麥冬注射液對實驗性大鼠腹膜透析并發腹膜炎的影響

王秀梅，姚菲菲，孫立秋，崔蕊，王莉

(哈爾濱醫科大學附屬第四醫院，黑龍江 哈爾濱 150016)

腹膜炎是腹膜透析(Peritoneal Dialysis，PD)患者終止透析的最主要原因，對慢性腎衰PD患者的生活質量和治療效果影響嚴重。有效降低腹膜透析性腹膜炎的發生的治療方法，一直是腎替代研究領域的重要研究課題。近年來，中草藥在PD中的應用受到越來越多的關注，成為中西醫結合的一個重要研究方向［1－2］。在本研究中我們將中藥麥冬注射液加入腹透液中，觀察其對腹膜透析性腹膜炎動物模型腹腔防御功能各項指標的影響，為中草預防PD性腹膜炎尋找有效的藥物。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級雄性SD大鼠40只，體質量(350±41)g，購自黑龍江中醫藥大學動物實驗中心。1.2 藥物 1.5%腹透液(百特公司，批號G1004048);麥冬注射液(含生藥1g/ml，由黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院制劑室提供);大腸桿菌(哈爾濱醫科大學第四醫院細菌室提供)。

1.3 動物分組 隨機法將40只SD大鼠分為模型麥冬透析組(A組)10只、模型常規透析組(B組)10只、正常麥冬透析組(C組)10只、正常常規透析組(D組)10只，共4組，模型麥冬透析組造模成功后應用含生藥1g/ml麥冬注射液的腹透液透析;模型常規透析組造模后使用普通腹透液透析;正常麥冬透析組不造模，使用含生藥1g/ml麥冬注射液的腹透液透析;正常常規透析組不造模，使用普通腹透液透析。

1.4 腹膜炎模型制作及透析方法 實驗第1天，兩個模型每只大鼠在無菌條件下從左下腹注入大腸桿菌1×106個，隨即4組大鼠均開始透析。參照文獻［3］，用前使用恒溫箱將1.5%腹透液加熱至38℃，嚴格消毒大鼠腹部，分別將上述不同配方的腹透液25m1用8號針頭注入腹腔。2h后用12號針頭將透析液通過放出，每只大鼠每天1次，連續7天。

1.5 巨噬細胞吞噬功能檢測 按照文獻［4］所述方法。1)Alserver＇s保存液配制:電子分析天平稱取枸櫞酸三鈉·2H2O 2.4g，葡萄糖6.15g，氯化鈉 1.26g，置小燒杯中，加300mL蒸餾水，過濾分裝，高壓滅菌20min，儲存于4℃冰箱備用。2)雞紅細胞懸液的配制:15mL血在無菌條件下取自雞翼下靜脈，置100mL疫苗瓶中，加入5倍的Alsemer＇s保存液中，放4℃冰箱。使用前先用生理鹽水洗滌雞紅細胞懸液3次，1 500r/min 5min離心2次，棄上清液和界面的白細胞層。最后連續2次離心(2 000r/min，5min)，離心至壓積恒定，并用生理鹽水將雞紅細胞懸液配成3%(V/V)。3)在實驗進行至第8天晨消毒大鼠后，將3%雞紅細胞懸液2mL腹腔注射每只大鼠，注射后1h后斷頸處死后輕微翻動，吸取每只腹腔液，涂布于載玻片上，每只大鼠涂片4～5張，放置于墊有濕紗布的搪瓷盆內，在37℃溫育30min，以生理鹽水漂洗，洗去未被吞噬的雞紅細胞及其他無關細胞，吹風機吹干，置于甲醇、1∶1丙酮溶液固定5min，4%Giemsa－wright染液染色 3min，吹干后在油鏡下計數巨噬細胞數，即為所吞噬的雞紅細胞數，以此計算出吞噬百分數及吞噬指數。

1.6 一般情況觀察 從實驗開始連續觀察各組動物的精神狀態、大小便次數、進食情況，有無煩躁、寒戰等一般情況。

1.7 指標檢測 透析至第7天時各組透出液分別送檢腹透液常規、腹透液細菌培養加細菌落計數。第8天各組送檢巨噬細胞吞噬功能試驗。

2 結果

2.1 四組大鼠一般情況及癥狀變化 模型麥冬透析組(A組)、模型常規透析組(B組)在造模后3天內分別出現不同程度精神萎靡、活動量減少，但發現有寒戰、煩躁、進食減少等其他臨床癥狀。在3天后，精神、活動量也恢復正常，其他兩組未見異常表現。實驗結束時每組大鼠成活只數為A組8只，B組7只，C組8只，D組9只。

2.2 各組透析第7天腹腔液細菌培養結果 細菌培養僅模型麥冬透析組(A組)和模型常規透析組(B組)各有一個腹透液樣本大腸桿菌為陽性，其余樣本均呈陰性。

2.3 透析至第7天各組大鼠腹透液中白細胞總數、細胞分類和蛋白質濃度 如圖1顯示，模型麥冬透析組(A組)、正常麥冬透析組(C組)及正常常規透析組(D組)腹透液中白細胞總數、中性粒細胞數均顯著低于模型常規透析組(P＜0.05或P＜0.01)，而A、C、D組間比較各項指標無顯著性差異;各組腹透液蛋白質濃度比較無明顯差異(均P＞0.05)。

2.4 透析第8天各組大鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能變化情況 如圖2顯示，模型常規透析組(B組)的巨噬細胞吞噬百分率和吞噬指數均低于模型麥冬透析組(A組)、正常麥冬透析組(C組)及正常常規透析組(D組)(P＜0.05或P＜0.01);正常麥冬透析組的吞噬百分率明顯高于常規透析正常組，而兩組的吞噬指數則差異無顯著性。

圖1 各組腹透液白細胞總數、細胞分類及蛋白質濃度變化

圖2 各組腹腔巨噬細胞吞噬功能變化比較

2.5 第8天各組腹腔巨噬細胞吞噬功能變化情況

圖2顯示，常規透析模型組的巨噬細胞吞噬百分率及吞噬指數低于麥冬透析模型組、麥冬透析正常組及常規透析正常組(P＜0.05或P＜0.01);麥冬透析正常組的吞噬百分率高于常規透析正常組，而兩組的吞噬指數則無顯著性差異。

3 討論

腹膜透析是終末期腎臟病二大替代治療之一，其優點和獨到之處已經逐漸被人們接受，在透析的前2～4年治療中，患者生存優勢明顯超過了血液透析［5］。甚至有些學者認為，是終末期腎臟病的首選透析方法［6］。腹膜炎是腹膜透析患者終止透析的主要原因，其發生除與各種操作因素、內外環境因素等密切相關外，環境因素中腹腔防御功能的減退是腹膜透析并發腹膜炎的重要原因。從此內因出發，通過在腹透液中加入某些免疫調節因子，用以增強腹腔防御功能是防治腹膜炎并發癥的有效方法［7］。近年來向腹透液加入具有免疫調節作用的中藥制劑預防腹膜炎的發生，受到越來越多的重視。國內外大量研究表明，麥冬多糖可以促進體液免疫和細胞免疫功能，并誘生多種細胞因子。顯著增加小鼠脾重量、增強小鼠碳粒廓清的作用(增加小鼠網狀內皮系統的吞噬能力)。麥冬通過一定的免疫促進作用對荷瘤小鼠具有一定的抑瘤譜及抑瘤強度，其作用機制與麥冬能夠提高NK細胞的活性有關。同時在促進中性粒細胞趨化運動、增強機體非特異性免疫和機體抵抗力等方面，麥冬也有明顯的作用［8－9］。基于以上事實，我們進行了麥冬對腹膜透析腹膜炎的影響的研究。其中，確定藥物劑量是關鍵的步驟。在參閱了大量既往相似的研究后，我們以小劑量、不明顯影響腹透液的重要理化參數為原則，反復調試發現，含生藥1g/ml麥冬注射液的腹透液的各項指標，諸如pH值、滲透壓及電解質含量改變不明顯，故爾采用該濃度作為進一步實驗的觀察劑量。我們的研究結果與以往的研究結果是一致的，即腹膜透析可致巨噬細胞的吞噬作用受到抑制，缺乏吞噬能力［10］。常規透析模型組的白細胞總數、中性粒細胞數明顯高于治療組模型麥冬透析組，表明腹腔給予麥冬注射液能夠降低腹膜透析腹膜炎的發病程度。本研究結果還顯示，模型麥冬透析組的巨噬細胞吞噬百分率、吞噬指數明顯高于模型常規透析組，進一步提示該藥可能是通過免疫調節途徑，從而增強腹腔內巨噬細胞的吞噬功能，提高了腹腔的防御機制，減少了腹膜炎的發生。正常麥冬透析組和正常常規透析組的白細胞數量及分類上兩項指標無明顯差異，說明麥冬注射液在該劑量對腹腔無明顯的不良刺激性，不能引起腹腔的炎癥反應。綜上，麥冬在預防腹膜透析性腹膜炎領域值得今后進一步研究，以便在臨床中推廣應用。

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