嗜酸乳桿蓖生物抗性的研究

程秀云，羅玉芳

(福建華南女子職業學院，福建福州350007)

嗜酸乳桿蓖生物抗性的研究

程秀云，羅玉芳

(福建華南女子職業學院，福建福州350007)

選擇一株嗜酸乳桿菌優良菌株為研究對象，用平板菌落計數法測定嗜酸乳桿菌在各因素的作用下的存活率來研究其耐酸、耐滲透壓、耐膽鹽能力以及模擬人體腸胃環境研究胃酸、食鹽、膽鹽對嗜酸乳桿菌的綜合影響;從實驗結果得出嗜酸乳桿菌具有一定的抗性能力。

嗜酸乳桿菌，耐酸能力，耐滲透壓能力，耐膽鹽能力，綜合影響

嗜酸乳桿菌是人體腸道內的重要益生菌，具有調節腸道微生態平衡，抑制病原微生物生長，緩解乳糖不耐癥，降低膽固醇和抑制腸道腹瀉等作用，被視為第三代酸乳發酵劑菌種;但嗜酸乳桿菌進入人體腸胃環境時，腸胃的高酸、高膽鹽濃度和NaCl濃度都會影響嗜酸乳桿菌的生長和存活，所以實驗模擬人體腸胃環境，研究其存活率對人的保健作用是十分有意義的，特別是對維持胃腸道正常生理功能具有重要意義［1－2］。

1 材料與方法

1.1 材料與設備

嗜酸乳桿菌 學院保存的菌株;牛奶培養基用脫脂乳配成13%水溶液，自然pH，115℃ 10min滅菌，用于活化嗜酸乳桿菌;MRS固體培養基 蛋白胨10g、酵母提取物5g、牛肉膏10g、磷酸氫二鉀2g、檸檬酸二胺 2g、乙酸鈉 5g、葡萄糖 20g、吐溫 80 1mL、MgSO4·4H2O 0.05g、瓊脂 10～15g，蒸餾水 1000mL，pH6.2～6.4，用于嗜酸乳桿菌菌落計數;MRS液體培養基 MRS固體培養基成分中不加瓊脂，用于加入膽鹽作用培養［3－4］;1mol/L HCl 溶液、1mol/L NaOH溶液、NaCl、豬膽鹽 所用試劑均采用分析純，并根據國標配制。

YXQ－LS－50SL型高壓蒸汽滅菌鍋 上海博訊實業有限公司醫療設備廠;PYX－DHS型隔水式點熱恒溫培養箱 上海市躍進醫療器械廠;JT－5003型精密電子天平 深圳市華恒儀器有限公司;微生物實驗常規玻璃儀器。

1.2 實驗方法

1.2.1 嗜酸乳桿菌耐酸能力的測定 將牛奶培養基活化好的菌種10mL分別用1mol/L HCl調節其pH，使之達到 4、3、2、1，37℃ 保溫，在作用時間為 1、2、3、4h 時，進行平板菌落計數，測定其存活率［3，5］。

存活率(%)=鹽酸作用后的活菌數/作用前的活菌數×100%

1.2.2 嗜酸乳桿菌耐滲透壓能力的測定 在MRS固體培養基中加入NaCl，使其濃度分別為0.85%、2%、4%、6%。將牛奶培養基活化好的菌種按稀釋平板分離的方法分別接種于上述培養基中，于37℃恒溫培養，觀察其生長情況，并計數［5－7］。

存活率(%)=添加不同NaCl濃度的MRS培養基中活菌數/正常MRS培養基中的活菌數×100%

1.2.3 嗜酸乳桿菌耐膽鹽能力的測定 在MRS液體培養基中加入豬膽鹽，使其濃度分別為0%、0.1%、0.5%、1.0%、1.5%，分別裝于三角瓶中，每瓶100mL。將牛奶培養基活化好的菌種以5%的接種量分別接種到上述的培養基中，37℃恒溫培養，每間隔1h取出培養液檢測其活菌數，觀察其生長情況［1－4］。

存活率(%)=培養后的活菌數/培養前的活菌數×100%

1.2.4 胃酸、食鹽、膽鹽對嗜酸乳桿菌的綜合影響實驗(模擬胃腸道實驗) 將牛奶培養基活化好的菌種20mL分別用1mol/L HCl調整其pH，使之達到3、2、1，在作用時間為1、2、3h后，用1mol/L NaOH 進行中和，并調pH到7.2～7.4左右，加1%的膽鹽，37℃保溫，在作用時間為1、2、3h后，進行平板菌落計數，測定其存活率［3，5－6］。

存活率(%)=綜合作用后的活菌數/作用前的活菌數×100%

表1 在不同的pH、不同的作用時間下嗜酸乳桿菌的活菌數

表2 NaCl濃度對菌體生長的影響

表3 膽鹽對嗜酸乳桿菌生長的影響

2 結果與討論

2.1 嗜酸乳桿菌耐酸性實驗

食物由口腔進入胃后，會在胃中停留0～6h，而胃中的胃酸pH為0.9～1.5，在此期間胃酸必然會影響到嗜酸乳桿菌的存活。本實驗用HCl模擬胃酸進行嗜酸乳桿菌抗酸性實驗，實驗結果如表1所示。

從表1可以看出，a.在相同的作用時間內，嗜酸乳桿菌活菌數隨著酸度的增加而減少，存活率逐漸下降，在相同的pH下，嗜酸乳桿菌活菌數隨著作用時間的延長而減少，存活率逐漸下降。說明酸度對嗜酸乳桿菌生存有較大的影響。

b.在pH1(相當于空腹時胃酸的酸度)與pH3的條件(相當于飯后胃酸的酸度)4h內，嗜酸乳桿菌的存活率在10%左右，即每毫升仍有106個以上的嗜酸乳桿菌存活，基本能達到其生物效應。說明嗜酸乳桿菌能抵御人體的胃酸的環境而存活，具有良好的耐酸能力。

2.2 嗜酸乳桿菌耐鹽實驗

一般情況下酸奶都在飯后食用，胃中的食物一般都含有一定濃度的食鹽，而嗜酸乳桿菌正常生長不需要添加NaCl，所以食鹽是否會影響嗜酸乳桿菌的生長是值得重視的問題。用加入不同濃度的NaCl的MRS培養基來培養嗜酸乳桿菌，看看嗜酸乳桿菌能耐受多大濃度的NaCl，實驗結果如表2所示。

從表2可以看出，a.隨著NaCl濃度的增加，嗜酸乳桿菌的活菌數逐漸減少，存活率呈下降趨勢。說明NaCl的濃度影響嗜酸乳桿菌的存活。b.在NaCl濃度為2%的MRS培養基中有78%的嗜酸乳桿菌可以正常生長，說明在正常飲食過程中食物中的NaCl濃度基本不影響嗜酸乳桿菌的存活率。

2.3 嗜酸乳桿菌耐膽鹽能力的測定

膽鹽是膽汁的主要成分之一，成年人每日分泌膽汁約800～1000mL至十二指腸中，在正常飲食條件下，膽汁鹽濃度為0.9%～1.5%，膽鹽能對革蘭氏陽性菌生長起抑制作用，嗜酸乳桿菌為革蘭氏陽性菌，要發揮其生理功效，需要通過含高膽汁酸鹽的十二指腸到達腸道的下部，因此菌株應該具有抗膽鹽特性，才能為其在腸道中發揮健康作用打下基礎。

經牛奶培養基活化的菌種每毫升嗜酸乳桿菌數達1.3×108cfu/mL，以5%的接種量接種到100mL含不同濃度膽鹽的MRS液體培養基中，其培養基中嗜酸乳桿菌起始數達4.8×106cfu/mL，經過37℃恒溫培養，每間隔1h取出培養液檢測其活菌數，觀察其生長情況。結果如表3所示。

由表3可知，a.低濃度(0.1%)的膽鹽不影響嗜酸乳桿菌的生長;當膽汁鹽濃度≥0.5%時，隨著膽汁鹽濃度增大，培養時間的延長，嗜酸乳桿菌的活菌數逐漸減少，說明一定濃度的膽鹽對嗜酸乳桿菌的生長有抑制作用。b.在正常的飲食條件下，人體小腸的膽汁鹽濃度為0.9%～1.5%，嗜酸乳桿菌在這種的環境下比較難生長繁殖，但在高濃度的膽鹽條件4h后仍有0.2%左右的嗜酸乳桿菌存活，說明在飲食過程中仍有少部分嗜酸乳桿菌可以到達大腸而定殖，從而改善大腸中的菌系;所以建議每天飲用嗜酸乳桿菌飲料以增加腸道中的乳酸菌菌群數。

2.4 胃酸、食鹽、膽鹽對嗜酸乳桿菌的綜合影響

酸奶攝入后首先受到胃中胃酸、食物中的NaCl綜合影響，經胃排空后進入十二指腸被小腸液中和想的培養條件為:pH7.5，37℃條件下培養，裝液量為的同時也受到膽鹽的作用，這幾方面的綜合作用是否加大對嗜酸乳桿菌的存活率的影響，實驗結果見表4。

表4 嗜酸乳桿菌在胃酸、NaCl、膽鹽綜合作用下的活菌數(cfu/mL)

從表4可以看出，a.胃酸、NaCl、膽鹽共同作用后對嗜酸乳桿菌的存活率影響很大，在強胃酸(pH1)和正常膽鹽濃度的作用下，嗜酸乳桿菌的存活數僅達到十萬分之一，所以空腹時(胃酸pH在2以下)飲用酸奶，能到達大腸的嗜酸乳桿菌數量僅剩攝入量的十萬分之一(假設胃排空時間為1h左右，小腸中停留時間為3h)。b.若在飯后食用酸奶，因食物的中和作用使胃酸pH可達3～5，假設飯后1h飲用酸奶，胃排空約3h(即胃酸作用3h)，在小腸停留時間3h(即膽鹽作用3h)，此時到達大腸的乳酸菌數每毫升可達103個，若飯后2h飲用則每毫升可達104個。c.綜上所述，乳酸菌飲料在早點或午點加餐時飲用較適合，若一次飲用250mL，大約有十萬個左右活的乳酸菌到達大腸而定殖。

3 結論

嗜酸乳桿菌的生長受酸度和膽鹽濃度增加而受到抑制，正常的飲食過程中，NaCl濃度基本上不會影響其生長，胃酸、食鹽、膽鹽對嗜酸乳桿菌的綜合作用對嗜酸乳桿菌存活率的影響較大。所以一方面選擇具有良好耐酸、耐滲透壓、耐膽鹽能力的菌種來生產酸奶從而提高存活率是十分有必要的;另一方面可以選擇在較適宜的時間食用，增加嗜酸乳桿菌在大腸內定殖量，改善大腸中的菌系。

［1］肖仔君，陳惠音，楊汝德.嗜酸乳桿菌及其應用研究進展［J］.廣州食品工業科技，2003，19(B11):90－92.

［2］呂兵，張國農，楊瑞歡.嗜酸乳桿菌生物特性及其發酵乳的研究［J］.中國乳品工業，2002，30(5):37－39.

［3］張帆，王建華，劉立恒，等.嗜酸性桿菌的培養條件及其生物學特性［J］.食品與發酵工業，2005，31(3):43－47.

［4］王天云，陳振風，王福源.嗜酸乳桿菌在不同pH條件下生長和存活情況的研究［J］.工業微生物，2000，30(3):12－15.

［5］趙瑞香，孫俊良，李元瑞，等.嗜酸乳桿菌抗酸抗膽汁鹽能力的研究［J］.西北農林科技大學學報，2004，32(2):57－60.

［6］黃春振，陳有容，齊鳳蘭.嗜酸乳桿菌生理特性的研究［J］.食品研究與開發，2004，25(2):36－38.

Study on the biological resistance of Lactobacillus acidophilus

CHENG Xiu－yun，LUO Yu－fang
(Fujian Huanan Women’s College，Fuzhou 350007，China)

A fine strain of Lactobacillus acidophilus was selected as the research object.It measured the method of plate culture count to confirm the survival of Lactobacillus acidophilus under different factors to study its acid－resistant，osmotic pressure tolerance，salt and bile tolerance and to study the comprehensive influences of gastric acid，salt and bile on Lactobacillus acidophilus by simulating of human gastrointestinal environment.Finally it concluded that Lactobacillus acidophilus had a certain resistance capacity.

Lactobacillus acidophilus;acid－resistant;osmotic pressure tolerance;salt and bile tolerance;comprehensive influence

TS201.1

A

1002－0306(2011)06－0232－03

2009－07－31

程秀云(1970－)，女，碩士，講師，研究方向:微生物應用。