廣東地區2007～2009年禽源大腸桿菌的耐藥性演變

朱恒乾,陳朝喜,廖曉萍

(1.華南農業大學獸醫學院廣東省獸藥研制與安全評價重點實驗室,廣東廣州510642;2.西南民族大學生命科學與技術學院,四川成都610041)

大腸桿菌是禽類肉食品的主要污染源之一,對禽類肉制品的質量有著十分重要的影響。近年來,對于抗生素在食用動物上的使用所導致的耐藥性的研究逐漸增加,并且這種耐藥性可以通過食物鏈傳給人體內的微生物群[1],因此,禽源大腸桿菌耐藥性的產生可能導致嚴重的公共衛生問題。國外對食品源大腸桿菌已有較完善的監測系統,其中,德國[2]、日本[3]、西班牙[4]、美國[5],法國[6]及歐盟[7]都有細菌監測結果的報道,而國內雖有大量的畜禽病原菌耐藥性的研究報道[8],但我國對食品源病原菌耐藥性監測仍處于初級階段。隨著細菌耐藥性的產生和發展,結合抗菌藥物的高使用頻率和用量加大,導致細菌耐藥性問題越來越突出[9]。研究證明,細菌耐藥性的體外試驗對確定藥物的日允許攝入量(ADI)是很有必要的[10]。本研究針對廣東省10多個地市多家禽類養殖場2007年至2009年分離得到的378株大腸桿菌進行耐藥性研究,以分析目前禽類養殖業臨床用藥情況及耐藥性變遷的發展趨勢,為臨床合理使用抗生素提供參考,并對我國食品源細菌耐藥性提供一定的監測依據。

1 材料與方法

1.1 樣品來源與質控菌株 2007～2009年從廣東10多個地市多家禽類養殖場分離到378株大腸桿菌。E.coli 25922為藥物敏感性測定質控菌。

1.2 藥品、試劑及培養基 腸桿菌科細菌生化編碼鑒定管購自杭州天和微生物試劑有限公司。鹽酸恩諾沙星、環丙沙星、左氟沙星購自廣州威佳科技有限公司;鏈霉素、卡那霉素、安普霉素、慶大霉素、氯霉素、氟苯尼考、頭孢曲松鈉購自中國獸醫藥品監察所;頭孢噻呋鈉、四環素、磺胺甲惡唑購自杭州天和微生物試劑有限公司。LB肉湯、MH肉湯、MH瓊脂和麥康凱瓊脂購自廣東環凱微生物科技公司。

1.3 細菌的分離鑒定 將樣品增菌后接種于麥康凱瓊脂培養,挑取紅色不透明中等大小可疑菌落進行純化培養,并用腸桿菌科細菌生化編碼鑒定管進行鑒定。

1.4 藥物敏感性檢測 根據臨床與試驗標準協會(CLSI)所推薦的藥物稀釋范圍稀釋藥液,采用瓊脂稀釋法進行藥物敏感性檢測。參照CLSI標準進行細菌對藥物的敏感性判定。

2 試驗結果

2.1 細菌分離鑒定結果 從514個樣本中分離鑒定得到378株大腸桿菌,分離率為73.54%。

2.2 數據統計 378株臨床分離株對15種被測藥物的耐藥率見表1;多重耐藥情況見表2;半數抑菌濃度(MIC)和有效抑菌濃度(MIC)見表3。

表1 378株臨床分離大腸桿菌對15種抗生素的耐藥率統計

表2 378株受試菌對15種抗菌藥物的多重耐藥

表3 15種抗生素對受試菌的MIC50、MIC90統計 (μg/m L)

3 討論

本試驗對廣東地區多個禽類養殖場進行禽源大腸桿菌的耐藥性調查,數據表明耐藥性變化情況較明顯。

3.1 臨床分離株對15種抗生素的耐藥變化情況綜合藥敏數據可以得出,細菌對所選用抗生素的耐藥率變化情況可以分為三種：(1)耐藥率逐年上升。屬于這種情況的藥物有恩諾沙星、左氧氟沙星、鏈霉素、氟苯尼考和磺胺甲惡唑,其中增幅最高的為鏈霉素(18.08%)。(2)耐藥率逐年下降。有這種變化趨勢的藥物有環丙沙星、頭孢曲松、頭孢噻呋和四環素,降幅最大的為頭孢噻呋(8.75%)。(3)耐藥率表現為2008年最高,2009年次之,2007年最低,這些藥物包括阿米卡星、安普霉素、慶大霉素和多西環素。

3.2 受試菌株對15種抗生素多重耐藥情況 由多重耐藥數據統計結果可以看出,細菌的耐藥性較嚴重,耐藥譜主要集中在5耐至12耐。從耐藥譜可知,2007年多重耐藥率為49.17%,2008年為52.02%,而2009年已達到67.50%。統計數字說明,臨床分離的禽源大腸桿菌多重耐藥率在逐年上升。細菌對各種抗生素均有一定的耐藥性,表現為多重耐藥,這提示我們臨床用藥已不能僅僅使用單一藥物來治療細菌感染。由實地調查得出,養殖場中用藥情況復雜,復雜的用藥情況一方面有利于疾病的治療,但同時,受試菌的多重耐藥性的產生與臨床上復雜的用藥情況有密切的關系,用藥情況越復雜越容易導致多重耐藥性的產生。

3.3 MIC50與MIC90數據分析 由表3可知,15種抗生素的MIC50數值變化幅度較小,多數表現為逐年2倍的增長趨勢,而MIC90多表現為逐年4倍的增長趨勢。抑菌濃度的逐年提高可以說明細菌對多數抗生素的耐藥水平有一定程度的提高。

3.4 與其他同類耐藥性研究的比較 日本食用動物源大腸桿菌耐藥性的監測報告指出,細菌對磺胺間二甲氧芐啶、土霉素、鏈霉素、氨芐西林和卡那霉素耐藥率高,雛雞源大腸桿菌對氟喹諾酮類藥物的耐藥率達10%。近年的細菌的耐藥呈下降趨勢,但雛雞源大腸桿菌耐藥性仍有所提高。

近年來,國內也有大量的食品動物源細菌耐藥性調查試驗。宋立等[8]對國內不同地區禽源大腸桿菌的耐藥性試驗分析發現,細菌對氟喹諾酮類藥物的耐藥率為57.1%至66.7%,高于本試驗數據。本試驗中細菌對其的耐藥率約為10%,屬低水平耐藥。本試驗中的數據與其他試驗不同的原因可能是所調查的地區所使用的飼料和飼養條件有一定的差異,具體原因有待進一步調查研究。

4 結語

目前,控制耐藥性產生的主要手段就是規范用藥和減少抗生素的用量[12]。本試驗首次對廣東省10個地市進行禽源大腸桿菌耐藥性變遷進行報道,所研究地區的大腸桿菌耐藥性率雖低于其他相關報道,但可以說明,該地區禽源大腸桿菌的耐藥水平也已達到較為嚴重的程度,提示我們應加強食品源細菌耐藥性監測,并對藥物的臨床應用進行監管,以避免藥物的濫用和無指征用藥。

[1] Dallal M M S,Mohammad M P,Rezadehbashi M,et al.Prevalence and antimicrobial resistance profiles of Salmonella serotypes,Campylobacter and Yersinia spp.isolated from retail chicken and beef,Tehran,Iran[J].Food Control,2010,21(4)：388-392.

[2] Wallmann,Juergen,Schroeter,et al.National antibiotic resistance monitoring in veterinary pathogens from sick foodproducing animals：The German programme and results from the 2001 pilot study[J].International Journal of Antimicrobial Agents,2003,22(4)：420-428.

[3] Kijima-Tanaka M,Ishihara K,Morioka A,et al.A national surveillance of antimicrobial resistance in Escherichia coli isolated from food-producing animals in Japan[J].Journal of Antimicrobial Chemotherapy,2003,51(2)：447-451.

[4] Cuevas O,Cercenado E,Goyanes M,et al.Present situation of antimicrobial resistance of Staphy lococcus in Spain：Six th Nationwide Prevalence Study and the in vitro activity of new antimicrobial agents[J].International Journal of Antimicrobial Agents,2007,29(Suppl.2)：521-521.

[5] Ray K A,Warnick L D,Mitchell R M,et al.Prevalence of antimicrobial resistance among Salmonella on midwest and northeast USA dairy farms[J].Preventive Veterinary Medicine,2007,79(2-4)：204-223.

[6] Payot S,Dridi S,Laroche M,et al.Prevalenceand antimicrobial resistance of Campylobacter coli isolated from fattening pigs in France[J].Veterinary Microbiology,2004,101(2)：91-99.

[7] Hend rik sen RS,Mevius D J,Schroeter A,et al.Prevalence of antimicrobial resistance among bacterial pathogens isolated from cattle in different European countries：2002-2004[J].Acta Veterinaria Sandinavica,2008,50：28.

[8] 宋立,寧宜寶,張秀英,等.中國不同地區家禽大腸桿菌血清型分布和耐藥性比較研究[J].中國農業科學,2005,38(7)：1 466-1 473.

[9] 付欣艷,王亮,邱剛.抗生素在獸醫臨床上的合理應用[J].中國獸醫雜志,2007,43(6)：109-114.

[10]Wagner R D,Johnson S J,Cerniglia C E.In vitro model of colonization resistanceby the enteric microbiota：Effects of antimicrobial agents used in food-producing animals[J].Antimicrobial Agents and Chemotherapy,2008,52(4)：1230-1237.

[11]Kojima A,Asai T,Ishihara K,et al.National Monitoring for Antimicrobial Resistance among Indicator Bacteria Isolated from Food-Producing Animals in Japan[J].Journal of Veterinary Medical Science,2009,71(10)：1301-1308.

[12] Grugel C,Wallmann J.Antimicrobial resistance in bacteria from food-producing animals：Risk management tools and strategies[J].Journal of Veterinary Medicine Series B-Infectious Diseases and Veterinary Public Health,2004,51(8-9)：419-421.