腎活檢用Schiff試劑的配制及保存

孫 璟，楊劍輝

腎活檢全稱為腎穿刺活體組織檢查法，目前臨床常用的方法是在B超引導下，利用穿刺槍從腎臟獲取微量腎臟標本后，在顯微鏡下觀察腎組織學變化。它能對許多腎臟病的診斷、治療以及預后評估提供重要的依據，其價值是其它血、尿檢驗所不能替代的，現已成為腎內科常做的一項重要檢查。過碘酸-Schiff（PAS）特殊染色在腎穿刺活檢病理中主要用于顯示腎小球系膜區的范圍和基膜的厚度，也可顯示腎小球內某些滲出性蛋白、節段性硬化和結節性病灶。因此在該病理診斷中起著非常重要的作用，但是由于PAS染色常常受到各種因素的影響，在實際工作中常存在Schiff試劑難以配制且配制好后保存易失效的問題。通過反復實踐，筆者總結了一些經驗體會，取得了較好的染色效果，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 新鮮腎穿刺組織，用10%的中性甲醛液固定，特殊脫水處理，經石蠟包埋，切片厚2～3 μm，做過碘酸雪夫（PAS）染色。

1.2 試劑配制 ①0.5%高碘酸液的配制：高碘酸0.5 g，蒸餾水100 ml；此液溶解后保存于冰箱中待用；②Schiff液配制：先將100 ml蒸餾水煮沸，加入0.5 g堿性復紅，再煮沸1 min，使其徹底溶解，此時溶液呈深紅色，待其冷卻到50℃時過濾加入10 ml的1 mol/L鹽酸，待25℃，加入0.5～1 g偏重亞硫酸鈉，塞住瓶口，搖動容器以充分混合，在室溫、暗處至少靜置24 h，加入0.7 g活性炭，輕搖數分鐘，靜置1～2 h后，用濾紙過濾至棕色瓶內，此時溶液為無色透明液體，封口，注意一定放入4℃冰箱避光保存。

1.3 方法 ①切片常規脫蠟至水；②0.5%高碘酸氧化10 min；③流水沖洗2 min；④入Schiff液于暗處加蓋染色10～20 min；⑤流水沖洗5 min；⑥用Harri明礬蘇木素液染核2～3 min，0.5%鹽酸乙醇分化，自來水洗后細胞核變藍為止；⑦無水乙醇脫水、風干、透明、封片。

2 結 果

在顯微鏡下，結果顯示腎小球系膜基質、膠原纖維及包漿均呈紅色，細胞核呈藍色。

3 討 論

試劑配制和濃度確定是有效染色的重要因素，PAS染色中，過碘酸是一種氧化劑，它可把多糖的葡萄糖分子的兩個相鄰的帶有羥基的-C-C-鍵打開，而生成醛基再與染色劑結合。高碘酸液濃度一般為0.5%～1%，pH值為3～5。對組織進行單一化學染色時，高碘酸液濃度可適當降低，如腎穿刺活檢組織以0.5%為宜；進行免疫組化和組織化學重復染色時，因染色過程組織受到一定程度破壞，高碘酸液濃度可適當提高，以1%為宜。另外，染色時若環境溫度較高且高碘酸作用時間長，可使某些物質成分發生非特異反應，使結果出現假陽性。因此，環境溫度較高時，可適當縮短反應時間。

Schiff試劑中主要染料是堿性品紅，經亞硫酸和二氧化硫的作用，醌式結構的雙鍵被破壞而消失，已成為無色復紅，再經過氧化后的醛基與無色復紅液進行結合呈紫紅色[1]。因此Schiff試劑質量如何，主要取決于所用試劑堿性品紅的質量、與配制方法、所用器皿的清潔程度及保存是否妥當有關。配制Schiff試劑時，盡量使用高質量的堿性品紅與偏重亞硫酸鈉等試劑，配制過程中必須使用潔凈的器皿，因如和堿性物質接觸也可使無色品紅立即變紅而無效，要避免污染。配制后的Schiff試劑可以小瓶分裝，置于冷凍箱內保存，臨用前取出一小瓶恢復至室溫后使用即可[2]。室溫在15℃以下時可用40℃溫水稍加溫進行反應。染色時，根據Schiff試劑配制的時間與環境溫度，可適當調節作用時間，注意一定要避光染色。染色過程中不可用自來水沖洗太久，防止返紅，另外染色過程中不能接觸伊紅，否則會造成顏色誤差。

判別Schiff試劑是否失效，主要看儲存Schiff液是否變為橘紅色或粉紅色，打開蓋，氣味偏淡或無強烈的刺激性氣味，則證明Schiff試劑已變質并失效。解決方法是：重新添加偏重亞硫酸鈉（Na2SO3）補充H2SO3，取偏重亞硫酸鈉加入到無色品紅失效液中，加入量為每10 ml無色品紅失效液加大約0.05～0.07 g偏重亞硫酸鈉，可恢復其染色力，用上述糾正后的試劑染色，結果均為紅到紫紅色。這時失效的Schiff試劑顏色恢復至無色并帶有強烈的刺激性氣味。通過反復實踐操作發現[3]，用失效的Schiff試劑及糾正后的Schiff試劑分別對腎組織染色。腎穿組織經過處理后Schiff液染色后基底膜呈紅色，見圖1、2，效果非常好。

圖1 失效的Schiff試劑PAS染色

圖2 糾正后的Schiff試劑PAS染色

綜上所述，在腎穿刺活檢病理PAS染色過程中，應該注意固定液的選擇，試劑配制質量、試劑保存方法，染色作用時間等細節問題，PAS染色將會取得滿意的效果，這對腎臟病理診斷具有重要意義，也可為臨床提供治療依據。

[1]王伯沄，李玉松，黃高昇，等.病理學技術[M].北京：人民衛生出版社，2001.150.

[2]沈洪武，王建彪，蘇海燕.PAS染色試劑的保存方法[J].臨床與實驗病理學雜志，2004，20（2）：235.

[3]劉 濤，王 玨，張 健，等.介紹一種PAS染色中無色品紅液失效后的解決方法[J].臨床與實驗病理學雜志，2007，23（2）：230.