HPLC測(cè)定芩黃顆粒中黃芩昔的含量

羅千古，陶莉

（中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院，廣東 珠海 519000）

HPLC測(cè)定芩黃顆粒中黃芩昔的含量

羅千古*，陶莉

（中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院，廣東 珠海 519000）

目的：測(cè)定芩黃顆粒中黃芩苷的含量。方法：采用高效液相色譜法，流動(dòng)相：甲醇-0.2%磷酸溶液（44∶56）；流速：1.0 mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)：276 nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：20μL。結(jié)果：黃芩苷在4.0～40.0μg·mL－1線性關(guān)系良好（r＝0.999 9），平均回收率為99.72%，RSD＝1.26%（n＝6）。結(jié)論：方法可靠，簡(jiǎn)單可行，可作為芩黃顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

芩黃顆粒；黃芩苷；質(zhì)量控制

芩黃顆粒是由黃芩、生地黃、黃芪、當(dāng)歸、紫河車等藥材制成的一種醫(yī)院復(fù)方制劑，具有清熱解毒，補(bǔ)氣養(yǎng)陰，益精血的功效，具有提高機(jī)體免疫功能的作用。方中黃芩為主藥，具有抗菌、抗病毒作用，黃芩苷是黃芩的主要化學(xué)成分[1]，常用的測(cè)定方法有HPLC[2]等。作者采用HPLC對(duì)黃芩苷進(jìn)行了含量測(cè)定，為建立完整的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀LC-10A，SPD-10AVP紫外檢測(cè)器（日本島津）；ANASTAR色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；黃芩苷（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)715-9909）；芩黃顆粒（6 g/袋，由實(shí)驗(yàn)室自制，原料購(gòu)自江陰天江藥業(yè)有限公司的中藥免煎配方顆粒，批號(hào)：100716，100731，100813，100830）；超純水；甲醇為色譜純；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：島津Shim-pack VP-ODS柱（4.6 mm×250 mm，4.6μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.2%磷酸溶液（44∶56）；流速：1.0 mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)：276 nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：20μL（定量環(huán)）。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取黃芩苷對(duì)照品20 mg，置50 mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。

2.3 供試品溶液制備

取芩黃顆粒適量研細(xì)，取約1 g精密稱定，置具塞試管中，精密加入甲醇溶液25 mL，稱重，室溫下密塞超聲處理4次，每次60 min，避光放置24 h，加甲醇補(bǔ)足重量，離心15 min（3 000 r·min－1），過濾，棄去初濾液，精吸續(xù)濾液1 mL移至5 mL容量瓶中，加甲醇溶液至刻度，用0.45μm微孔濾膜過濾，作供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取上述對(duì)照品儲(chǔ)備溶液0.1，0.3，0.5，0.7，1.0 mL置10 mL容量瓶中，加甲醇溶液配制成濃度為 4.0，12.0，20.0，28.0，40.0μg·mL－1的對(duì)照品溶液，分別以20μL進(jìn)樣，測(cè)得峰面積，得回歸方程為A＝34 495C＋17 240，r＝0.999 9。表明黃芩苷在4.0～40.0μg·mL－1線性良好，所測(cè)樣品黃芩苷含量在該線性范圍內(nèi)。

2.5 空白試驗(yàn)

按處方比例和制法，自制成不含黃芩的樣品，并按供試品溶液的制法制成空白對(duì)照溶液。依法進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果空白對(duì)照溶液在黃芩苷保留時(shí)間處無色譜峰，表明在實(shí)驗(yàn)條件下，其他成分對(duì)測(cè)定無干擾，見圖1。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號(hào)（100813）的供試品溶液，按供試品溶液的制備方法，依上述色譜條件，每隔1 h測(cè)含量1次（n＝5），第2天測(cè)定2次，積分值無明顯變化，平均峰面積為725 451，RSD＝0.66%（n＝7），表明黃芩苷含量在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一份供試品溶液，每次20μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果平均峰面積為725 889，RSD＝0.70%（n＝6），表明儀器精密度良好。

圖1 芩黃顆粒及對(duì)照品HPLC圖

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)100813）研細(xì)，精密稱取6份，照上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果平均含量為2.54 mg·g－1，RSD＝0.80%（n＝6），表明該方法符合重復(fù)性要求。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密吸取已知含量（含量為2.54 mg·g－1）的樣品6份，每份約0.5 g，分別加入濃度為400.0μg·mL－1的黃芩苷對(duì)照品溶液（取黃芩苷對(duì)照品20.0 mg，置50 mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度）3 mL，混勻，按供試品溶液制備項(xiàng)下操作制備供試液，分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，結(jié)果見表1。

2.10 樣品測(cè)定

取4批樣品，分別精密稱取，依法制成供試品溶液，均以20μL進(jìn)樣，分別測(cè)定吸收峰面積，外標(biāo)法計(jì)算黃芩苷含量，結(jié)果見表2。

表1 黃芩苷加樣回收率試驗(yàn)

表2 芩黃顆粒中黃芩苷的含量測(cè)定

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

用甲醇溶液配制黃芩苷對(duì)照品溶液約0.4 mg·mL－1，在 6010-紫外分光光度計(jì)（惠普）上 200～400 nm范圍掃描，在276 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選276 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 流動(dòng)相的選擇

芩黃顆粒為復(fù)方制劑，藥味眾多，黃芩苷較難分離，樣品的處理及流動(dòng)相的選擇都很重要。實(shí)驗(yàn)對(duì)HPLC分析時(shí)的流動(dòng)相系統(tǒng)組成和比例作了比較，對(duì)多種溶劑系統(tǒng)進(jìn)行選擇，經(jīng)比較甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.5%冰醋酸等流動(dòng)相，結(jié)果顯示，甲醇-0.2磷酸（44∶56）分離黃芩苷的效果最好，故選擇其為流動(dòng)相。

3.3 黃芩苷含量指標(biāo)確定

黃芩為芩黃顆粒的主藥，黃芩苷為黃芩的主要成分[1]，故可以黃芩苷作為本藥的質(zhì)量控制的定量指標(biāo)，根據(jù)4批樣品含量測(cè)定數(shù)據(jù)，初步制定芩黃顆粒中黃芩苷含量以不少于2.00mg·g－1為標(biāo)準(zhǔn)，來控制其質(zhì)量。

本方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于芩黃顆粒的質(zhì)量控制。

[1]王筠默.中藥藥理學(xué)[M].上海：科學(xué)技術(shù)出版社，1984：36.

[2]呂東，楊鳳梅.HPLC測(cè)定潤(rùn)肺止咳膠囊中黃芩苷含量[J].中成藥，2003，25（7）：599-600.

Determ ination of Baicalin in Qinhuang Granules by HPLC

LUO Qian-gu，TAO Li

（TheFifthAffiliatedHospital，Sunyat－senUniversity，Zhuhai519000，China）

Objective：To determine the content of baicalin in Qinhuang granules.Methods：Baicalin was detected by HPLC.Current phase：methyl alcohol-0.2%phosphoric acid（44∶56）solution；velocity：1.0 mL·min－1；detection wavelength：276 nm；column temperature：35℃；sampling volume：20μL.Results：The baicalin showed a good linear relationship at range of 4.0～40.0μg·mL－1，r＝0.999 9，and the average recovery was99.72%，RSD＝1.26%（n＝6）.Conclusion：These methods are accurate and can be used for the quality control of Qinhuang Granules.

Qinhuang Granules；Baicalin；Quality control

*羅千古，Tel：（0756）2528124，E-mail：lqguo97112＠yahoo.cn

2011-03-25）