凝膠滲透色譜-高效液相色譜法檢測食用油中鄰苯二甲酸酯類的含量

李仁偉，程明川，李 想，瞿 進，鐘紅霞，嚴 峻，董 麗，唐 詩

(四川省產品質量監督檢驗檢測院，四川成都610031)

凝膠滲透色譜-高效液相色譜法檢測食用油中鄰苯二甲酸酯類的含量

李仁偉，程明川，李 想，瞿 進，鐘紅霞，嚴 峻，董 麗，唐 詩

(四川省產品質量監督檢驗檢測院，四川成都610031)

建立了以凝膠滲透色譜(GPC)和高效液相色譜(HPLC)聯用技術檢測食用油中鄰苯二甲酸酯類含量的方法。樣品經GPC處理后，采用乙腈/水體系為流動相，ODS柱分離，PDA檢測器檢測，檢測波長224nm。實驗結果:該方法在0.1～8.0mg/L范圍內線性關系良好;DMP、DEP、BBP、DBP、DNOP的儀器檢出限(S/N=3)分別為10、10、25、50、50μg/L，低、中、高三個濃度水平的回收率均在95%～110%之間。結論:該方法準確可靠，精密度較高。

凝膠滲透色譜(GPC)，高效液相色譜(HPLC)，鄰苯二甲酸酯類

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

乙酸乙酯(農殘級)，環己烷(農殘級)，乙腈(色譜級) 美國 Sigma公司;鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)、鄰苯二甲酸二乙酯(DEP)、鄰苯二甲酸丁芐酯(BBP)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸二正辛酯(DNOP) 美國 chemservice公司，增塑劑標準品制備，各取100mg標準品，用乙腈溶解后定容于100mL容量瓶中，配制成濃度為1.0mg/mL的標準儲備液。

LC-20AT、PDA檢測器(HPLC) 日本島津公司;凝膠凈化色譜儀(GPC) 德國LC-Tech公司;旋轉蒸發儀 德國Heildoph公司;AE-200S電子天平 瑞士METTLER TOLEDO公司。

表2 回收率的測定(n=3)

1.2 色譜條件

色譜柱：intersil ODS-sp(5μm，4.6×150mm);流動相：乙腈/水體系梯度洗脫［梯度洗脫程序：0～6min (乙腈85%)，6～7min(乙腈85%→100%)，7～17min (乙腈100%)］;流速：1.0mL/min;柱溫：40℃;檢測波長：224nm;進樣量10μL。

1.3 實驗方法

1.3.1 標準曲線 將鄰苯二甲酸酯類標準儲備液用乙腈稀釋配制成0.1、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mg/L的系列混合標準溶液，進液相色譜分析后，將所得色譜峰的濃度和對應的峰面積繪制標準工作曲線。

1.3.2 樣品處理 稱取樣品1.0g(精確至0.1mg)，用乙酸乙酯-環己烷(體積比1∶1)定容至10.0mL，混勻，經凝膠凈化色譜儀純化。進樣量為5mL，洗脫液為乙酸乙酯-環己烷(體積比1∶1)，流速5.0mL/min，15～30min收集分離液，再減壓濃縮至近干，乙腈定容至5mL，經過0.45μm濾膜過濾后，取10μL供HPLC檢測分析。

2 結果與分析

2.1 GPC條件

對GPC的收集時間進行了考察，當運行時間達到15min時，能徹底去除油脂，當運行時間達到30min時，對加標樣品測定的回收率達到最高值，且運行時間再增加，回收率變化不大，結果表明在本實驗條件下，能較為徹底地除去樣品中的油份，分析時間短，同時有很好的回收率。

2.2 色譜條件

對吸收波長的考察表明，DMP、DEP、BBP、DBP、DNOP五種物質均在224nm處有最大吸收。對流動相的考察表明，在相同條件下乙腈/水體系流動相的背景響應低于甲醇/水體系，對PAEs各組分的分離效果更好;乙腈檢測截止波長為190nm，低于甲醇的截止波長205nm，對色譜圖干擾相對較小，確定選擇乙腈/水體系。分別對柱溫25、30、35、40、45℃進行考察，結果表明隨柱溫的升高，各組分保留時間有一定減小，響應值略有增加;隨柱溫升高，BBP與DBP的色譜峰靠近，分離度降低;柱溫35℃時，BBP和DBP的峰寬也影響了分離度，只有40℃時分離度大于1.5，因此，柱溫確定為40℃。標準色譜圖如圖1所示。

2.3 檢出限與線性范圍

圖1 PAEs標準高效液相色譜圖

儀器自動計算S/N=3時各組分響應值對應的最低檢出濃度分別為 DMP=9.926μg/L、DEP= 12.729μg/L、BBP=26.954μg/L、DBP=47.177μg/L、DNOP=39.211μg/L。驗證實驗表明，按3倍信噪比水平，DMP、DEP檢出限為10μg/L，BBP檢出限為25μg/L，DBP、DNOP檢出限為50μg/L。該結果與儀器直接計算的最低檢出濃度基本一致，確定為儀器的最終檢出限。精密吸取PAEs各組分標準溶液適量，制成0.1、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mg/L系列水平濃度，以峰面積為縱坐標，PAEs各組分濃度為橫坐標進行線性回歸，得各標準曲線方程見表1。結果表明，PAEs各組分在0.1～8.0mg/L范圍內線性關系良好。

表1 標準校正曲線

2.4 精密度與加標回收率

取同一標準溶液重復進樣6次，RSD≤1%;對同一加標樣品平行處理6份，RSD≤5%，實驗表明，方法的精密度良好。將加標量不同的樣品應用本方法進行回收率實驗(n=6)，方法的回收率在95%～110%之間。

3 結論與討論

采用凝膠滲透色譜-高效液相色譜聯用法檢測食用油中的鄰苯二甲酸酯類的含量，方法學實驗表明該方法準確可靠，并采用該方法連同本課題組另建立的GC-MS法和HPLC-MS/MS法對157批次的金屬蓋玻璃瓶裝含油脂類調味品和192批次的食用植物油進行了檢測，共有47個樣品檢出鄰苯二甲酸酯類物質，包括20個金屬蓋玻璃瓶裝含油脂類調味品和食用植物油27個樣品，前者檢出主要為DIBP，后者檢出為DEHP。統計結果表明，盡管每個時間段內抽檢的樣品數量不同，但檢出率逐漸增加，PAEs組分隨貯存時間的延長，其遷移風險也加大。

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Determination of phthalic acid esters in edible oil by gel permeation chromatography and HPLC spectrometry

LI Ren-wei，CHENG Ming-chuan，LI Xiang，QU Jin，ZHONG Hong-xia，YAN Jun，DONG Li，TANG Shi
(Sichuan Institute of Product Quality Supervision＆Inspection，Chengdu 610031，China)

The method for determination of phthalic acid esters in edible oil by gel permeation chromatography and HPLC was described.The chromatographic analysis was achieved after the pretreatment by GPC.The separation was performed in a ODS column，acetonitrile-water as mobile phase.A PDA detector was used to detect the compositions at 224nm.The assay linear calibration range was 0.1～8.0mg/L.The limit of quantitation(S/N=3)of DMP，DEP，BBP，DBP，DNOP were 10，10，25，50，50μg/L，respectively.The recoveries at the three spiked levels were ranged from 95%to 110%.The results of repeatability test and reproducibility test provided that this method was repeatable and reproducible.

gel permeation chromatography(GPC);high performance liquid chromatographi(HPLC);phthalic acid esters

TS207.5

A

1002-0306(2011)12-0484-03

鄰苯二甲酸酯(phthalic acid esters，PAEs)又名酞酸酯，為一類普遍使用的化學工業產品，主要用作塑料的加工助劑之一，即增塑劑(Plasticizer)。PAEs是目前主要的環境有機污染物之一，其毒性及危害是具有微弱的雌激素效應，產生生殖毒性，導致生物繁殖能力下降和生殖器官畸形，還有致突變和致癌作用。歐盟2005/84/EC指令、REACH指令、RoHS指令2.0版，美國2008消費品安全改進法案(CPSIA)以及我國國家標準都針對不同產品嚴格規定了鄰苯二甲酸酯類禁止使用的種類和限量。食品在塑料包裝材料中儲存的時間越長，或用于包裝食品的塑料材料中鄰苯二甲酸酯類含量越高，都會加大鄰苯二甲酸酯類向食品中遷移的量，即對食品的污染程度越大［1］。目前，鄰苯二甲酸酯類增塑劑的測定方法包括GC法［2］、GC-MS法［3-6］、HPLC法［7-8］及HPLC-MS法［9-10］，提取技術主要有超聲提取、索氏提取、固相萃取等，但這些方法存在著試劑毒性較大/過程復雜/消耗時間長等缺點。本文首次建立了GPC-HPLC聯用檢測食用植物油中鄰苯二甲酸酯類的方法，此方法簡便、準確、靈敏度高、自動化程度高。

2010-12-15

李仁偉(1965-)，男，高級工程師，研究方向:食品科學。

四川省公益性科技計劃項目(2008NG0008)。