產程發動前后環氧化酶-2(COX-2）核因子KappaB P65(NF-KBP65）在平滑絨毛膜上的表達

張丹妮,曲冬穎,李海梅

(1.解放軍第二O八醫院,吉林長春 130062;2.解放軍第二○二醫院）

眾所周知,分娩發動的必備條件是胎兒的成熟和母體的準備。母體準備包括,子宮由分娩前期(0期）穩態,進入敏感期即分娩準備期(1期）,此期子宮生物學上的主要變化為縮宮素受體大量增加、子宮下段及宮頸成熟、蛻膜與胎膜自分泌旁分泌效應的啟動。有關分娩動因已有許多學說,但仍不清楚觸發分娩啟動的始動因素,無論神經內分泌因素抑或胎盤及胎兒神經內分泌因素均缺乏母胎之間啟動信號的確認。

1 資料與方法

1.1 研究對象選擇2009年06月至11月在我院因骨盆狹窄,瘢痕子宮,臀位,高齡初產,社會因素,產程進展延遲或停滯等指征行剖宮產分娩的產婦80例,均為足月孕婦(孕周為37-41周）。其中產程未發動組40例,產程發動組40例(選取宮口擴大至4 cm-9 cm產婦）均無內科合并癥及產科并發癥,無感染征象。兩組平均年齡、孕周比較差異無統計學意義,且均為初產婦。

1.2 方法兩組均于剖宮產后在遠離胎盤部位剝取平滑絨毛膜。福爾馬林固定后制作厚度4 μ m石蠟切片;按照SABC試劑盒的操作步驟進行免疫組織化學染色。試劑購自武漢博士德公司。

1.3 結果判斷每組均用PBS代替一抗作陰性對照,陽性對照為已知的陽性片。以細胞胞質或胞核中出現棕黃色顆粒為陽性判斷標準。每例標本選取一張切片,每張切片高倍鏡下(×400）選取5個視野。按無陽性細胞或陽性細胞數＜5%為陰性(-）;陽性細胞數5%-25%為弱陽性(+）;陽性細胞數25%-50%為陽性(++）;陽性細胞數＞50%為強陽性(+++）四級。免疫組化結果觀察由兩名病理科醫生分別計數采用盲法。

1.4 統計學分析用SPSS13.0軟件行進行卡方檢驗,P＜0.05為差異有顯著性。

2 結果

COX-2在產程發動前后胞漿中比較差異有顯著性(P＜0.05）,COX-2在產程發動前后胞核中比較差異有顯著性(P＜0.05）,NF-KBP65在產程發動前后胞漿中比較差異有顯著性(P＜0.05）,NF-KBP65在產程發動前后胞核中比較差異有顯著性(P＜0.05）。

表1 平滑絨毛膜組織中胞漿、胞核COX-2表達比較

表2 平滑絨毛膜組織中胞漿、胞核NF-KB P65表達比較

3 討論

在本試驗中選取無臨床可見感染征象的產婦,標本取材來自剖宮產術中,盡可能排除潛在感染因素的影響。雖然在產程未發動組與產程發動組我們均觀察到平滑絨毛膜組織中有COX-2及NF-KBP65蛋白表達,但在產程發動組明顯呈增強表達趨勢。

NF-KB家族包括5個成員:Rel-A(p65）、RelB、CRel、pl05/p50和 p100/p52,是具有轉錄激活功能的一種蛋白質。NF-KB它們通常以各種純合二聚體和雜合二聚體形式存在,最常見的誘生型NF-KB主要是P50/P65異二聚體,從而調節不同靶基因的轉錄[1]。于多種類型的細胞中都可以檢測到它們的表達,但在炎癥部位表達明顯增強,提示在免疫應答反應和炎癥反應中NF-KB可能發揮關鍵作用。

前列腺素合成過程中的一個重要限速酶是環氧化酶(COX）,包括COX-1和COX-2兩種亞型,COX-1在細胞中廣泛表達,主要參與維持細胞正常的生理功能;而COX-2在正常細胞中表達很少,參與炎癥過程及腫瘤的發生、發展等多種病理生理過程,僅在細胞受到刺激時迅速從頭合成[2]。COX-2基因啟動子中包含2個NF-KB位點,兩個NF-KB位點中的一個或兩個突變都會顯著地降低COX-2的基因轉錄[3]。Callejas等通過對鼠胎盤滋養細胞一氧化氮合成酶2(NOS2）和環氧合酶2(COX2）分泌的研究,結果顯示NF-KB的激活使NOS-2和COX2在滋養細胞中的持續表達,蛋白酶抑制劑和抗氧化劑阻斷NF-KB激活而使NOS和COX不能表達[4]。在分娩過程中,前列腺素(PGs）主要在胎膜、蛻膜內合成,以旁分泌形式發揮作用,前列腺素制劑已廣泛應用于臨床。不但可以促進子宮平滑肌收縮,而且可以促進宮頸成熟[5]。NF-KB通過與COX-2基因啟動子相應位點結合后使COX-2的轉錄表達增加,進而增加前列腺素合成。作為一種重要的核轉錄因子NFKB調控炎癥細胞因子、COX-2及縮宮素受體等表達,反過來炎癥細胞因子可以激活NF-KB,使其作用級聯放大。因此我們推論NF-KB、COX-2可能參與了分娩的始動環節。

[1]Ghosh S,May MJ,Kopp EB.NF-kappa Band Rel proteins:Evolutionarily conserved mediators of immune responses[J].Annu Rev Immunol,1998,16:225.

[2]Martha L,Michael P,Harry MG,et al.Nuclear FactorKappa B Regulation of Proinflammatory Cytokines in Human Gestational Tissues In Vitro Biology of Reproduction[J].2002,67:668.

[3]Allport VC,Pieber D,Slater DM,et al.Human labour is associated with nuclear factor-kappaBactivity whichmediates cyclooxygenase-2expression and is involvedwith the'functional progesterone withdrawal'[J].Molecular Human Reproduction,2001,7:581.

[4]TerzidouV,Lee YS,Thornton S,et al.Identification of the response region on the oxytocin receptor(OTR）promoter which is important for the synergistic transactivation of OTR by C/EBPbeta and NF-kappaB transcription factors[J].Journal of the Society for Gynecologic Investigation,2003,10:190A.

[5]Olson DM.The role of prostaglandins in the initiation of parturition[J].Best Practice and Research:Clinical Obstetrics and Gynaecology,2003,17:717.

[6]Stjernholm VY,Stygar D,Mansson C,et al.Factors involved in the inflammatory events of cervical ripening in humans[J].Rep rod Biol Endocrino,2004,l2(1）:74.