肝素對燙傷鼠血漿TNF-α及門靜脈內毒素的影響

王傳強

(煙臺市煙臺山醫院，山東 煙臺 264000)

近年來，肝素被人們發現有許多新的作用，包括 促進創面愈合［1］、改善微循環、增強臟器功能［2，3］、減少腸道細菌移位［4］、保護腸黏膜屏障和免疫調節等［5］。2008年1～12月，我們就肝素對燙傷鼠門靜脈血內毒素(LPS)及血漿TNF-α的影響進行了研究。

1 材料與方法

1.1 動物模型制備及分組 將雄性Wistar大鼠(體質量200～250 g)70只隨機分為對照組10只、燙傷組30只和肝素加燙傷組(肝燙組)30只。根據傷后時間點不同，燙傷組和肝燙組又分為燙傷后8、12、24 h三個時間點，每個時間點為一亞組，分別為10只。實驗前所有動物禁食12 h，自由飲水。3%戊巴比妥鈉(30 mg/kg)腹腔內注射麻醉后，背部涂以20%硫化鈉脫毛，1 min后溫水沖凈背部，將大鼠背部浸于沸水中造成35%深Ⅱ度燙傷(經病理證實)。燙傷后腹腔內注射乳酸林格氏液40 ml/kg抗休克，創面涂艾利克每日2次。肝燙組于傷后立即、4 h、8 h分別皮下注射硫酸肝素100 U/kg;對照組和燙傷組均給予等量的生理鹽水，三組動物分籠飼養，禁食，可自由飲水。燙傷組和肝燙組分別于傷后8、12、24 h點處死動物每時相每組10只，對照組實驗開始8 h一次處死，門靜脈及腹主動脈穿刺取血。

1.2 LPS測定 微量LPS檢測藥盒購自上海化學檢驗所。門靜脈穿刺取血，根據藥盒說明檢測門靜脈LPS。標本的采集與測定過程中均注意無菌、無熱源操作，以防污染。

1.3 TNF-α測定 TNF-α檢測藥盒購自美國Endogen公司。腹主動脈穿刺取血，根據藥盒說明，用雙抗體夾心酶鏈免疫吸附測定血漿TNF-α。

1.4 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件，檢測結果用表示，組間比較采用t檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組大鼠門靜脈LPS測定結果 見表1。

表1 三組門靜脈LPS水平比較(EU/ml，)

表1 三組門靜脈LPS水平比較(EU/ml，)

注:與本組燙傷前比較，*P＜0.01;與燙傷組對應時相比較，△P＜0.01;與本組燙傷8 h、24 h 比較，▲P ＜0.01

組別 燙傷前 燙傷8 h 燙傷12 h 燙傷24 h燙傷組 0.07 ±0.05 0.94 ±0.22* 1.94 ±0.52＊▲ 1.66 ±0.46*肝燙組 0.07 ±0.04 0.64 ±0.31＊△1.32 ±0.31＊△ 1.08 ±0.10＊△對照組0.07 ±0.05 - - -

2.2 三組大鼠血漿TNF-α測定結果 見表2。

表2 三組大鼠血漿TNF-α水平比較(pg/ml，)

表2 三組大鼠血漿TNF-α水平比較(pg/ml，)

注:與本組燙傷前比較，*P＜0.01;與燙傷組對應時相比較，△P＜0.01;與本組燙傷8 h、24 h 比較，▲P ＜0.01

組別 燙傷前 燙傷8 h 燙傷12 h 燙傷24 h燙傷組 1.31 ±0.45 6.62 ±1.68* 17.50 ±1.60＊▲ 13.12 ±2.94*肝燙組 1.30 ±0.48 2.80 ±1.23＊△ 10.60 ±2.98＊△ 5.60 ±1.71＊△對照組1.29 ±0.46 - - -

2.3 燙傷組與肝燙組死亡率的比較 肝燙組30只無死亡;燙傷組24 h內死亡2只，死亡率6.7%。兩組死亡率無統計學差異(P＞0.05)。

3 討論

機體在應激狀態如失血、創傷等情況下，腸黏膜屏障破壞，大量腸內細菌和內毒素穿過腸壁，侵入腸外器官組織，刺激細胞因子如TNF-α、IL-6、IL-8等產生，導致全身炎癥反應、器官功能不全及多器官系統衰竭，造成患者死亡。實驗證明對腸屏障功能的保護可以防止或減少腸道微生物和毒素侵入血循環。近年發現，肝素可以促進創傷愈合，抑制腸道細菌移位［6］，增強各重要臟器功能和調節免疫等［7］。

Sivrent等［4］給25%和32%深Ⅱ度燒傷鼠使用硫酸肝素后，發現肝燙組與燙傷組相比，腸黏膜質量、腸黏膜厚度及蛋白含量無明顯變化，臟器細菌移位率和燒傷鼠死亡率下降。本實驗證明燙傷后門靜脈血LPS明顯升高，以傷后12 h最明顯，傷后24 h仍遠高于正常。門靜脈LPS的升高證明燙傷后LPS可由腸腔進入血液。LPS血癥能提高腸黏膜屏障對腸內容物的通透性;同時，LPS激活單核巨噬細胞等釋放細胞因子，尤其是TNF-α進一步導致了腸黏膜的損傷。本實驗肝燙組各時相門靜脈血LPS水平下降，而且各時相與燙傷組有顯著差別。燙傷鼠使用肝素后，可能通過保護腸黏膜屏障，減少LPS和細菌移位，從而降低了門靜脈血LPS水平。

本實驗也證實燒傷后血漿TNF-α升高。TNF-α在細胞因子連鎖反應中起著重要作用，它不僅能刺激其他細胞因子的表達，而且可以通過此放大作用間接增強本身效應。燙傷后大量產生的TNF-α在內臟損傷和多器官衰竭中起重要作用。本組資料表明35%深Ⅱ度燙傷鼠，傷后8、12、24 h血漿TNF-α均明顯升高，以傷后12 h達最高峰，24 h仍遠高于正常，傷后三時相TNF-α值與傷前相比均有顯著差異，證明燙傷后血漿TNF-α升高。給大鼠皮下注射肝素后血漿TNF-α均顯著下降，說明肝素可以抑制TNF-α的產生，其機理有待進一步研究。

誘導TNF-α產生的最有效物質是LPS。本組實驗證明燙傷后 LPS與TNF-α明顯升高，8、12、24 h三時相LPS和TNF-α呈正相關，說明LPS可刺激TNF-α的產生。LPS刺激產生 TNF-α的機制是:LPS與單核巨噬細胞膜上的LPS受體如LPS結合蛋白形成復合物后，再與CD14可溶性受體相互作用于單核巨噬細胞，產生TNF-α。CD14是存在于單核巨噬細胞膜上的糖蛋白，創傷后患者血漿可溶性CD14顯著升高，與創傷的嚴重程度和膿毒血癥的發生一致［8］。

本實驗顯示，燙傷鼠使用肝素后可能通過保護腸黏膜屏障［9］，從而抑制腸道細菌內毒素的移位，使TNF-α產生減少，提高生存率。但燙傷鼠24 h內門靜脈LPS、血漿TNF-α均未降至正常，可能與我們觀察時間短有關。

［1］Kratz G，Arnander C，Swedenborg J，et al.Heparin-chitosan complexes stimulate wound healing in human skin［J］.Scand J Plast Reconstr Surg Hand Surg，1997，31(2):119-123.

［2］Wang P，Singh G，Rana MW，et al.Preheparinization improves organ function after hemorrhage and resuscitation［J］.Am J physiol，1990，259(28):645-650.

［3］Rana MW，Sing G，Wang P，et al.Protective effects of preheparinization on the microvasculature during and after hemorrhagic shock［J］.J Trauma，1992，32(4):420-426.

［4］Sirvent LZ，Hansbroug JF，Greenleaf GE，et al.Reduction of bacterial translocatoin and intestinal structural alterations by heparin in a murine burn injury modelk［J］.J Trauma，1994，36(1):1-6.

［5］Zellweger R，Ayala A，Zhu XL，et al.A novel nonanticoagulant haperin improves splenocyte and peritoneal macrophage immune function after trauma hemorrhage and resusciation［J］.J Surg Res，1995，59(1):211-218.

［6］張文安，岑瑛，強歐.肝素對Ⅱ度燙傷大鼠腸道細菌移位影響的實驗研究［J］.中華燒傷雜志，2002，18(2):52.

［7］岑瑛，嚴小蓉，羅攀.肝素對深Ⅱ度燒傷大鼠的影響［J］.中華燒傷雜志，2001，17(3)，174-175.

［8］Kruger C，Schutt C，Obertacke U，et al.Serum CD14 level in po1ytraumatized and severely burned patients［J］.C1in Exp Immun，1991，85(5):287-301.

［9］Yagmurdur MC，Turk E，Moray G，et al.Effects of heparin on bacterial translocation and gut epithelial apoptosis after burn injury in the rat:dose-dependent inhibition of the complement cascade［J］.Burns，2005，31(5):603-609.