川芎嗪對缺血性腦損傷大鼠腦勻漿、血清中TNF-α、IL-10 水平的影響

王維和，趙敬富，張曙光，鞏同玉，劉 靜

(桓臺縣人民醫院，山東 桓臺 256400)

川穹嗪(TMP)具有活血化瘀的作用，其可通過血腦屏障，擴張小動脈、改善微循環和增加腦血流量發揮腦保護作用。近期，我們觀察了TMP對缺血性腦損傷(HIBD)大鼠腦勻漿、血清TNF-α、IL-10的水平影響，探討其腦保護作用的機制。

1 材料與方法

1.1 材料 成年Wistar大鼠135只，7周齡。由濱州醫學院實驗動物中心提供，本實驗室合籠生產;正常哺乳喂養，雌雄不限，體質量(150±3.5)g。鹽酸TMP注射液(北京市永康藥業有限公司);大鼠TNF-α、IL-10 ELISA試劑盒(美國Biosource公司);Bcl-2抗體(北京中杉生物試劑有限公司);免疫組化SP試劑盒(美國ZYMED公司);高速低溫離心機(德國Hares公司);組織脫水機、石蠟包埋機、組織切片機(德國Leica公司);全自動酶標儀(美國Multiskan M.S公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 模型制備及干預 參照Rice等［1］方法。制作腦損傷模型:大鼠行乙醚麻醉，仰臥位固定于手術臺上，頸前正中切口，分離右側頸總動脈并結扎。其中45只大鼠(對照組)縫合皮膚，另90只大鼠于半小時后放入2 L的缺氧密閉容器中，通8%O2與92%N2的混和氣體1 h，溫度(36.5 ±0.5)℃。制模成功(阻斷右側頸總動脈血流后立即出現左側肢體活動減少，在桌面爬行時向左轉圈，不符合上述標準者棄去不用)隨機分為TMP組和生理鹽水組各90只。TMP組腹腔注射TMP 30 mg/kg，生理鹽水組注射等量生理鹽水。模型制備完成后即刻(0 h)及12 h后各注射1次。

1.2.2 TNF-α、IL-10水平檢測 各組均于制模后0、6、12、24、48 h 各處死大鼠 9 只。乙醚麻醉，剖胸暴露心臟左心室，取血5 ml，置于預冷的EP管中靜置0.5 h，4℃條件3000 r/min 15 min離心取血清，冰箱-20℃保存。用眼科剪剪破右心耳，從左心室用生理鹽水將血液沖凈，剪開頸后部皮膚向上暴露至顱頂，2把眼科鑷由枕骨大孔處向兩側撥開顱骨，取出右腦放入EP離心管稱重，減除EP管重計算腦濕重，液氮保存;標本置勻漿器內加生理鹽水(按照W/V 為1∶2)，冰水中研磨勻漿約 10 min，移至 1.5 ml EP管中，4℃條件12000 r/min 15min離心取上清，-20℃保存。采用ELISA法檢測兩組血清和腦勻漿TNF-α、IL-10水平，用全自動酶標儀于450 nm波長下測定吸光度OD值。

1.3 統計學方法 采用SAS8.02統計軟件。計量數據以表示，組間比較采用t檢驗。檢驗水準α =0.05。

2 結果

各組不同時點TNF-α水平見表1;IL-10水平見表2。

3 討論

研究證實，神經系統和免疫系統間有復雜的雙向調節作用。前者產生神經遞質和神經肽等調節因子，對免疫系統發揮功能性調節作用，后者可分泌免疫調節因子如細胞因子等調節特定的神經系統的功能。腦缺血后產生炎癥反應［2］，細胞因子表達，腦組織和血清中不同的炎癥因子表達有各自的動態變化規律。

表1 各組腦勻漿、血清TNF-α水平比較(n=9，OD值，)

表1 各組腦勻漿、血清TNF-α水平比較(n=9，OD值，)

注:與對照組同時點比較，*P＜0.05;與生理鹽水組同時點比較，△P＜0.05

組別0 h 6 h 12 h 24 h 48 h TMP 組血清 8.90 ±0.45＊△ 10.38±0.54＊△ 12.81 ± 0.51＊△ 12.53±0.82＊△ 10.87±0.80＊△腦勻漿 165.34 ±4.59＊△ 218.29±5.50＊△ 238.14 ± 2.70＊△ 207.29±4.41＊△ 202.50±4.72＊△生理鹽水組血清 9.81 ±0.66* 12.49 ±0.82* 14.44 ± 0.88* 12.79 ±0.45* 11.56 ±0.48*腦勻漿 172.21 ±4.34* 253.04 ±3.84* 297.01 ±10.11* 267.01 ±2.78* 235.30 ±4.60*對照組血清 7.23 ±0.50 8.57 ±0.36 9.69 ± 0.60 8.05 ±0.28 9.40 ±0.41腦勻漿 146.02 ±3.50 160.45 ±2.74 172.53 ± 3.84 170.22±3.93 159.49 ±3.20

表2 各組腦勻漿、血清IL-10水平比較(n=9，OD值，)

表2 各組腦勻漿、血清IL-10水平比較(n=9，OD值，)

注:與對照組同時點比較，*P＜0.05;與生理鹽水組同時點比較，△P＜0.05

組別0 h 6 h 12 h 24 h 48 h TMP 組血清 11.24 ±1.21＊△ 13.14 ±0.92＊△ 15.13 ±0.87＊△ 18.54 ±0.82＊△ 17.21 ±0.96＊△腦勻漿 94.29±1.66＊△ 93.51±3.17＊△ 120.81±4.18＊△ 153.77±4.28＊△ 161.60±2.74＊△生理鹽水組血清 16.13 ±1.27* 16.94 ±1.21* 20.27 ±1.15* 22.55 ±1.19* 18.37 ±1.09*腦勻漿 105.73 ±6.79* 129.60 ±7.20* 131.20 ±5.13* 169.21 ±7.55* 176.75 ±5.16*對照組血清 10.31 ±0.46 12.87 ±0.99 13.01 ±0.70 13.29 ±0.72 12.48 ±1.02腦勻漿 88.60 ±2.15 87.70 ±1.33 106.30 ±3.53 135.10 ±6.16 142.35 ±3.64

促炎癥細胞因子是啟動、誘導或者抑制體內炎癥反應的一組細胞因子，包括 TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、IL-10等。TNF-α是一種作用廣泛的多功能細胞因子，主要由單核巨噬細胞合成、釋放。神經系統中主要由膠質細胞分泌，參與炎癥反應和免疫反應［3］。TNF-α可以損傷血管內皮細胞造成血管內皮細胞發生形態結構與功能損傷性改變，如壞死、脫落，細胞間隙增大等而使腦血流減少［4］。TNF-α可通過抗氧化途徑保護神經元，增強神經元在再灌注過程中抵抗氧自由基的損傷［5］。IL-10是一種具有抗炎和免疫調節作用的細胞因子，其可抑制許多促炎癥細胞因子的合成與分泌，如使IL-1β、IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α、粒-巨噬細胞集落刺激因子(GM、CSF)減少，減輕炎癥反應［6］。

TMP又稱四甲基吡嗪，其具有抗血小板聚集、擴張小動脈、改善微循環和腦血流的作用。可用于閉塞性血管疾病、腦血栓形成、脈管炎、冠心病、心絞痛等。以往研究表明，TMP可能抑制組胺、5-羥色胺的合成或釋放，體外試驗表明TMP能直接拮抗組胺、5-羥色胺所致的豚鼠離體回腸的收縮［7］。本研究TMP組、生理鹽水組各時點腦勻漿、血清中TNF-α、IL-10水平均高于對照組，TMP組各時點腦勻漿、血清中TNF-α、IL-10水平均低于生理鹽水組。提示TMP治療可減輕缺氧缺血腦損傷后大腦內的炎癥反應，具有腦保護作用。

總之，TMP具有腦保護作用，其可能機制為降低腦勻漿及血清中IL-10、TNF-α水平。

［1］Rice JE，Vannucci RC，Brierley JB，et al.The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat［J］.Ann Neurol，1981，9(2):131-141.

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［3］韋立功.新生兒缺氧缺血性腦病細胞因子研究進展［J］.醫學綜述，2003，9(1):61-63.

［4］劉敬，邱英芬，曹海英，等.新生兒缺氧缺血性腦病時血清IL-6、IL-8、TNF-α變化及其對血流動力學的影響［J］.中國新生兒科雜志，2002，20(1):21-23.

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［6］李明才，何韶衡.白細胞介素10超家族的研究進展［J］.現代免疫學，2004，24(1):83-86.

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