凝血酶激活的纖溶抑制物基因3’端+1583 A/T多態性與動脈粥樣硬化性腦梗死的關系

曾志良， 陳煜森， 林智君， 冼文川， 鐘望濤， 趙 斌， 許志恩

動脈粥樣硬化性腦梗死是威脅人類健康與生命的重要原因之一，其發病機制復雜，是多因素、多基因相互作用的結果。凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)在凝血和纖溶的平衡中起重要的分子調節作用［1，2］，參與血栓形成的調節。有研究表明 TAFI血漿水平升高增加腦梗死的風險［3，4］，而且 TAFI血漿水平與TAFI基因啟動子區、編碼區及3’端非編碼區的多態性相關［5～7］。因此我們推測 TAFI基因3’端非編碼區的多態性與腦梗死發病相關，為證實這種推測我們分析了中國漢族人群TAFI基因3’端+1583A/T多態性與動脈粥樣硬化性腦梗死發病的關系。

1 資料與方法

1.1 研究對象

病例組:225例，男145例，女80例，年齡38～80歲，平均67.60±10.61歲，均為我院于2006年8月～2007年11月在神經內科住院的動脈粥樣硬化性腦梗死患者，病程在1w內，均為漢族人，所有病例均經過臨床及CT和(或)MRI確診(依照第四屆全國腦血管病學術會議診斷標準)。排除心臟源性栓塞、動脈炎、血液病等其他原因引起的腦梗死。

對照組:184例，男107例，女77例，年齡37～78歲，平均66.11±11.02歲，為我院健康體檢者，均為漢族人，無腦卒中史，并經過臨床檢查和/或影像學檢查排除腦卒中，排除感染、發熱及炎癥性疾病、肝腎功能不全、血液病、自身免疫性疾病等。詳細記錄入選者的腦血管病危險因素，包括高血壓、糖尿病、吸煙、血脂等。所有標本的收集均經其本人或家屬同意。

1.2 方法

1.2.1 基因組全血DNA提取 用QIAGEN酶法提取全血DNA。

1.2.2 檢測TAFI+1583 A/T多態性 應用聚合酶鏈反應-限制性內切酶片段長度多態性分析方法(PCR-RFLP)，引物設計參考 Henry［5］。

1.3 統計學方法

采用SPSS11.5統計分析軟件和遺傳學數理統計方法進行統計分析，采用基因計數計算各組基因型頻率和等位基因頻率，Hardy-Weinburg平衡吻合度和基因頻率和基因型統計分析采用χ2檢驗。統計學顯著性定為0.05。

2 結果

2.1 TAFI+1583 A/T位點的電泳圖

TAFI+1583 A/T的BclI酶結果:BclI酶為雙位點內切酶，AA基因型因:350bp和262bp 2個片段;TT基因型:336bp、262bp和14bp 3個片段;AG基因型:350bp、336bp、262bp和14bp 4個片段 (14bp片段由于過小未能顯示)，見圖1。

2.2 Hardy-Weinburg平衡檢驗

病例組與對照組TAFI+1583 A/T基因型分布(見表1)符合Hardy-Weinburg平衡，表明具有群體代表性。

2.3 TAFI+1583 A/T位點的基因型及等位

基因頻率分析

TAFI+1583 A/T在病例組的A等位基因頻率為24.7%，對照組為25.0%，兩組比較經χ2檢驗差異無顯著性(P=0.913)。病例組AA基因型為6.7%，對照組為3.8%，兩組比較經χ2檢驗差異無顯著性(P=0.202)(見表2)。經性別分層分析其基因型及等位基因頻率在病例組和對照組之間的差別亦無顯著性。

圖1 TAFI+1583 A/T位點擴增片段BclI酶切產物電泳圖

表1 兩組人群兩位點基因型分布的Hardy-Weinburg平衡吻合度檢驗

表2 TAFI+1583 A/T多態性基因型及等位基因頻率與腦梗死的相關性分析

3 討論

動脈粥樣硬化性腦梗死的發病、病程的進展與動脈血栓形成的關系非常密切，在血栓形成過程中血液凝固和纖維蛋白溶解的平衡發揮重要作用。TAFI是由肝臟分泌的一種酶原，在血液凝固和纖維蛋白溶解的平衡中發揮紐帶的作用。研究表明血漿高TAFI水平能顯著增加急性腦梗死發生的危險性，并提示TAFI可以作為急性腦梗死發生的危險性預測因子［3，4］。健康人血漿TAFI抗原水平的個體差異比較大，很難僅以環境因素來解釋，可能主要是受遺傳控制的［5～9］。Henry等分析了 TAFI基因啟動子區、編碼區、3’端非編碼區共13個單核酸多態性(SNP)位點與血漿TAFI抗原水平的相關性，結果全部SNP與血漿TAFI抗原水平的強相關，其中3’端非編碼區+1583A/T位點可以解釋TAFI 30%的遺傳可能性［5］。本研究組曾研究TAFI基因編碼區291C/T的多態性與腦梗死的相關性，結果提示TAFI基因編碼區291C/T的多態性位點的T等位基因可能增加腦梗死的患病風險［10］。Ladenvall等分析了TAFI抗原血漿水平、TAFI基因11個不同位點的SNP與不同亞型缺血性腦卒的相關性，結果TAFI抗原血漿水平與所有缺血性腦卒類型相關，在單位點分析中沒有發現SNP與缺血性腦卒中有關聯，但單倍體型分析中顯示單倍體型H2B與隱源性缺血性腦血管病相關，H2B攜帶者患病風險增加(P=0.03);H1B可降低小血管病變患病風險，而H2D和H2E可增加小血管病變的風險［11］。有研究表明TAFI基因3’端非編碼區較長，該區域的 SNP對TAFI的轉錄與穩定性可能有重要影響［12，13］。因此有理由相信TAFI基因3’端非編碼區的SNP可能與動脈粥樣硬化性腦梗死的發病有關。本研究旨在探討TAFI基因3’端+1583A/T多態性在動脈粥樣硬化性腦梗死的關系。

本研究顯示，TAFI+1583A/T各基因型及等位基因頻率在病例組與對照組均無統計學意義，提示TAFI+1583A/T多態性與腦梗死的發生無關。由于本研究樣本不屬于大樣本量的多中心研究，其結論有一定的局限性。到目前為此，有不少研究表明TAFI基因3’端非編碼區的SNP參與TAFI表達的調節，可能通過影響mRNA的加工和穩定性來改變mRNA的生成［14］，攜帶+1583T等位基因的單倍體型能使轉錄物穩定性降低［15，16］。鑒于 TAFI+1583A/T在TAFI基因3’端所起的重要作用，有必要進一步研究TAFI+1583A/T多態性與腦梗死的關系。

本研究是國內外首次對中國人群中TAFI基因基因3’端+1583A/T多態性與腦梗死關系進行研究，需要多中心研究大樣本量的研究進一步證實，如同時將測定活化的TAFI抗原水平、多個多態性位點與動脈粥樣硬化性腦梗死結合起來一同研究分析，更能反映相互關系。

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