兩例鴨禽霍亂的診斷試驗

孟宇航 鄧書 李光華 （山東省即墨市畜牧獸醫局 266200 青島誠譽食品檢測有限公司）

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兩例鴨禽霍亂的診斷試驗

孟宇航①鄧書②李光華①（①山東省即墨市畜牧獸醫局 266200 ②青島誠譽食品檢測有限公司）

本試驗依據家禽(畜)流行病診斷的基本原理和方法，通過試驗臨床癥狀觀察和病理解剖觀察到的特征性病理變化，作出初步診斷；再進行實驗室的病原生物學檢查，病原的分離與純化，動物回歸試驗和生化試驗作出確診，并以藥敏試驗的結果為依據提出治療本病的合理治療方案，以防止因菌株對所使用藥物產生的耐藥性而影響治療效果。

禽霍亂 巴氏桿菌 生物學檢查

隨著人民生活水平的提高和對畜產品需求量的不斷增加，集約化養殖業的發展也愈來愈迅速。但是在發展集約化規模養殖的過程中，各種傳染病的危害也愈來愈嚴重。本試驗結合當前養禽業面臨的實際問題，主要研究鴨禽霍亂的診斷，對實際工作進行正確診斷具有一定的參考意義。

禽霍亂的流行特點是對各種家禽包括雞、鴨、鵝和火雞都有易感性。在鴨群中常呈流行性，1月齡以內雛鴨發病率和死亡率均高，而成鴨則較低。病禽和帶菌禽是本病的傳染源。病禽的各種臟器、分泌物、排泄物，以及被其污染的飼料、飲水、場地、用具，各種動物、人和機械，某些昆蟲、寄生蟲等都可以是本病的傳播媒介。禽舍不潔、潮濕擁擠、氣候突變、飼養失調、長途運輸和患寄生蟲病等均可誘發本病流行[1,2]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物、器材 試驗用鴨：共2組，取自即墨周邊地區養殖場(戶)；家兔：3只，購自即墨；高壓鍋，37℃恒溫箱，4℃冰箱，酒精燈，試管，玻片，培養皿，酒精棉球，碘酒，剪子等。

1.1.2 試劑 基礎培養基原料：牛肉膏，蛋白胨，氯化鈉，瓊脂，蒸餾水[3]，犢牛血清

1.2 試驗準備

（1）清洗20副培養皿，一個20 ml的針筒，一支16號針頭，用潔凈報紙包好后高壓蒸汽滅菌(121℃，15min)，待用。（2）購家兔2只。（3）基礎培養基的制備。（4）鮮血瓊脂平板的制備。預先將經高壓蒸汽滅菌的平皿，酒精燈放入細菌實驗專用操作柜作柜中；再將已冷卻的基礎培養基加熱融化并冷卻至50℃，以無菌操作法取家兔心血20ml注入基礎培養基溶液中，在細菌實驗專用操作柜作柜中搖勻并以無菌方法迅速倒平板；待鮮血平板冷卻后，將其倒置平放于37℃溫箱中培養24h，觀察，無細菌生長，說明鮮血平板未被污染，可繼續用于巴氏桿菌的分離與純化試驗。平板從溫箱中取出后置于4℃冰箱中待用。

1.3 操作方法

1.3.1 病理解剖 將疑似禽霍亂病鴨(共2組, 已死亡)做病理解剖，仔細檢查各內臟器官的病理變化。

1.3.2 涂片鏡檢 病理解剖后，各取一小片肝臟和心臟觸片，分別用瑞士染色法和革蘭氏染色法染色后觀察細菌的形態結構和染色特性。

1.3.3 細菌的分離與純化 分別自第1，2組病鴨的肝臟挑取細菌接種于鮮血瓊脂平板，置37℃溫箱中培養24h，觀察細菌生長情況。在長出菌落的培養基中，挑取半個菌落抹片，用革蘭氏染色和瑞士染色法染色后觀察細菌的形態結構和染色特性。

1.3.4 動物試驗 （1）將取自第1組病料的細菌純培養物接種血清肉湯，于37℃溫箱中培養24h后，給家兔注射0.5ml，觀察24~48h。（2）將取自第2組病鴨的肝臟，取一片搗碎后加生理鹽水制成懸液，靜置后取上清液1ml注射家兔，觀察24~48h。（3）將1ml生理鹽水注射陰性對照家兔，觀察24~48h。（4）對動物試驗中死亡的家兔進行病理解剖，并取病變部位材料涂片鏡檢。

1.3.5 藥敏實驗 （1）血清肉湯培養基的制備：先配制50ml肉湯培養基。高壓滅菌后，以10:1的比例加入5ml犢牛血清。在微生物實驗專用操作柜中以無菌方法分裝試管，共分裝6支試管。（2）接種血清肉湯：從兩組病料接種的鮮血瓊脂平板上挑取單個菌落，分別接種3支血清肉湯試管。（3）將接種好的血清肉湯培養基置于37℃溫箱中培養24h。（4）藥敏試驗：以無菌棉球蘸取血清肉湯培養物均勻涂抹于鮮血瓊脂平板上，分別在每個平板中放入5個藥敏片，置于37℃溫箱中培養24h并觀察結果。

1.3.6 生化試驗 以無菌操作方法，挑取單一菌落分別接種于如下微量生化試管：過氧化氫酶、氧化酶、尿素、甘露醇。觀察并記錄結果。

2 試驗結果

2.1 試驗觀察記錄

2.1.1 病理變化 病理特征有：冠、肉垂黑紫色，胸肌和胸漿膜散在出血點。心包積多量漿液，心外膜出血明顯。肝腫脹、棕黃色、質脆，散在大量的灰白色壞死點。肺有點狀出血和暗紅色肝變區。十二指腸呈嚴重的出血性炎癥變化，腸腔擴張，漿膜血管明顯，并見出血斑點；腸內容物血樣、粥狀；黏膜高度充血、出血。

2.1.2 鏡檢結果 分別取第1、2組病鴨的肝臟、心臟觸片，用瑞士染色法染色后，觀察到大量兩極濃染、中部略空的球桿狀細菌。做革蘭氏染色后觀察到大量革蘭氏陰性桿菌。

2.1.3 分離培養結果 兩組病料接種的鮮血平板上均長出水滴樣小菌落，無溶血現象。挑取單個菌落抹片后作瑞士染色和革蘭氏染色，觀察到兩極濃染的革蘭氏陰性球桿菌。

2.1.4 動物試驗結果 第1組死亡；第2組死亡；陰性對照組存活。

對死亡的家兔作病理解剖，均可觀察到肝臟有大量灰色壞死點，取一小片肝臟觸片鏡檢，觀察到兩極濃染的革蘭氏陰性球桿菌。

2.1.5 生化試驗結果 (見表1)

表1 生化試驗結果

2.1.6 藥敏試驗結果 (見表2)

2.2 診斷結論

（1）從病理解剖的結果看，各病變特征均符合禽霍亂的病理要求，其特征性病變有肝臟有灰白色針尖狀小點，據此可以初步診斷為禽霍亂。（2）從涂片、鏡檢、分離培養以及動物實驗所觀察到的病原微生物特征，皆可確診為禽多殺性巴氏桿菌，據此可確診兩株是禽霍亂。（3）生化試驗結果表明兩株細菌確系巴氏桿菌。從藥敏試驗結果來看，此兩株細菌對多種抗生素及磺胺類藥物高度敏感，這些藥物均可有效地治療本病。（4）綜上所述，對兩組鴨分別進行了病理學診斷和病原學診斷，確診為禽霍亂。故可根據防制禽霍亂的基本方法進行防制，并可根據本試驗中藥敏試驗的結果提供治療措施。

表2 藥敏試驗結果抑菌圈直徑 (mm)

3 討論

（1）本病一年四季均可發生，氣候劇變、高溫潮濕、多雨、飼養管理不良等因素常促進該病的發生和流行。在診斷過程中，要結合多方面的因素，綜合考慮而作出診斷結論。（2）禽霍亂的病原為多殺性巴氏桿菌，為細小球桿菌。根據巴氏桿菌特異性莢膜抗原的不同，分為A，B，C，D，E和F5個血清型，禽霍亂主要屬于A型，亦見于D型。（3）在動物試驗中，對死亡的家兔作病理解剖，觀察到肝臟有大量灰色壞死點。取一小片肝臟觸片鏡檢，觀察到兩極濃染的革蘭氏陰性球桿菌，為確診禽霍亂提供了重要依據。（4）目前，在禽霍亂的治療方面存在盲目用藥的現象，因此，常出現在使用抗生素類藥物治療本病時，不能取得預期效果。而結合本場次的流行菌株的藥敏試驗結果選用有針對性的高敏藥物，可有效解決這一問題。（5）在傳染病的診斷過程中，要防止唯病原論觀點。在本次試驗中，雖然觀察到革蘭氏陰性，兩極濃染的球桿菌，但也不排除存在混合感染的可能性。同時要注意不同疫病間的鑒別診斷，應將本病與鴨疫里氏桿菌病、鴨大腸桿菌病、鴨病毒性肝炎、鴨沙門氏菌病等進行鑒別。（6）在鴨禽霍亂的防制方面，加強鴨群的飼養管理，平時嚴格執行鴨場獸醫衛生防疫措施，以棟舍為單位采取全進全出的飼養制度，對預防本病的發生是完全有可能的，一般從未發生本病的鴨場不進行疫苗接種。如發生本病，立即對鴨群進行封鎖、隔離、檢疫和消毒，對假定健康鴨，用禽霍亂抗血清進行緊急預防注射。

[1] 甘孟侯,蔣金書. 畜禽群發病防治[M]. 第2版. 北京: 中國農業大學出版社, 1998.

[2]中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所. 動物傳染病學[M]. 北京: 中國農業出版社, 1998.

[3]姚火春. 獸醫微生物學實驗指導[M]. 第2版. 北京: 中國農業出版社. 1998.

[4]陳天壽. 微生物培養基的制造與應用[M]. 北京: 中國農業出版社，1995.

[5]趙斌, 何少江. 生物學實驗[M]. 北京: 科學出版社, 2002.

[6]蔡寶祥. 獸醫傳染病學[M]. 第3版. 北京: 中國農業出版社, 2001.

[7]北京農業大學. 動物生物化學實驗指導[M]. 北京: 中國農業出版社 2000.

（2010–11–23）

S858.32

A

1007-1733(2011)02-0010-03