反相高效液相色譜法測定化妝品中的亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚

馬 杰， 孫 興 權， 林 維 宣

（1.大連工業大學 生物工程學院，遼寧 大連 116034；2.遼寧省出入境檢驗檢疫局，遼寧 大連 116001）

0 引 言

隨著工業的不斷發展，地球大氣臭氧層遭到了一定的破壞，更多的紫外線到達地面，由此人們對紫外線防護也越來越重視，希望得到UVB 和UVA［1］的全波段的防護。添加防曬劑的化妝品能有效地保護人體免受過量紫外線輻射，但化妝品中過量添加防曬劑會對人體健康產生危害［2］，如長期使用皮膚粗糙，引起光敏性皮炎等［3］。介于以上原因世界各國都對化妝品中添加防曬劑的量做出了限制，我國2007版《化妝品衛生規范》對防曬劑種類和用量也作了詳細限制［4］。亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚（UV-360）是一種性能良好的新型防曬劑，它對UVA 和UVB波段的紫外線都有良好的吸收，具有穩定性強等優點［5］。衛生部2007年頒布的《化妝品衛生規范》對其只作了限量規定［4］，但未提出很好的檢測方法。國內也沒有相關液相色譜檢測方法的報道，作者根據亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚自身特殊的物理化學特性［6］，通過查閱大量相關資料［7-10］及大量實驗，以甲醇-水為流動相，建立了在15min內測定防曬劑亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚的反相高效液相色譜的分析方法。

1 材料與方法

1.1 儀 器

Agilent 1100高效液相色譜儀；KQ-400KDV型超聲波清洗器；Mettler XS205DU 分析天平；IKA MS2型漩渦振蕩器；SIGMA 2-16K 高速冷凍離心機；Agilent 0.45μm 濾膜。

1.2 試 劑

亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚，純度大于99.9%；甲醇、四氯化碳為色譜純；水為二次去離子高純水。所有溶液在進行高效液相色譜分析前都要經0.45μm 濾膜過濾及超聲波脫氣。

1.3 溶液配制

1.3.1 標準溶液配制

準確稱取亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚（UV-360）標準品0.010 0g，于10.0mL 容量瓶中，用3.0mL 四氯化碳溶解，再用流動相V（甲醇）∶V（水）=98∶2 定容，然后取此溶液各1.00mL于10.0mL 容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，過濾待進樣。

1.3.2 樣品提取液的配制

按V（四氯化碳）∶V（甲醇）=3∶7配制成混合溶液，待用。

1.4 樣品處理

準確稱取0.500 0g化妝品樣品于10mL容量瓶中，用“1.3.2”樣品提取液定容，振蕩超聲提取10 min，4 000r／min 離 心5 min，取 上 清 液1.0mL用流動相定容至100.0 mL，然后用0.45μm濾膜過濾，供反相高效液相色譜法分析測定，進樣5μL。記錄峰面積，按外標法計算。

1.5 色譜條件

色 譜 柱：WATERS Symmetryshield.C18（250mm×4.6mm，5μm）；進樣體積5μL；流動相V（甲醇）∶V（水）=98∶2，流速1.0mL／min；紫外檢測波長360nm；檢測靈敏度0.05Aufs；柱溫35 ℃。

2 結果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 標準及樣品前處理

亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚非水非油溶性的性質導致其在一般的有機溶劑或水中的溶解度較差。實驗驗證，其在四氯化碳中有較大溶解度，故選擇了四氯化碳來溶解樣品，再用流動相定容，有利于消除使用其他溶劑所造成的干擾，能增強樣品測定的準確度，故選擇流動相稀釋四氯化碳溶解的標準樣品，實驗表明效果良好。

2.1.2 流動相的選擇

實驗首先參考了2007版《化妝品衛生規范》紫外線吸收劑的測定方法，但發現亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚在相當長的時間內無峰出，并不能滿足實驗要求。由于亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚具有較強的極性，利用相似相溶原理，實驗分別比較了乙腈、甲醇、乙醇等有機相作為流動相的分離效果。結果發現，當流動相為V（甲醇）∶V（水）=98∶2時，出峰時間和分離效果比較理想。

2.1.3 波長、柱溫和流速的選擇

使用DAD 紫外光譜掃描，亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚的最佳吸收波長是在360nm。圖1為DAD 全吸收波長掃描光譜圖。通過柱溫和流速的比較實驗，表明實驗結果與柱溫的高低和流速的大小無明顯聯系，只影響到峰時間。經過實驗最終選擇柱溫35℃，流速1.0mL／min，這樣實驗用時短，出峰效果好。

圖1 UV-360DAD全吸收波長掃描光譜圖Fig.1 DAD chromatogram of the whole absorption wavelength scanning

在選定的色譜條件下所得到的亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚標準圖譜如圖2所示。

2.2 線性關系實驗及檢出限

分別準確移取0.1、0.3、0.5、1.0、2.0mL 標準液于10.0 mL 具塞刻度試管中，流動相定容，5μL進樣，進行色譜分析（n=6），以亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚質量濃度（X，mg／L）對相應的峰面積（Y）進行線性回歸，得到回歸方程、相關系數及檢出限，結果見表1。

圖2 UV-360標準溶液色譜分離圖Fig.2 Chromatogram of standard sample

表1 標準曲線的回歸方程、相關系數及檢出限Tab.1 Regression equations，correlation coefficients of calibration curves and detectable limits

2.3 方法的精密度和回收率

取3份防曬類化妝品進行加標回收率實驗，在選定的色譜條件下，取溶液5μL，重復進樣6次，以此計算相對標準偏差（RSD）測定其精密度（n=6）和回收率，結果如表2所示。

表2 UV-360回收率實驗結果及精密度實驗結果（n=6）Tab.2 Experimental results on precision of content and recovery test of UV-360preservatives（n=6）

實驗結果表明，該實驗方法的平均回收率在98.2%～102.4%，相對標準偏差在1.48%～3.00%，結果滿足檢驗要求。

2.4 樣品分析

實驗對市售9種防曬類化妝品進行檢測，檢出含有亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚的化妝品1種，其質量分數為4.9%；其他8種化妝品中均未檢出。我國《化妝品衛生規范》2007年版中規定，亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚最大允許使用質量分數為10%，以上產品均符合標準。圖3為含有亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚化妝品的實際樣品色譜分離圖。

圖3 實際樣品的色譜分離圖Fig.3 Chromatogram of real sample

3 結 論

本方法在15min內可快速測定，而且方法簡便，從方法的準確度與精密度結果看，在選定的色譜條件下，分離效果好，方法的重現性好，準確度高，能夠實現樣品的快速檢測，可用于常規防曬化妝品中亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚的測定，是對目前化妝品中亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚的測定方法進一步的補充和完善。

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