山藥參芪丸毒性與治療大鼠2型糖尿病效果評價

徐彥博，高永喜，姚萍，劉朝華，王鵬，李萌，馬寬

(解放軍武漢療養(yǎng)院，430074)

糖尿病是以持續(xù)高血糖為基本生化特征的一種慢性全身代謝性疾病，是嚴重危害中老年人健康的常見病、多發(fā)病。近年來，隨著不良生活方式的影響，逐漸呈低齡化趨勢。我院研制的山藥參芪丸[專利號:ZL001032429，軍隊制劑批準文號:廣制字(2007)F13002號，批準適應證:調(diào)理臟腑，益氣養(yǎng)陰，固本降糖，用于治療糖尿病及其并發(fā)癥]在前期臨床應用中具有良好的降糖作用[1-2]。為了進一步探討其具體機制及不良反應，指導臨床應用，筆者對山藥參芪丸進行了動物急性和長期毒性實驗，以及對2型糖尿病大鼠模型血糖和血脂的影響等主要藥效學實驗，現(xiàn)報道如下。

1 材料

1.1 試藥山藥參芪丸(本院東湖療養(yǎng)區(qū)制劑室研制，批號:20090419)，實驗時以去離子水將受試藥物配成所需濃度的藥液供灌胃給藥，使各劑量組給藥體積相等;鹽酸二甲雙胍片(北京天安聯(lián)合制藥有限公司，批號:20090411)，鏈脲佐菌素(Sigma公司產(chǎn)品，批號:05122008)，5%戊巴比妥鈉(本院藥械科提供)，高脂飼料(江西省食品藥品檢驗所動物房加工，其中含基礎(chǔ)飼料60%，蔗糖20%，蛋黃粉5%，豬油10%，全脂奶粉5%)。

1.2 動物Wistar大鼠，普通級，雌雄兼用，體質(zhì)量110～160 g，合格證號:鄂醫(yī)動字第71001號。NIH小鼠，普通級，體質(zhì)量20～23 g，江西省食品藥品檢驗所提供，合格證號:贛醫(yī)動字第71002號;動物雌雄分籠群養(yǎng)，每籠5只，普通固體飼料喂養(yǎng)。保持室溫20～22℃(空調(diào))，相對濕度60%～85%。

1.3 儀器BC-2000血細胞分析儀(美國邁瑞公司)，7170型生化自動測定儀(日本日立公司)，MP120-2型電子天平(上海第二天平儀器廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 急性毒性實驗

2.1.1 方法取小鼠20只，雌雄各半，禁食不禁水12 h，灌胃給予山藥參芪丸原藥材生藥粉藥液，30 mL·kg-1，隔5 h同量給藥一次。總給藥量以原藥材計19.8 g·kg-1。觀察給藥至第7天各小鼠的外觀、行為、呼吸、四肢活動、進食、排泄、死亡等情況。7 d后處死小鼠，肉眼觀察臟器變化。

2.1.2 結(jié)果給藥后7 d內(nèi)，小鼠外觀、行為、呼吸、四肢活動、進食、排泄均未見明顯異常。給藥后第5天有1只(雄4號)小鼠死亡，死前未見異常反應，解剖后未見內(nèi)臟器官明顯異常，推測為意外死亡，非藥物所致。

2.2 長期毒性實驗

2.2.1 方法取大鼠80只，雌雄各半，按性別、體質(zhì)量隨機均分4組，山藥參芪丸高、中、低劑量組每日灌胃給藥1次，給藥劑量分別為5.77，2.88，1.44 g·kg-1，連續(xù)12周。對照組灌胃給予等體積0.9%氯化鈉溶液(20 mL·kg-1)。給藥期間每天觀察大鼠的外觀、行為、四肢活動、進食、排泄物、死亡等情況;每周記錄體質(zhì)量一次。末次給藥后次日(停飼15 h，供水)，各組取大鼠12只，雌雄各半，經(jīng)戊巴比妥鈉40 mg·kg-1腹腔注射麻醉，經(jīng)腹主動脈采血作血液學、血液生化學檢查;剖取部分主要臟器，稱質(zhì)量，按每100 g體質(zhì)量所含臟器質(zhì)量換算臟器質(zhì)量指數(shù);剖取主要臟器，行肉眼及組織學檢查。將各劑量組檢測結(jié)果與對照組比較，作組間t檢驗。各組余下大鼠停藥觀察2周后同法處理。

2.2.2 結(jié)果血液學檢查:給藥12周后，低劑量組紅細胞(red blood cell，RBC)略低于對照組(P＜0.05)，高劑量組白細胞(white blood cell，WBC)以及淋巴細胞(lymphocytes，LYMPH)、單核細胞(mononu clear cells，Mid)均高于對照組(P＜0.01);停藥2周后，低劑量組全血凝固時間(coagulation time，CT)略小于對照組(P＜0.05)，以上指標變化均在正常范圍，故認為是正常波動，不具有毒理學意義。各給藥組其余指標在給藥12周后及停藥2周后均在正常范圍，與對照組差異無統(tǒng)計學意義，見表1。

血液生化學檢查:各給藥組與對照組比較，部分指標有變化，但均在正常范圍內(nèi)，差異無統(tǒng)計學意義，認為是正常范圍內(nèi)波動，不具有毒理學意義。見表2。

臟器質(zhì)量指數(shù)測定結(jié)果:給藥12周及停藥2周后，各劑量組臟器質(zhì)量指數(shù)變化均在正常值范圍，故認為是正常波動(肝、腎指數(shù)增大可能與給藥組體質(zhì)量增長略慢有關(guān))，不具有毒理學意義。見表3。

給藥12周及停藥2周后，剖取各組大鼠主要臟器，做病理切片觀察，4組大鼠主要臟器均未見明顯形態(tài)學改變。見表4。

2.3 對糖尿病模型大鼠的降糖及降脂作用健康Wistar大鼠，雌雄均可，體質(zhì)量160～200 g，共80只，造模前先用血糖儀測定全血血糖，剔除血糖異常者。按電腦隨機號碼法分組，分為空白對照組10只和造模組70只?？瞻讓φ战M自由飲水、攝食，不作任何處理。造模組高脂喂養(yǎng)2個月，以鏈脲佐菌素30 mg·kg-1腹腔注射誘發(fā)糖尿病，鏈脲佐菌素注射前禁食16 h，注射后48 h尾靜脈采血測空腹血糖，同時測尿糖，血糖＞16.7 mmol·L-1為造模成功。將造模成功的50只大鼠隨機分為山藥參芪丸高劑量組(2.28 g·kg-1·d-1)、中劑量組(1.13g·kg-1·d-1)、低劑量組(0.58 g·kg-1·d-1)，二甲雙胍組(0.112 5 g·kg-1·d-1)和模型對照組，每組10只。造模成功后每天8∶00～10∶00灌胃。給藥24 d后麻醉，斷尾取血。葡萄糖氧化酶法測定血糖，甘油磷酸氧化酶-過氧化物酶法測定血清總膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇，結(jié)果見表5。用藥后，山藥參芪丸各劑量組血糖均顯著下降(P＜0.01或P＜0.05);山藥參芪丸高、中劑量組和二甲雙胍組總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白膽固醇含量均降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。各給藥組與模型對照組比較，高密度脂蛋白膽固醇含量有升高趨勢，但結(jié)果差異無統(tǒng)計學意義。

表1 山藥參芪丸長期毒性實驗血液學檢查結(jié)果Tab.1Hemotological analysis in long-term toxicology experiment of Yam shenqi pill ±s

表1 山藥參芪丸長期毒性實驗血液學檢查結(jié)果Tab.1Hemotological analysis in long-term toxicology experiment of Yam shenqi pill ±s

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續(xù)表1 山藥參芪丸長期毒性實驗血液學檢查結(jié)果Tab.1Hemotological analysis in long-term toxicology experiment of Yam shenqi pill ±s

續(xù)表1 山藥參芪丸長期毒性實驗血液學檢查結(jié)果Tab.1Hemotological analysis in long-term toxicology experiment of Yam shenqi pill ±s

與對照組比較，*1P＜0.01，*2P＜0.05Compared with control group，*1P＜0.01，*2P＜0.05

CT/組別與時間Mid/(×109·L－1)Gran/(×109·L－1)血小板/(×109·L－1)min山藥參芪丸高劑量組實驗結(jié)束1.11±0.45*11.31±0.56630.5±74.75.72±0.40實驗結(jié)束后2周0.96±0.271.36±0.43776.3±96.94.62±0.99中劑量組實驗結(jié)束0.59±0.301.07±0.20624.2±82.95.59±0.45實驗結(jié)束后2周0.86±0.620.78±0.70722.3±106.24.78±0.58低劑量組實驗結(jié)束0.50±0.271.20±0.53574.5±62.95.85±0.57實驗結(jié)束后2周0.74±0.181.03±0.53804.8±113.74.30±0.51*2對照組實驗結(jié)束0.57±0.531.29±0.74656.8±124.95.50±0.79實驗結(jié)束后2周0.78±0.421.09±0.71721.1±86.15.30±0.38

表2 山藥參芪丸長期毒性實驗血液生化學檢查結(jié)果Tab.2Hemotological biochemical analysis in long-term toxicology experiment of Yam shenqi pill ±s

表2 山藥參芪丸長期毒性實驗血液生化學檢查結(jié)果Tab.2Hemotological biochemical analysis in long-term toxicology experiment of Yam shenqi pill ±s

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表3 山藥參芪丸長期毒性實驗各重要臟器質(zhì)量指數(shù)測定結(jié)果Tab.3The organ indexs results in long-term toxicology experiment of Yam shenqi pill ±s

表3 山藥參芪丸長期毒性實驗各重要臟器質(zhì)量指數(shù)測定結(jié)果Tab.3The organ indexs results in long-term toxicology experiment of Yam shenqi pill ±s

間動物數(shù)心肺肝脾腎子宮睪丸組別與時山藥參芪丸高劑量組實驗結(jié)束120.30±0.020.60±0.203.03±0.210.25±0.040.66±0.030.16±0.040.89±0.07實驗結(jié)束后2周80.31±0.040.62±0.122.96±0.300.25±0.040.66±0.080.16±0.020.76±0.07中劑量組實驗結(jié)束120.28±0.020.50±0.092.89±0.290.28±0.130.63±0.050.15±0.030.87±0.09實驗結(jié)束后2周80.31±0.030.53±0.072.89±0.230.27±0.100.66±0.060.19±0.050.83±0.09低劑量組實驗結(jié)束120.30±0.020.49±0.093.01±0.300.23±0.030.64±0.060.17±0.020.81±0.06實驗結(jié)束后2周80.31±0.020.56±0.132.94±0.260.24±0.060.66±0.090.18±0.030.83±0.10對照組實驗結(jié)束120.30±0.020.52±0.082.70±0.270.26±0.070.57±0.050.15±0.040.84±0.06實驗結(jié)束后2周80.30±0.050.50±0.092.70±0.430.25±0.050.60±0.090.17±0.080.77±0.08

表4 山藥參芪丸大鼠長期毒性實驗器官組織學檢查結(jié)果Tab.4Organ histology of rats in long-term toxicology experiment of Yam shenqi pill

表5 山藥參芪丸對2型糖尿病大鼠血糖、血脂和膽固醇的影響Tab.5Effects of Yam shenqi pill on blood sugar，blood fat and choleterol of rats with tgpe 2 dibetesmmol·L－1，±s

表5 山藥參芪丸對2型糖尿病大鼠血糖、血脂和膽固醇的影響Tab.5Effects of Yam shenqi pill on blood sugar，blood fat and choleterol of rats with tgpe 2 dibetesmmol·L－1，±s

與模型對照組比較，*1P＜0.01，*2P＜0.05Compared with model control group，*1P＜0.01，*2P＜0.05

組別大鼠/只血糖三酰甘油總膽固醇高密度脂蛋白膽固醇低密度脂蛋白膽固醇山藥參芪丸高劑量組1016.73±2.11*11.51±0.44*22.67±0.34*20.68±0.371.48±0.59*2中劑量組1017.91±3.31*11.97±0.39*23.01±0.59*20.61±0.341.49±0.23*2低劑量組1019.38±2.69*22.02±0.663.41±0.370.59±0.081.51±0.52二甲雙胍組1016.55±3.22*11.25±0.48*22.93±0.38*20.67±0.311.42±0.77模型對照組1024.22±1.932.37±0.503.47±0.450.56±0.151.57±0.81空白對照組105.62±0.380.69±0.132.75±0.28*20.59±0.081.39±0.06

3 討論

山藥參芪丸是在民間驗方的基礎(chǔ)上，結(jié)合傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論，以山藥、西洋參、黃芪、天花粉、山茱萸、荔枝核、丹參、玄參、薄荷腦等中藥材組成的中藥復方制劑。具有調(diào)理臟腑、益氣養(yǎng)陰、固本降糖等功能，用于治療糖尿病及其并發(fā)癥。方中西洋參性涼，味甘微苦，入心、肺、腎經(jīng)，具補肺降火、養(yǎng)胃生津止渴之功，其藥性緩和，尤適宜于氣陰兩虛有火者，其所含總皂苷還具有影響蛋白質(zhì)、脂肪代謝，降低血糖的作用[3]。黃芪具有補氣升陽、扶正固本等多種功效，被稱為補氣諸藥之最。中醫(yī)認為，氣能生津，津能載氣，氣旺則化生的津液就充盈，因此黃芪在氣陰兩虛證中得到廣泛應用。此外，黃芪多糖具有雙向調(diào)節(jié)血糖作用，能顯著降低2型糖尿病患者血糖，并能改善患者精神疲乏、心悸、失眠等癥狀[4]。山茱萸、山藥具有補脾養(yǎng)胃、生津益肺、補腎澀精之功效，本品還含有多種微量元素，可直接參與糖尿病的治療，降低糖尿病患者血清中較高的銅/鋅(0.82～1.2)[5]。天花粉生津止渴。丹參、紅花、荔枝核活血通經(jīng)，行氣散結(jié)。玄參、薄荷腦清涼瀉火。諸藥合用，更增調(diào)理臟腑、益氣養(yǎng)陰、生津止渴之功。此外，方中諸藥還具有免疫調(diào)節(jié)作用，能增強機體免疫力，促進糖尿病患者的恢復。

筆者以前的臨床研究顯示，山藥參芪丸對糖尿病患者具有改善臨床癥狀、降低空腹血糖、餐后2 h血糖、血脂、血壓的明顯效果[1]。動物實驗結(jié)果提示，急性和長期毒性實驗未發(fā)現(xiàn)毒性反應，能明顯降低高脂飲食喂養(yǎng)聯(lián)合鏈脲佐菌素腹腔注射所致2型糖尿病大鼠的血糖、血脂和膽固醇含量。

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