博心通軟膠囊質量標準研究

張耕，程璐，徐宏峰

(武漢市第一醫院制劑中心，430022)

博心通軟膠囊是本院自制制劑(批準文號:鄂藥制字Z20093124，每粒0.4 g)，是以蔥白為原料，經二氧化碳超臨界萃取，并加入適當輔料而制成的軟膠囊。臨床上主要用于治療脂肪肝和高脂血癥等。為控制該制劑的質量，筆者在本實驗中采用化學反應及薄層色譜法對其中甾體皂苷化合物和β-谷甾醇進行定性鑒別，并采用高效液相色譜法對β-谷甾醇進行含量測定，為博心通軟膠囊的質量標準提供定性和定量檢測方法[1-7]。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(島津LC-10A，檢測器SPD-10A，浙大N2000色譜工作站)，電子天平(賽多利斯ME215S，d=0.01 mg)，β-谷甾醇對照品(中國藥品生物制品檢定所，鑒定用，批號:110851-200504)，β-谷甾醇對照品(西格瑪公司，含量測定用，批號:058K3787)，博心通軟膠囊(自制，批號:080319，080403，080510)，甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 鑒別

2.1 甾體皂苷化合物的鑒別取本品1粒，取其中內容物，溶于冰醋酸2 mL，加濃硫酸-醋酐(1∶20)1 mL，搖勻，最后反應顏色為污綠色。結果表明內容物中含有甾體化合物，空白輔料對鑒別均無干擾。

2.2 β-谷甾醇的鑒別取本品1粒的內容物，加甲醇2 mL溶解，濾過，作為供試品溶液。取未加蔥白提取物的空白輔料，同法制成陰性對照溶液。另取β-谷甾醇對照品適量，加甲醇制成每毫升含0.1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄ⅥB)實驗，吸取上述溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%磷鉬酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾，展開距離為9.5 cm，結果見圖1。

3 含量測定

3.1 色譜條件色譜柱:Dikma Technologies DiamonsilTMC18(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動相:甲醇-水(98∶2);檢測波長為210 nm，柱溫30℃，進樣量20 μL。β-谷甾醇和其他組分分離度R＞1.5，理論板數按β-谷甾醇峰計算應不低于2 000。

圖1 3種溶液的薄層色譜圖

3.2 對照品溶液的制備精密稱取在60℃減壓干燥4 h的β-谷甾醇對照品適量，加甲醇制成每毫升含20 μg的溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備取本品裝量差異項下的內容物0.6 g，精密稱定，置于25 mL量瓶，加甲醇適量，超聲處理10 min使其溶解，并用甲醇稀釋至刻度，經孔徑0.45 μm濾膜過濾，取續濾液即得。

3.4 專屬性實驗按本品處方制備不含蔥白提取物的陰性對照，同“3.3”項下制備方法制得陰性對照溶液。按擬定的色譜條件進行實驗，結果供試品溶液主峰保留時間與對照品溶液主峰保留時間一致，陰性對照在β-谷甾醇對照品色譜峰相應的保留時間處沒有出峰，表明處方中的其他成分對β-谷甾醇測定無干擾，結果見圖2。

3.5 線性關系考察精密稱取β-谷甾醇對照品5.28 mg，置20 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，得對照品儲備液;分別精密量取該儲備液0.5，1，2，3，4，5 mL置20 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻;分別吸取20 μL注入液相色譜儀，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，得回歸方程:Y=1.968 6X+0.001 6，r=0.999 7)。可見β-谷甾醇在6.6～66.0 μg·mL-1范圍內，峰面積與濃度的線性關系良好。

3.6 精密度實驗取β-谷甾醇對照品溶液，按擬定色譜條件注入高效液相色譜儀，連續進樣6次，記錄β-谷甾醇峰面積，RSD為1.58%，結果顯示精密度良好。

3.7 穩定性實驗取供試品溶液，在擬定的色譜條件下，分別于0，3，6，9，15，24 h進樣，記錄β-谷甾醇峰面積，RSD為0.84%，結果表明供試品溶液在24 h內穩定。

3.8 重復性實驗取博心通軟膠囊(批號:080319)，按照“3.3”項下供試品溶液制備方法平行制備6份，照“3.1”項下色譜條件測定β-谷甾醇的含量。平均含量為0.56 mg·g-1，RSD為1.15%，結果表明本方法重復性良好。

3.9 回收率實驗精密稱取β-谷甾醇對照品5.92 mg，置50 mL量瓶，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得對照品儲備液。精密稱取已知含量的博心通軟膠囊(批號:080319，0.56 mg·g-1)9份，分別精密加入β-谷甾醇對照品儲備液1.0，2.0，3.0 mL，按“3.3”項下供試品溶液制備方法處理并按擬定的色譜條件測定并計算回收率，結果平均回收率為98.1%，RSD為1.53%，結果見表1。

表1 β-谷甾醇加樣回收率實驗結果

3.10 供試品含量測定取博心通軟膠囊，按“3.2”及“3.3”項下方法分別制備對照品溶液和供試品溶液，按“3.1”項下色譜條件進行測定，按外標法以峰面積計算含量，結果見表2。

表2 β-谷甾醇含量測定結果

4 討論

蔥屬植物中大部分研究僅局限于薤白及大蒜等少數幾個品種，有關蔥的研究報道在國內外幾乎為空白，蔥白多用于復方制劑或民間偏方，將其作為主藥制成制劑應用于臨床，目前筆者尚未見報道。筆者在本實驗中對博心通軟膠囊的質量標準進行了研究，曾經采用香草醛-高氯酸比色法測定制劑中甾體化合物的含量，但最終選擇專屬性較高的高效液相色譜法測定β-谷甾醇的含量。

4.1 檢測波長的選擇取β-谷甾醇對照品適量，用甲醇稀釋至一定濃度，在190～400 nm波長進行紫外掃描，結果β-谷甾醇在約203 nm有最大吸收，但是空白輔料與溶劑在203 nm處均有一定程度的吸收，為了排除干擾，選擇210 nm作為檢測波長。

4.2 檢測線與定量限按信噪比為3∶1，測得β-谷甾醇的最低檢測濃度為2.15 μg·mL-1，最低檢測量為0.04 μg;按信噪比為10∶1，測得β-谷甾醇的最低定量濃度為8.6 μg·mL-1，最低定量限為0.17 μg。

4.3 流動相的選擇筆者曾經采用甲醇-0.1%磷酸(98∶2)[8]流動相體系，結果峰形和分離度不理想，后改用甲醇-水的流動相體系，經調節比例甲醇-水(98∶2)后得到了較好的理論板數和分離度。

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