梔子金花丸中金銀花的顯微定量研究

陳聰慧，康廷國

（遼寧中醫藥大學，遼寧 大連 116600）

梔子金花丸中金銀花的顯微定量研究

陳聰慧，康廷國*

（遼寧中醫藥大學，遼寧 大連 116600）

目的：采用均勻設計方法優選金銀花顯微定量法的優化條件，對中成藥梔子金花丸中的金銀花進行含量測定。方法：以被測物自身代替參比物，采用容量分析法配合顯微定量法測定金銀花的含量。結果：金銀花含量大多符合 《中國藥典》規定的標準。結論：用此方法測定金銀花的含量簡單、快捷、可靠，可為梔子金花丸的質量控制提供依據。

梔子金花丸；金銀花；均勻設計法；顯微定量法

梔子金花丸為苦寒之藥，用于肺胃熱盛，口舌生瘡，牙齦腫痛，目赤眩暈，咽喉腫痛。由梔子、金銀花、黃芩、黃柏、大黃、黃連、知母、天花粉8味中藥組成。其中金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonicaThunb.的干燥花蕾或帶初開的花，主產于山東、河南，全國大部地區均產，自古被譽為清熱解毒的良藥。它性寒，味甘，具有清熱解毒，疏散風熱的功能。用于癰腫疔瘡，喉痹，丹毒，熱毒血痢，風熱感冒，溫病發熱[1]。金銀花粉末中厚壁非腺毛，單細胞，直徑14～37μm，表面有疣狀突起。金銀花粉末中的非腺毛的顯微特征明顯，不僅具有生物學穩定的特性，而且數量眾多，易于觀察計數[2]。本實驗采用容量分析方法[3]測定了金銀花中非腺毛的顯微特征常數，由于金銀花的非腺毛在梔子金花丸的顯微特征中具有專屬性，因此采用顯微定量法對梔子金花丸中的金銀花進行百分含量的測定，從而為梔子金花丸的質量控制提供了依據[4-6]。筆者采用顯微定量法，將顯微攝影、計算機圖像處理和數據分析相結合，對梔子金花丸中的金銀花含量進行測定，結果表明此法方便、快捷、耗資少。

1 儀器與材料

1.1 儀器

OLYMPUS BX-50生物顯微鏡；OLYMPUSDP-10顯微鏡數碼相機；島津 AY220電子分析天平；Agilent1100高效液相色譜儀；微量移液器（WKY型－球晶生化試劑儀器有限公司）；FW80高速萬能粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2 試劑

梔子金花丸（北京同仁堂），金銀花，經遼寧中醫藥大學藥學院中藥鑒定教研室翟延君教授鑒定為正品。水合氯醛，稀甘油。

2 方法與結果

2.1 金銀花中非腺毛顯微特征常數測定優化條件選擇

影響樣品混懸效果的因素主要有樣品重量、樣品的粉碎粒度、混懸劑的用量。考慮到各因素的考察水平有所不同，故本實驗采用3因素6水平均勻設計法考察顯微定量法的優化條件[7]，具體實驗設計見表1。

表1 金銀花中非腺毛顯微特征常數測定均勻設計方案 U6（63）

取金銀花樣品粉碎，分別過80目和100目篩。精密穩定50，60，70，80，90，100 mg共6份，用水合氯醛試液多次水飛，移入25 mL量瓶中，按均勻設計表加入相應甘油量，最后用水合氯醛液定容。充分搖勻后，精密吸取0.02 mL進行顯微裝片，每份溶液平行裝片50張，于顯微鏡下觀察非腺毛并計數。將所得的結果隨機化分為5組，分別計算5組平均值的RSD。以每份樣品平均值的RSD為考察指標，結果見表2。

表2 金銀花中非腺毛顯微特征常數測定均勻設計實驗結果

通過SPSS17.0統計軟件得出均勻設計結果：Y＝10.411－0.091X1，r＝0.931，F＝53.562，Ymin＝1.311（即1.31%），Y為 RSD（%），X1為樣品重量，X2為粉碎粒度，X3為加入甘油量。

X1項為負號，X1應取最大值；由于X2、X3沒有進入方程，說明X2、X3對實驗影響不大，可根據實際情況選擇條件。

取優化條件為樣品稱樣量100 mg，粉碎過100目篩，加入甘油10 mL。對優化結果的驗證實驗表明各份樣品的變異系數均與優化條件給出的最小變異系數（1.73%）接近，說明由SPSS17.0統計軟件給出的優化條件是科學、準確的，結果見表3。

表3 金銀花中非腺毛顯微特征常數測定均勻設計驗證實驗

2.2 對照樣品金銀花中非腺毛顯微特征常數值測定

精密稱定金銀花藥材粉末，按照均勻優化條件配制，水合氯醛多次水飛，分別定容于25 mL量瓶中，精密吸取20μL溶液，分別平行裝片50張，觀察非腺毛，計數，取平均值，按照公式1計算非腺毛顯微特征常數值，結果見表4。

公式1：顯微特征常數P＝（X×V）/（V′×W）

W－藥材重量（mg，按干燥品計，V－定量藥材混懸液總體積（mL），P－定量藥材顯微特征常數（個·mg－1），V′－蓋玻片下藥材混懸液體積（mL），X－每片蓋玻片下藥材顯微特征數。

表4 各樣品非腺毛顯微特征常數測定結果

2.3 梔子金花丸中金銀花的含量測定

將成藥小心粉碎至完全過100目篩，在烘箱80℃干燥5 h。精密稱定干燥后的梔子金花丸粉末600 mg，按實驗方法定容至25 mL量瓶中，精密吸取0.02 mL裝片，平行裝50張片，記錄非腺毛顯微特征數，按照公式2計算金銀花百分含量，結果見表5。

公式2：樣品含量% ＝（X×V）/（V′×W×P）×100%

P－定量藥材顯微特征常數（個·mg－1），X－每片蓋玻片下藥材顯微特征常數，V－定量藥材混懸液總體積（mL），V′－蓋玻片下藥材混懸液體積（mL），W－藥材重量（mg，按干燥品計）

表5 梔子金花丸中金銀花的含量測定結果

3 討論與結論

梔子金花丸中金銀花的含量測定以金銀花非腺毛為特征物計數，結果表明所選特征專屬性強，該法簡單可靠，對含有金銀花的中成藥質量控制有一定的推廣使用價值。

本實驗采用容量分析法測定金銀花顯微特征常數，定容和制片很關鍵，用微量移液器裝片前槍頭要潤洗3次，吸取前要使混懸液均勻分布，以減少誤差。蓋蓋玻片時要將載玻片上的溶液全部覆蓋，避免外溢現象[8-9]。

金銀花由于粉碎后過100目篩，有的非腺毛較完整，有的已破碎。觀察時對完整的計為一個單位；對于破碎的非腺毛，按毛尖數計數。

本文采用均勻設計方法對金銀花顯微定量法的實驗條件進行優化，首次對梔子金花丸中的金銀花通過顯微特征非腺毛做了定量分析，檢測結果表明該產品中金銀花含量符合 《中國藥典》規定。建議《中國藥典》在藥材項下增加顯微常數測定項目，豐富藥材品質評價的內容；同時將含有這些藥材（原粉入藥）的中成藥項下增加顯微定量項目[10]。

[1]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：205-206.

[2]康廷國.中藥鑒定學[M].北京：中國中醫藥出版社，2007：295.

[3]苑冬敏，欒曉靜，康廷國，等.中藥顯微定量法的應用研究[J].遼寧中醫雜志，2006，33（4）：459-460.

[4]姜清華，翟延君，王榮祥.羚羊清肺丸中羚羊角的顯微定量研究[J].中藥材，2004，27（2）：90-91.

[5]潘國良，柴清軍.顯微定量法鑒別人參與西洋參[J].中國藥業，2002，11（7）：52.

[6]楊來秀，鞠愛華，陳桂卿.天麻丸中天麻的顯微定量研究[J].內蒙古醫學院學報，2000，22（1）：44-46.

[7]劉明芝，周仁郁.中醫藥統計學與軟件應用[M].北京：中國中醫藥出版社，2006：312.

[8]欒曉靜，苑冬敏，康廷國.五子衍宗丸中枸杞子的顯微定量研究[J].遼寧中醫雜志，2007，34（5）：646-647.

[9]苑冬敏，劉揚，欒曉靜，等.黃柏的顯微定量研究[J].中華中醫藥學刊，2007，25（5）：964-966.

[10]劉歆韻，劉麗，李斌，等.白芍顯微特征常數與化學成分相關性研究[J].中藥材，2010，33（4）：559-561.

Study on Honeysuckle Contents in Zhizi Jinhua Pills by the Microscopic Quantitative Method

CHEN Cong-hui，KANG Ting-guo

（Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian116600，China）

Objective：Determine the content of honeysuckle in Chinesemedicine zhizi jinhua pills，using the optimal conditions of the microscopic quantitative method of honeysuckle by uniform design.Methods：Using the volumetric analysiswith themicroscopic quantitativemethod determinate the content of honeysuckle，measured object itself instead of the reference material.Results：The honeysuckle content reach the standard of Chinese Pharmacopoiea.Conclusion：Themethod determining the contentof honeysuckle is simple，quick，reliable for quality control of zhizi jinhua pills.

Zhizi jinhua pills；Honeysuckle；Microscopic quantitativemethod

*康廷國，E-mail：kangtg＠lnutcm.edu.cn

2011-05-03）