腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體聯合順鉑對宮頸癌細胞的殺傷作用

蔡尚霞,侯 軍,劉 洋,齊 玲,金 宏

(1.吉化集團公司總醫院 婦產科,吉林 吉林市132022;2.吉林醫藥學院)

腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)是腫瘤壞死因子超家族中的一員,可在機體的免疫系統中正常表達,對腫瘤細胞起到免疫監視作用,TRAIL作為凋亡信號的一個傳導途徑為腫瘤的治療提供了一個自然的治療途徑[1,2]。在美國TRAIL作為新型抗腫瘤藥物已進入Ⅱ期臨床試驗階段[3]。但TRAIL在腫瘤細胞中出現誘導凋亡抵抗急需解決,因此我們開展了宮頸癌細胞對TRAIL抵抗的研究。

1 材料與方法

1.1 細胞 HeLa宮頸癌細胞系,吉林醫藥學院實驗中心提供。

1.2 主要試劑 rhTRAIL(Peprotech公司),RPMI 1640細胞培養液、小牛血清(GIBCO公司),順鉑及對硝基苯(上海生物工程技術公司)。

1.3 方法

1.3.1 細胞培養 將HeLa細胞復蘇,培養液用含10%血清的 RPMI 1640,置于培養箱中,37℃,5%CO2,飽和濕度下培養,隔日換液,1∶3傳代。

1.3.2 TRAIL及順鉑對HeLa細胞增殖的影響 待細胞融合至85%,胰酶消化,計數活細胞,以每孔8×103個細胞接種于96孔板中,培養24 h后,每孔單獨加入不同濃度的TRAIL(0.1 ng/ml、1 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml、1 000 ng/ml),或聯合加入順鉑 10 μ g/ml,對照組使用基礎培養基。作用24 h后,小心棄去上清,PBS洗去培養基,每孔加入酸性磷酸酶底物檢測溶液(用對硝基苯新鮮配制)100 μ l,繼續培養90 min,加入終止液,室溫下孵育5 min。酶標儀405 nm處測定各孔光吸收值。

2 結果

TRAIL濃度為10 ng/ml時,細胞死亡率開始有明顯增加(P＜0.05),加入順鉑后,TRAIL濃度為1 ng/ml時,統計學即有顯著性差異(P＜0.05),見表1。

表1 宮頸癌HeLa細胞株對 TRAIL及聯合順鉑誘導凋亡的敏感性(±s)

表1 宮頸癌HeLa細胞株對 TRAIL及聯合順鉑誘導凋亡的敏感性(±s)

與對照組相比:*P＜0.05

0 ng/ml 0.1 ng/ml 1 ng/ml 10 ng/ml 100 ng/ml 1 000 ng/ml TRAIL 0.82±0.04 0.74±0.03 0.66±0.04 0.60±0.06* 0.42±0.04* 0.27±0.03*TRAIL+CIS 0.83±0.03 0.69±0.04 0.60±0.05* 0.50±0.07* 0.39±0.03* 0.22±0.03*

3 討論

TRAIL作為是腫瘤壞死因子超家族中的一員,可經機體內的自然殺傷細胞和樹突狀細胞正常表達,起到了殺傷腫瘤的作用[4],能在多種腫瘤細胞中誘導凋亡,而對正常組織和細胞無明顯毒性作用[5]。化療藥物可以非特異性的與腫瘤細胞及正常細胞同時結合,所以,化療藥物在應用治療量時,也會引起廣泛的化療副反應。最近的研究顯示,非毒性劑量的化療藥物可以增加TRAIL對腫瘤細胞誘導凋亡[6]。

本實驗小組采用HeLa細胞株,應用不同劑量的TRAIL對其進行處理,并且聯合順鉑作用。結果發現:HeLa細胞對不同濃度的TRAIL反應不同,表現為明顯的劑量效應,在單獨應用TRAIL作用時,10ng/ml時HeLa細胞發生明顯的凋亡反應;如果聯合順鉑作用,則在TRAIL 1ng/ml時,就會發生明顯的細胞凋亡。以上研究表明,宮頸癌HeLa細胞株對TRAIL誘導凋亡呈現劑量效應,聯合順鉑后兩者發生了協同作用。但兩者協同作用的機制是什么樣的,還需要深入討論。

[1]SmythMJ,Takeda K,Hayakawa Y,et al.Nature's TRAIL-on a path to cancer immunotherapy[J].Immunity,2003,18(1):1.

[2]Ashkenazi A.Directing cancer cells to self-destruct with pro-apoptotic receptor agonists[J].Nat Rev Drug Discov,2008,7(12):1001.

[3]Bellail AC,Qi L,Mulligan P,et al.TRAIL Agonists on Clinical Trials for Cancer Therapy:The Promises and the Challenges[J].Reviews on Recent Clinical Trials(Online),2009,4(1):34.

[4]SmythMJ,Takeda K,Hayakawa Y,et al.Nature's TRAIL-on a path to cancer immunotherapy[J].Immunity,2003,18(1):1.

[5]GriffithTS,Anderson RD,Davidson BL,et al.Adenoviral-mediated transfer of the TNF-related apoptosis-inducing ligand/Apo-2 ligand gene induces tumor cell apoptosis[J].J Immunol,2000,165(5):2886.

[6]Song JH,Song DK,Herlyn M,et al.Cisplatin down-regulation of cellular Fas-associated death domain-like interleukin-1 beta-converting enzyme-like inhibitory proteins to restore tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand-induced apoptosis in human melanoma cells[J].Clin Cancer Res,2003,15(9):4255.