血清DLL1的檢測在結核性腦膜炎診斷中的價值

沈萍 魯晶晶 李盡義 彭濤 賈延劼

結核病是當今世界上引起死亡人數最多的傳染病之一。在我國近幾年來其發病率呈上升趨勢，結核性腦膜炎也隨之多見，但目前尚無特異敏感的診斷方法，誤診率較高。致病結核桿菌在宿主體內的生存能力與其氧化脂肪酸的能力有關。Delta-Like-1(DLL1)屬于Notch配體，而 Notch1信號在脂肪代謝中起到重要作用［1］。本研究通過對結核性腦膜炎，病毒性腦膜炎，顱內轉移瘤及健康對照組患者血清的DLL-1水平進行檢測，探討其臨床診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2008年5月至2010年11月入住新鄭市人民醫院和鄭州大學第一附屬醫院神經內科及兒科的中樞神經系統感染性疾病的患者45例，均嚴格按照相關標準確定診斷。分為結核性腦膜炎患者26例，作為結腦組，男10例，女16例;年齡6～51歲，平均(21.2±14.5)歲;病毒性腦膜炎患者19例，作為病腦組，男12例，女7例，年齡5～50歲，平均(15.9±14.0)歲;正常對照組選擇無中樞神經系統感染、腫瘤、免疫性疾病、血液系統疾病而需要鑒別診斷的周圍神經病變或頭痛等患者，共25例，男15例，女10例;年齡8～50歲，平均(17.5±18.3)歲。同時選擇顱內轉移瘤7例，作為腫瘤組，男4例，女3例，年齡42～70歲;平均(54.9±7.8)歲。

1.2 結腦的診斷標準 ①年齡＞12周歲的24例患者按照Ahuja等［2］的TMB診斷標準(Ahuja標準);②年齡≤12周歲的6例患者參照有Seth和Sharma［3］的標準(Seth標準)。

1.3 方法

1.3.1 標本采集 在獲得患者或其家屬知情同意的情況下，抽取外周靜脈血2 m1，采用不加抗凝劑的真空采血管收集，室溫30 min后，2000 r離心血清10 min，分離血清。所有標本登記后，均放入-20℃冰箱保存。

1.3.2 DLL1的測定 采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA法)，試劑盒由韓國AdipoGen公司提供，按照說明書操作。構建一個通過繪制已知濃度(濃度)(Y)與吸光度(吸光率)(X)的標準曲線。顯示一個可衡量的范圍通常顯示在(標準曲線)0.125ng/ml和8ng/ml之間。線性回歸成功，兩者相關系數為0.9996。通過回歸曲線插值公式，計算樣品的可溶性DLL1濃度，如下所示的一個二次方程公式:Y=-0.1045X2+7.514X-0.2449;r2=0.9984;DLL1濃度計算乘以稀釋倍數，以獲得該樣品稀釋前的濃度。

1.4 統計學方法 所有數據采用SPSS 17.0軟件進行統計分析。計量資料結果均以均數±標準差表示，數據以(±s)表示。多組間比較用方差分析(F檢驗)或Kruskal-Wallis檢驗，組間兩兩比較用LSD-t檢驗或Bonferroni法。P＜0.05表示差異具有統計學意義.

2 結果

血清中DLL1的含量測定結果 表1提示，結腦組、病腦組、對照組分別為［(17.25±6.91)，(1.32±3.57)，(0.99±1.84)ng/ml］，結腦組與病腦組、對照組相比差異均有統計學意義(F=50.31，P＜0.01)，病腦組與對照組相比差異無統計學意義(F=0.114，＞0.05)。

表1 各組血清中DLL1的含量的比較(x ± s，ng/ml)

3 討論

結核性腦膜炎的早期診斷、及時治療，直接關系到患者的預后，是降低病死率和并發癥的關鍵［2］。但是臨床上結核性腦膜炎腦脊液常呈不典型改變，易被誤診。本研究即為了尋找診斷結核性腦膜炎更有價值的實驗室指標。

結核桿菌全基因組有4411529bp，包括4000余個編碼蛋白質的基因，其中具有250多個編碼脂肪酸代謝的酶的基因，比大腸桿菌相關酶類多了4倍以上。結核桿菌細胞壁所含的脂類約占細胞壁干重的60%［4］，其含量與細菌毒力密切相關，含量越高毒力愈強。這些證據均說明了脂肪代謝對結核桿菌的重要性［5］。

DLL1是果蠅的Notch配體Delta人類同源體，是723個氨基酸組成的L型跨膜蛋白，與小鼠DLL1蛋白質相比有88%是相同的，有一個DSL區域跟隨8個串聯的EGF(表皮生長因子)樣重復序列和1個簡短的細胞質的C-端區域［6］。DLL1與Notch結合，促進脂肪細胞的分化進程［7］。Notch是一組跨膜受體，在多種器官及細胞的發育中起作用，主要決定細胞的分化方向。近年研究表明，Notch信號通路的抑制、基因突變或異常激活可能與許多疾病如阿爾茨海默病、帕金森病、腦卒中、腫瘤、腦再灌注損傷等尤其是腦腫瘤的發生有關［8］。Notch1及其配體DLL1在顱內感染性疾病中的報道很少。

結果表明，結核性腦膜炎組中血清DLL1含量也明顯高于其他中樞神經系統感染組別，26例結腦患者行DLL1測定，測定值中有22例(84%)＞6.0 ng/ml，而病腦及對照組各有1、0例＞6.0 ng/m，以大于該值為判斷值，也能與病腦及正常對照相鑒別。

結腦患者的血清DLL1含量升高的機制尚不完全清楚，可能如下:(1)結核病是一種慢性消耗性病變，引起脂肪等代謝紊亂;DLL1可能也參與了脂肪細胞的分化和自我更新;結腦患者代謝紊亂增強，DLL1脫落有助于Notch信號在鄰近細胞的下調并促進脂肪細胞的分化進程［7］。(2)當結核菌侵入中樞神經系統后引起結核性腦膜炎時，因局部的免疫反應，使T淋巴細胞數量明顯增多、增殖、分化;T淋巴細胞增多需要Notch信號途徑的激活。Kapoor等發現在結核性腦膜炎患者腦內結核性肉芽腫中Notch信號途徑的激活［9］。(3)DLL1通過支架蛋白MAGI1，位于神經細胞突起的粘附連接里，當結核性腦膜炎導致的神經細胞粘附連接損傷后，DLL1可能釋放出來，從而使得DLL1的含量增高［10］。

綜上所述，結核性腦膜炎患者的血清中DLL1的含量均有明顯增高，對血清中DLL1的含量進行檢測，不僅方法簡單，而且為結核性腦膜炎的診斷提供了新的思路。

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［10］Mizuhara E，Nakatani T，Minaki Y，et al.MAGI1 recruits Dll1 to cadherin-based adherens junctions and stabilizes it on the cell surface.J Biol Chem，2005，280:26499-26507.