長期注射地西泮對小鼠痛閾及嗎啡鎮(zhèn)痛作用的影響

殷智宇 王曉毅 蔣 超

1 徐州醫(yī)學(xué)院麻醉學(xué)院2008級灌注班，江蘇省徐州市 221000； 2 徐州醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院08預(yù)防班

地西泮（diazepam，安定）是苯二氮卓類（BDZ）藥物，通過激動γ－氨基丁酸（GABA）上的苯二氮卓受體（GABAA），發(fā)揮抗焦慮和鎮(zhèn)靜催眠等作用［1］。現(xiàn)如今，社會壓力日益增大，焦慮、失眠人群大大增加，作為鎮(zhèn)靜催眠的經(jīng)典藥物，地西泮由于其經(jīng)濟、有效而受到失眠患者的青睞，在地西泮得到廣泛應(yīng)用的同時，其不良反應(yīng)和依賴成癮現(xiàn)象也逐漸增多［2］。最新研究表明，地西泮還具有鎮(zhèn)痛作用［3，4］。但現(xiàn)階段，地西泮鎮(zhèn)痛領(lǐng)域的研究多以短期注射為主［5］，長期注射地西泮及其劑量對痛閾的影響未見相關(guān)報道；作為特定的藥物依賴人群，長期使用地西泮的失眠患者，對手術(shù)麻醉中常規(guī)鎮(zhèn)痛藥物嗎啡是否有影響也未見相關(guān)報道。本實驗擬通過熱甩尾方法［6］，對長期注射地西泮的小鼠痛閾及嗎啡鎮(zhèn)痛作用的影響進行探討。

1 材料和方法

1.1 實驗動物 昆明種小鼠，由徐州醫(yī)學(xué)院動物實驗中心提供，體重18～22g，雌雄各半，動物置于（24±2）℃室溫下，自由飲食攝水，所有動物適應(yīng)環(huán)境3d后進入實驗。

1.2 實驗藥品 地西泮注射液（江蘇濟川制藥有限公司，批號101118）；嗎啡注射液（青海制藥廠）。用生理鹽水稀釋成所需濃度。

1.3 實驗儀器 數(shù)量恒溫攪拌循環(huán)水箱（常州國華電器有限公司，型號：H H－42，編號：508652）。

1.4 動物分組及處理 篩選熱水甩尾潛伏期為3～5s的小鼠30只，雌雄各半，將小鼠隨機分為三組：生理鹽水組（NS）、地西泮 D1（8mg／kg）組、地西泮D2（16mg／kg）組（n＝10），從測定基礎(chǔ)痛閾當(dāng)天開始，每天15：30給三組小鼠分別腹腔注射生理鹽水（NS組）、地西泮8mg／kg（D1組）、地西泮16mg／kg（D2組），連續(xù)給藥8d。所有藥物注射容積均為0.1ml／10g。連續(xù)給藥8d后，停止給藥并正常飼喂24h，第10天注射嗎啡0.125mg／kg。

1.5 實驗方法 將小鼠尾部垂直浸入（49±0.5）℃的恒溫水浴中，浸入長度為1／3左右，以尾縮回水面的潛伏期為測痛指標(biāo)。選擇甩尾潛伏期為3～5s的小鼠進行實驗。實驗時，用秒表計時，從浸入水中到甩尾反應(yīng)的潛伏期作為痛閾，為防止皮膚燙傷，甩尾截止時間設(shè)定為10s，超過10s者，記錄為10s。記錄各組小鼠的基礎(chǔ)痛閾（注射地西泮前測熱甩尾潛伏期2次，間隔5min，取其平均值為基礎(chǔ)痛閾）、注射地西泮之后，注射嗎啡之前和注射嗎啡10min后的熱甩尾潛伏期［6］。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)以Mean±SD表示，采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，組內(nèi)比較采用配對t檢驗，組間比較采用完全隨機設(shè)計方差分析和多重比較。

2 結(jié)果

2.1 長期注射地西泮對小鼠熱水甩尾潛伏期的影響 地西泮給藥前，各組小鼠之間的熱水甩尾潛伏期無統(tǒng)計學(xué)差異（P＝0.134，P＞0.05）。給藥后發(fā)現(xiàn)，與生理鹽水組比較，D1組小鼠的痛閾顯著提高（P＝0.005，P＜0.01），而D2組小鼠的痛閾與 NS組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；D1與D2組比較發(fā)現(xiàn)，不同濃度的地西泮對小鼠熱水甩尾潛伏期的影響存在著顯著差異（P＝0.005，P＜0.01），D1組痛閾顯著高于D2組。經(jīng)配對樣本t檢驗，NS組給藥前后熱水甩尾潛伏期無明顯差異（P＝0.313，P＞0.05）；D1組給藥后熱水甩尾潛伏期顯著延長（P＝0.004，P＜0.01）；D2組給藥后熱水甩尾潛伏期也顯著延長（P＝0.018，P＜0.05）。結(jié)果見表1。

表1 地西泮給藥前后小鼠熱水甩尾潛伏期的變化（±s，n＝10）

表1 地西泮給藥前后小鼠熱水甩尾潛伏期的變化（±s，n＝10）

注：組內(nèi)與給藥前比較，＊P＜0.05，ΔP＜0.01；與NS組比較，＃P＜0.01；與D1組比較，★P＜0.01。

NS組 D1組 D2組給藥前 3.67±0.75 3.81±0.76 3.64±0.84給藥后 3.42±0.82 5.49±1.10Δ＃ 4.78±0.84＊★

2.2 長期注射地西泮對嗎啡鎮(zhèn)痛作用的影響 長期給予D1和D2劑量的地西泮后，再給予嗎啡進行熱水甩尾實驗，發(fā)現(xiàn)雖然D1和D2組小鼠的甩尾潛伏期均有所延長，但與NS組比較均無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。另外，不同濃度的地西泮對嗎啡鎮(zhèn)痛作用的影響也無顯著性差異（P＞0.05），見表2。

表2 長期注射地西泮對嗎啡鎮(zhèn)痛作用的影響（±s，n＝10）

表2 長期注射地西泮對嗎啡鎮(zhèn)痛作用的影響（±s，n＝10）

NS組 D1組 D2組潛伏期（s） 6.72±2.33 8.52±1.56 8.51±1.32

3 討論

地西泮是經(jīng)典的苯二氮卓類藥物，通過激動苯二氮卓受體，增加氯離子通道的開放頻率，發(fā)揮抗焦慮和鎮(zhèn)靜催眠等藥理作用［1］。研究表明，苯二氮卓結(jié)合位點的分布情況與中樞抑制性遞質(zhì)GABA A受體的分布基本一致［6］。胡麗等證實了地西泮具有短期鎮(zhèn)痛作用且該作用與GABAA受體有關(guān)［5］。本文結(jié)果表明，長期注射不同劑量的地西泮不同程度的延長了小鼠的痛閾，推測地西泮在小鼠熱甩尾實驗中產(chǎn)生的鎮(zhèn)痛作用是通過活化苯二氮卓位點，從而易化GABA和GABAA受體的結(jié)合，導(dǎo)致GABAA受體活化后產(chǎn)生超級化的抑制性突觸后電位（IPSP）增強，中樞神經(jīng)元的抑制作用增強。此外還可能通過加強γ－氨基丁酸對阿片肽鎮(zhèn)痛系統(tǒng)［7］、N－甲基－D－天冬氨酸系統(tǒng)［8］、5－羥色胺系統(tǒng)［9］的作用而產(chǎn)生復(fù)雜的中樞抗傷害效應(yīng)，其精確機制仍有待進一步研究。增大地西泮給藥劑量后，地西泮的鎮(zhèn)痛作用反而減弱，原因可能有以下兩個方面：（1）機體腸道中含有較多的γ－氨基丁酸（GABA）［10］，GABA被吸收，從門靜脈循環(huán)進入肝臟，肝臟中含有豐富的GABA轉(zhuǎn)換酶，它可以迅速分解GABA，從而降低血及中樞的GABA濃度。當(dāng)長期注射超過地西泮效能的藥物劑量后，不良反應(yīng)增多，機體通過肝臟反饋性的代償合成較多的GABA轉(zhuǎn)換酶來降低地西泮的全身作用，也導(dǎo)致了地西泮鎮(zhèn)痛作用的明顯下降。（2）有研究表明GABA神經(jīng)元對疼痛的傳遞作用具有兩面性，即會易化某些區(qū)域的疼痛的傳播而同時會抑制另外區(qū)域的疼痛傳播［11］。因此，高濃度的地西泮可能通過改變某些部位的神經(jīng)傳遞方式，改變疼痛的傳播，從而使其鎮(zhèn)痛作用減弱，各劑量區(qū)間對其影響有待進一步研究。嗎啡屬于阿片類生物堿，為阿片受體激動劑，通過模擬內(nèi)源性抗痛物質(zhì)腦啡肽的作用，激動中樞神經(jīng)阿片受體而產(chǎn)生強大的鎮(zhèn)痛作用［12］。劉文雄、張月明等研究分別表明：硬膜外或蛛網(wǎng)膜下腔安定－嗎啡聯(lián)合給藥，嗎啡的鎮(zhèn)痛效果增加［13，14］。本文結(jié)果顯示，長期注射地西泮后嗎啡的鎮(zhèn)痛作用增加，但無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。筆者分析實驗所示的嗎啡痛域的增加無統(tǒng)計學(xué)意義可能與以下原因有關(guān)：（1）嗎啡主要通過激動阿片受體鎮(zhèn)痛，地西泮主要通過GABA A受體發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用，二者的鎮(zhèn)痛途徑和通路不同，而嗎啡強大的鎮(zhèn)痛作用可以掩蓋了部分地西泮的鎮(zhèn)痛作用，導(dǎo)致注射嗎啡后，D1組和D2組之間痛閾相對差異減小；（2）可能與所采用的研究方法、條件、給藥方式和樣本數(shù)量大小有一定關(guān)系。改變上述實驗因素，可能出現(xiàn)陽性實驗結(jié)果。本文結(jié)果為指導(dǎo)臨床在對長期使用地西泮的患者進行手術(shù)時，鎮(zhèn)痛藥物嗎啡劑量的合理應(yīng)用提供了參考。

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