不同產地大棗中多糖的含量測定△

劉曉芳，劉養清，韓雪，焦建華，陳元元

（山西中醫學院，山西 太原 030024）

質量

不同產地大棗中多糖的含量測定
△

劉曉芳，劉養清*，韓雪，焦建華，陳元元

（山西中醫學院，山西 太原 030024）

目的：建立大棗中多糖的提取和含量測定方法。方法：采用苯酚-硫酸顯色-分光光度法測定不同產地大棗中多糖的含量，對不同的提取方法和影響顯色反應的主要因素進行了考察。結果：測定了不同產地大棗中多糖的含量，其差異很大。結論：該方法測定多糖含量具有操作簡單、精密度高、準確可靠、重復性好的優點，可用于大棗的質量控制。

大棗；多糖；分光光度法；苯酚-硫酸顯色法；質量控制

大棗為鼠李科植物棗ZizyphusjujubaMill.的干燥成熟果實[1]，具有補中益氣，養血安神的功能[1]。大棗營養豐富，既可食用又可入藥，富含糖類、粗纖維、維生素、氨基酸、礦物質等多種營養成分[2-3]。研究表明，大棗多糖是大棗中具有重要生物功能的有效成分，營養保健價值很高[4-6]。建立大棗中多糖含量的測定方法，不僅可作為評價指標的參考，還能更好地進行質量控制。作者通過大量實驗確定了大棗中多糖的提取方法，并采用苯酚-硫酸顯色法[7]測定了不同產地大棗中多糖的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

VIS-723G型可見光分光光度計；HC-2518型離心機；KQ5200V型超聲波清洗器。

1.2 試藥

葡萄糖對照品[8]，105℃干燥恒重，其他試劑均為分析純。乙醇溶液（80%）：20 mL蒸餾水中加入無水乙醇80 mL，混勻。氫氧化鈉溶液（100 g·L－1）：稱取100 g氫氧化鈉，加蒸餾水溶解并稀釋至1 L，加入固體無水硫酸鈉至飽和，備用。銅儲備液：取0.3 g硫酸銅 （含5個結晶水），3 g檸檬酸鈉，加水溶解并稀釋至100 mL，混勻。銅試劑溶液：精密吸取銅儲備液50 mL，精密加入蒸餾水50 mL，混勻后加入固體無水硫酸鈉12.5 g并使其溶解，臨用時新配。洗滌劑：移取蒸餾水50 mL，加入10 mL氫氧化鈉溶液，混勻。硫酸溶液（10%）：取100 mL濃硫酸加入到800 mL蒸餾水中，混勻，冷卻后稀釋至1 L。苯酚溶液（50 g·L－1）：取苯酚100 g，蒸餾，收集180～182℃餾分。稱取精制苯酚5.0 g，加水溶解并稀釋至100 mL，混勻，溶液置冰箱中可保存1個月。

大棗樣品共收集了8種，分別為忻州大棗、呂梁玉喜大棗、呂梁灘棗、呂梁臨縣大棗、呂梁小棗、柳林大棗、保德貢棗、永和大棗。

2 方法與結果

2.1 標準溶液的配制

2.1.1 標準溶液的配制 葡萄糖標準儲備溶液：精密稱取無水葡萄糖對照品0.500 4 g，加水溶解，并定容至50 mL，混勻，置冰箱中保存。此溶液每1 mL含10.0 mg葡萄糖。

葡萄糖標準使用液：吸取葡萄糖標準儲備液1.00 mL，置于100 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，混勻，置冰箱中保存。此溶液每1 mL含葡萄糖0.1 mg。

2.1.2 加熱時間的確定 精密移取5份配制好的葡萄糖標準使用液0.6mL和5份蒸餾水1.4 mL，分別混合，各加入配好的苯酚溶液1 mL，混勻，再各加濃硫酸10 mL，搖勻后靜置5 min，然后置沸水中分別加熱2，5，8，10，15 min，取出后放置10 min，根據掃描的吸收曲線，選擇在490 nm測定吸光度，分別為0.197，0.305，0.213，0.247，0.196，結果表明當加熱5 min時吸光度最大，故確定加熱時間為5 min。

2.1.3 濃硫酸用量的確定 精密移取3份配制好的葡萄糖標準使用液0.6 mL和3份蒸餾水1.4mL，分別混合，各加入配好的苯酚溶液1 mL，混勻，分別加濃硫酸5，8，10 mL，搖勻后靜置5 min，然后置沸水浴中加熱5 min，取出后放置10 min，根據掃描的吸收曲線，選擇在490 nm測定吸光度，分別為0.309，0.387，0.306，結果表明當加入濃硫酸8 mL時吸光度值最大，故確定濃硫酸用量為8 mL。

2.1.4 最大吸收波長的確定 精密吸取配制好的葡萄糖標準使用液0.6 mL和蒸餾水1.4 mL，混合，加入配好的苯酚溶液1 mL，混勻，精密加入濃硫酸8 mL，充分混勻后靜置5 min，然后置沸水中加熱5 min，取出后放置10 min，用分光光度計在400～650 nm波長處以試劑空白溶液為參比，1 cm玻璃比色皿測定吸光度值。根據掃描的光吸收曲線顯示其最大吸收波長為488.5 nm。

2.2 樣品溶液的制備

2.2.1 樣品的提取 稱取大棗樣品1.5 g，加溶劑（蒸餾水）10 mL，微波加熱50 s，過濾后將樣品提取液定容至10 mL，供沉淀粗多糖。

2.2.2 沉淀粗多糖 精密吸取樣品提取液1.5 mL，置于50 mL離心管中，加入無水乙醇6 mL，混勻后，以3 000 r·min－1離心5 min，棄去上清液。殘渣用80%乙醇溶液數毫升洗滌，離心后棄上清液，反復3～4次操作，殘渣用蒸餾水溶解并定容至5.0 mL，混勻后，供沉淀葡萄糖。

2.2.3 沉淀葡聚糖 精密吸取上述溶液2 mL置于20 mL離心管中，加入100 g·L－1氫氧化鈉 2.0 mL，銅試劑溶液2.0mL，沸水浴中煮沸2min，冷卻后以3 000 r·min－1離心5 min，棄去上清液。殘渣用洗滌液數毫升洗滌，離心后棄去上清液，反復3次操作后，殘渣用10%硫酸溶液2.0 mL溶解并轉移至25 mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，混勻。此溶液為樣品測定液。

2.3 方法學考察

2.3.1 葡萄糖標準曲線的繪制 精密吸取葡萄糖標準使 用 液：0，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.20 mL（相當于葡萄糖 0，0.010，0.020，0.040，0.060，0.080，0.100，0.120 mg）分別置于25 mL比色管中，準確補蒸餾水至2.0 mL，加入50 g·L－1苯酚溶液1.0 mL，混勻后，小心加入濃硫酸8 mL，混勻后，置沸水浴中煮沸5 min，放置10 min后用分光光度計在488.5 nm波長處，以試劑空白為參比，1 cm比色皿測定吸光度值。以葡萄糖濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。其回歸方程為Y＝5.143 4X－0.001 5，r＝0.999 2，葡萄糖在0.010～0.120 mg線性關系良好。

2.3.2 重復性試驗 按2.2項下方法，制備6份呂梁小棗的樣品溶液，測定吸光度，計算RSD＝2.62%。結果表明測定方法的重復性良好。

2.3.3 精密度試驗 連續5次測定柳林大棗樣品的吸光度，計算RSD＝0.26%，結果表明方法精密度良好。

2.3.4 穩定性試驗 分別在10，20，30，60，90，120 min測定柳林大棗樣品的吸光度，計算RSD＝0.67%，結果表明供試品溶液在2 h內穩定。

2.3.5 回收率試驗 取已知含量的臨縣大棗約1.5g，精密稱定6份，分別加入葡萄糖標準儲備液 （10 mg·mL－1）1mL，按2.2項下方法操作，分別測定，計算回收率，結果見表1。

表1 葡萄糖加樣回收率試驗

2.4 不同產地大棗中多糖的含量測定

精密吸取不同產地大棗樣品測定液2.0 mL置于25 mL比色皿中，加入50 g·L－1苯酚溶液 1.0 mL，混勻后，小心加入濃硫酸8 mL混勻，置沸水浴中煮沸5 min，放置10 min后用分光光度計在488.5 nm波長處，以試劑空白為參比，用1 cm比色皿測定吸光度值，從標準曲線上查出對應葡萄糖的濃度，而后計算出多糖含量。多糖含量結果計算公式為：

式中：W1—樣品測定液中葡聚糖的質量（g）

W2—樣品空白液中葡聚糖的質量（g）

V1—粗多糖溶液體積（mL）

V2—沉淀葡聚糖所用粗多糖溶液體積（mL）

V3—樣品測定液總體積（mL）

V4—測定用樣品測定溶液體積（mL）

V—樣品提取液總體積（mL）

M—樣品量（mL）

m—樣品的質量（g）

不同產地大棗中的多糖含量測定結果見表2。

表2 不同產地大棗中的多糖含量

3 討論

3.1 樣品提取方法的選擇

通過實驗分別比較了超聲提取和微波提取兩種方法。超聲提取分別考察了超聲時間和次數，選擇超聲10，20，30，40 min，結果超聲 20 min時，吸光度最大；分別超聲1、2、3次，每次20 min，結果表明超聲兩次后基本能把多糖提取完全。微波提取考察了提取時間，分別加熱 10，20，30，40，50，60 s，結果表明微波加熱50 s時吸光度最大。通過超聲提取及微波提取多糖的結果比較，樣品的提取選擇微波加熱，加熱時間為50 s。

3.2 不同樣品多糖含量比較

實驗結果顯示，忻州大棗的多糖含量最高，為1.37%；呂梁臨縣大棗的多糖含量最低，為0.66%；表明不同產地的大棗中多糖含量差異較大。

上述實驗確定的大棗中多糖的提取方法及苯酚-硫酸法測定大棗中多糖含量的方法操作簡單、精密度高、結果準確可靠，可用于大棗中多糖含量的測定和大棗的質量控制。

[1]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：21-22.

[2]曲澤洲，王永蕙.中國棗樹志·棗卷[M].北京：中國林業出版社，1993：113-118.

[3]李進偉，丁霄霖.金絲小棗多糖的提取及脫色研究[J].食品科學，2005，27（4）：150-154.

[4]林勤保，高大維.大棗多糖的分離和純化[J].食品工業科技，1998，（4）：20-21.

[5]張慶，林生，林勤保，等.大棗多糖體外抗補體活性促進小鼠脾細胞的增殖作用[J].中藥藥理與臨床，1998，15（5）：19.

[6]李雪華，龍盛京.大棗多糖的提取與抗活性氧研究[J].廣西科學，2000，7（1）：54-56，63.

[7]胡居吾，范青生，肖小年.粗多糖測定方法的研究[J].江西食品工業，2005，（1）：16-18.

[8]梁惠花，劉曉河，王志寶，等.雷公藤多糖的提取和含量測定方法研究[J].中國現代應用藥學，2004，21（1）：8-10.

Determination of Polysaccharide in Ziziphus jujube Mill.from Different Places

LIU Xiao-fang，LIU Yang-qing，HAN Xue，JIAO Jian-hua，CHEN Yuan-yuan
（ShanxiCollegeofTraditionalChineseMedicine，Taiyuan030024，China）

Objective：To establiash the method for the extraction and determination of the content of polysaccharide inZiziphusjujubeMill..Methods：Phenol-sulfueic acid method and spectrophotometry were used to determine the content of polysaccharide inZiziphus jujubeMill..The different extracting methods and the main factors effecing color reaction were investigated.Results：The contentof polysaccharide inZiziphusjujubeMill.from different places was different.Conclusion：Themethod that the content of polysacchride determined was showed advantages of simplicity of operation，system accuracy，high precision and reproducibility and can be used for the quality control ofZiziphus jujubeMill..

ZiziphusjujubeMill.；Polysaccharide；Spectrophotometry；Phenol-sulfuric acidmethod；Quality control

山西省衛生廳科技攻關項目（200652）

*劉養清，教授，Tel：（0351）2272085，E-mail：soh2004＠163.com

2011-01-24）