意義(P ＞0.05)。

2.2 兔腹主動脈和耳中動脈出血時間 兔腹主動脈和耳中動脈切口模型用4種不同方法處理后，止血時間結果見表1。獨一味總環烯醚萜苷在大動脈、大量出血時的止血作用更好。

表1 4組兔腹主動脈和耳中動脈創傷止血實驗結果Tab．1 The hemostatic effects on the trauma of rabbit abdom inal aorta and ears artery in 4 groups ±s

表1 4組兔腹主動脈和耳中動脈創傷止血實驗結果Tab．1 The hemostatic effects on the trauma of rabbit abdom inal aorta and ears artery in 4 groups ±s

與淀粉對照組比較，*1 P＜0.01;與云南白藥組比較，*2 P＜0.01，*3 P ＜0.05Compared with starch group，*1 P ＜ 0.01;Compared with yunnan baiyao powder group，*2 P ＜0.01，*3 P ＜0.05

組別 兔/只兔腹主動脈創傷止血時間/min兔耳中動脈創傷止血時間/s獨一味水提取物組 8 5.7±3.9*1*2 159.9±48.7*1獨一位總環烯醚萜苷組 8 3.2±1.9*1*3 110.0±37.1*1*2云南白藥組 8 8.9±4.7*1 185.6±57.3*1淀粉對照組8 20.3±6.5 378.2±60.3

2.3 大鼠肝臟損傷出血時間 實驗結果表明，總環烯醚萜苷組平均止血時間為(93.8±39.5)s，獨一味水提物組為(101.1±25.9)s，云南白藥組為(74.0±26.3)s，淀粉對照組為(152.8±47.1)s。肝組織止血實驗結果顯示，獨一味總環烯醚萜苷、云南白藥和獨一味水提物對肝臟的止血時間均明顯縮短，與淀粉對照組比較差異有統計學意義(P＜0.01)。云南白藥的平均止血時間明顯短于獨一味總環烯醚萜苷。

3 討論

獨一味為藏區重要的止血、鎮痛良藥，目前將其開發成片劑、膠囊等劑型應用廣泛。其主要含包括黃酮類、環烯醚萜類、苯乙醇苷類、揮發油及其他類［13］。獨一味水提物及其有效部位總環烯醚萜苷顯示出很好的止血作用，能夠提高血漿纖維蛋白原含量［8］。據其他研究結果顯示，獨一味還具有促進傷口愈合、鎮痛抗炎的作用，因此具有很好的開發價值。

研究結果表明，與對照組相比，外用獨一味總環烯醚萜苷或水提物，無論是對小鼠斷尾、兔耳中動脈、腹主動脈，還是對肝組織出血都能明顯縮短出血時間，但總環烯醚萜苷組優于水提物。由于云南白藥組出血時間明顯長于兩個給藥組，故止血作用很可能是由于獨一味的成分，而不是粉劑本身。在使用中發現，獨一味總環烯醚萜苷具有很強的吸水性，可促進血液凝固，且吸水后呈糊狀，黏附性增強，能很好黏附在傷口，從而達到止血目的。但作為外用制劑，其止血機制是否還與提高血小板聚集率、收縮血管有關有待進一步研究。

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