微血管計數和侵入在腎細胞癌中的表達及意義

張慕淳，張赟，王金輝，王永剛，高吉，馬天武，溫建平，孔祥波

（吉林大學中日聯誼醫院泌尿外科，長春 130033）

腎細胞癌（renal cell carcinoma，RCC）是一種泌尿外科常見的惡性腫瘤，占成人惡性腫瘤的3%，男女比例為2∶1。RCC以腎小管為中心旋轉生長，且組織內新生血管豐富，血管間多形成動靜脈瘺［1］。盡管腫瘤的大小、分級、核的非典型性等因素都與患者預后相關，但是目前RCC的生物學行為還難以預測。本研究旨在研究RCC中微血管的發生和侵入與腫瘤分期及發生復發轉移的關系，并評價腫瘤的惡性程度及患者預后情況，為術后的靶向治療或其他輔助治療提供依據。

1 材料與方法

1.1 組織標本

臨床資料RCC組織標本88例。臨床病理分期T111例，T252例，T3a18例，T3b7例；術后發生轉移17例；患者年齡38～82歲。標本切片厚4 μm，用二甲苯和乙醇去掉石蠟，水化并在檸檬酸緩沖液中孵化使抗原恢復活性，在微波中干燥，備免疫組化染色用。

1.2 主要試劑

鼠抗人CD34單克隆抗體和兔抗人CD34單克隆抗體、Ⅷ因子相關抗原（丹麥DAKO公司生產）。

1.3 方法

染色過程使用DAKO公司生產的檢測試劑盒。為了對血管的發生進行定量分析，首先在低倍鏡下（×100）觀察，分別標記腫瘤微血管數量最豐富的區域，然后隨機選擇3個區域，在高倍鏡下（×400）計數微血管數量，并計算血管的平均數。為了觀察微血管的入侵，在高倍鏡下檢查腫瘤的周邊，對明確入侵的血管計數。當一組腫瘤細胞被由Ⅷ因子相關抗原或CD34明確染色的內皮細胞包圍時，認為存在血管入侵［2～4］，以評估微血管的發生與侵入與臨床病理分期之間的關系。入組病例均隨訪4年，分為無復發轉移組和復發轉移組。

1.4 統計學處理

采用SPSS 13.0統計軟件，采用χ2檢驗比較各組間發生復發轉移的比率，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

4年隨訪期間有17例患者發生腫瘤復發或者轉移（復發轉移組），71例患者無癥狀存活（無復發轉移組）。根據病理分期，T1患者11例，其中無癥狀生存10例（90.9%），1例發生轉移；T2患者52例，其中無癥狀生存45例（86.5%），7例發生轉移；T3a患者18例，其中無癥狀生存12例（66.7%），6例發生轉移；T3b患者7例，其中無癥狀生存4例（57.0%），3例發生轉移。T1期與T2期患者比較，發生轉移的比例的差異無統計學意義，而T3a及T3b期患者分別與T2期患者比較，發生轉移的比例的差異有統計學意義（P<0.05），證實RCC分期和分級越高，發生轉移的比例也越高，分期與RCC患者的預后密切相關。腫瘤的分期和分級與預后之間的關系見表1。

表1 腫瘤分期與分級與預后之間的關系T a b.1 T h e r e l a t i o n b e t w e e n n e o p l a s m s t a g i n g，g r a d i n g a n d p r o g n o s i s I t e m P a t i e n t s［n（%）］ W i t h o u t M e t a s t a s i s［n（%）］ M e t a s t a s i s［n（%）］S t a g i n g T 1 1 1（1 2.5） 1 0（9 0.9） 1（9.1）T 2 5 2（5 9.1） 4 5（8 6.5） 7（1 3.5）T 3a 1 8（2 0.4） 1 2（6 6.7） 6（3 3.3）1）T 3b 7（8.0） 4（5 7.0） 3（4 3.9）1）G r a d i n g G 1 1 8（2 0.4） 1 8（1 0 0.0） 0（0）G 2 4 9（5 5.7） 4 0（8 1.6） 9（1 8.4）G 3 1 7（1 9.3） 1 2（7 0.5） 5（2 9.5）G 4 4（4.6） 1（2 5.0） 3（7 5.0）1）P<0.0 5 v s T 2.

用Ⅷ因子相關抗原染色時，43例標本發生了微血管侵入，其中30例屬于無復發轉移者的標本（占無復發轉移組的42.3%），13例屬于發生腫瘤復發轉移的標本（占復發轉移組的76.5%），2組比較差異有統計學意義（P<0.01）。對RCC組織中微血管進行計數，在無復發轉移組和復發轉移組患者中平均微血管數量分別52.3和96.6，2組比較差異有統計學意義（P<0.01）。用CD34標記染色時，在71例無復發轉移的患者樣本中13例（18.3%）發生微血管侵入，而17例（47.1%）有復發轉移的患者樣本中8例存在微血管侵入，2組比較差異有統計學意義（P<0.05）。

3 討論

RCC是一種無法預測其生物學行為的腫瘤。新生微血管是腫瘤生長、侵襲和轉移的基礎。有研究認為［5～7］實體腫瘤細胞的生長期可分為無血管的侵襲前期和血管化的侵襲生長期。腫瘤血源性轉移的動力來自于腫瘤細胞侵入微血管。由于新血管生成在腫瘤浸潤、轉移中的關鍵作用，所以客觀、準確地反映微血管新生程度尤為重要。在人類腫瘤組織中，血管發生的重要性近年來已陸續有文章報道。許多研究表明，用免疫染色的微血管計數可以評估腫瘤轉移及腫瘤再發生的危險性和預后生存率［6～9］。但RCC的研究結果卻不一致。Yoshino［10］發現，腫瘤微血管計數是早期RCC中唯一有顯著意義的預后因子。而Maclenman［11］的研究卻未證實微血管計數與RCC患者臨床和病理分期分級有任何相關性，認為微血管計數對于RCC臨床預后沒有預測價值。因此，本研究中我們采用2種免疫組化染色方法評估微血管發生和侵入對預后的影響。我們發現，在微血管形成的基礎上，對于是否有轉移的發生CD34染色無判別意義；但用CD34標記的微血管形成的計數要高于Ⅷ因子標記的，有研究［2］證實CD34的特異性比Ⅷ因子低，更適合染色非內皮細胞。用CD34染色時微血管計數要高于實際血管數，掩蓋了2組患者之間的區別。當用Ⅷ因子染色RCC組織時，發生復發轉移與無復發轉移者的標本中血管計數則有顯著的統計學差異。

本實驗證實，用2種染色方法對RCC標本進行微血管侵入研究，在無癥狀生存者標本及有復發轉移發生者的標本中均有顯著的統計學差異，我們認為血管侵入能很好的預示RCC術后發生復發或轉移的高風險，對預后判斷有較高價值。對RCC患者手術切除標本進行微血管侵入和微血管計數的研究，可提示具有腫瘤轉移高風險的患者需要進一步隨訪觀察或進行靶向治療、輔助治療以抑制RCC復發或轉移。

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