249例兒童腦脊液胱抑素-C結果分析

王均樂

(南京醫科大學附屬南京兒童醫院,南京 210008）

胱抑素C(Cystatin C,簡稱CysC）亦稱半胱氨酸蛋白酶抑制劑C,是一種由120個氨基酸組成,分子量為13kDa的低分子量、堿性非糖化蛋白質。CysC基因在包括腎、肝、胰、腸、胃、肺及胎盤等所有組織中持續地轉錄和表達。研究發現CysC是半胱氨酸蛋白酶抑制物家族的成員之一[1],是目前發現的對組織蛋白酶B抑制作用最強的抑制物。同時CysC對木瓜蛋白酶、無花果蛋白酶、組織蛋白酶H及L也有抑制。近來臨床應用中血清CysC被作為反映腎小球濾過率的靈敏指標而受到重視,對血中胱抑素C的報道也很多,而對兒童腦脊液胱抑素-C水平了解較少。為此,本文調查了249例兒童腦脊液胱抑素-C水平,旨利用腦脊液胱抑素-C為臨床疾病提供診斷和治療依據。

1 資料和方法

1.1 臨床資料249例兒童腦脊液來源于我院住院兒童,均為無神經系統疾病及相關癥狀和病史的外科病區的患兒,無炎癥感染,無腦膜病變,頭顱CT/MRI和腦電圖檢查均正常。年齡2天到15歲,其中男性128例(＜1個月20例,1月-≤1歲32例,1歲-≤3歲28例,3歲-≤7歲26例,7歲-15歲22例）,女性121例(≤1個月 21例,1月-≤1歲30例,1歲-≤3歲31例,3歲-≤7歲19例,7歲-15歲20例）。腦脊液常規:外觀均為無色透明、蛋白定性陰性、細胞計數正常。生化檢查:腦脊液糖、蛋白含量、氯化物、乳酸脫氫酶和腺苷脫氨酶均正常。微生物檢查:細菌培養均為無菌生長。

1.2 儀器和試劑日立7600-20全自動生化分析儀。北京利德曼生物技術有限公司提供的CysC試劑盒、質控品和校準品。

1.3 方法用無菌方法抽取腦脊液,采用液相免疫膠體金法,3 h內完成測定。同時測定該患兒血清中胱抑素C。該試劑盒的試劑2選擇納米級膠體金作為胱抑素C抗體的標記物,在反應過程中標記胱抑素C抗體和血清中的抗原結合而發生凝聚,反應液在特定波長下吸光度發生改變以達到檢測目的。經過標記的抗體提高了試劑檢測靈敏度,最低檢測限達到毫克級,完全滿足了臨床檢測靈敏度的要求。經過全面的性能測試,試劑具有檢測范圍寬,重復性好,抗干擾性強的特點。試劑應用多點定標和非線性校準,可在全自動生化分析儀上自動完成,檢測時間縮短至10分鐘以內,極大地方便了臨床檢測應用。

1.4 統計學處理計量資料采用ˉx±s表示,應用SPSS13軟件包進行統計學分析。按年齡和性別分組,組間比較用單因素方差分析,P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

249例兒童腦脊液CysC檢測結果見表1。1歲前其CysC水平高于1歲后各組,而1歲-、3歲-、7歲-各組間則無統計學差異,趨于穩定。而各年齡組男女性別間亦無統計學差異。血清CysC檢測結果見表2。其變化趨勢及相互關系與腦脊液檢測結果相同。

表1 249例兒童腦脊液 CysC檢測結果(±s）

表1 249例兒童腦脊液 CysC檢測結果(±s）

注:與≤1月組比較,[1]P＜0.05,[2]P＜0.01;與1月-≤1歲組比較,[2]P＜0.01;與1歲-≤3歲組比較,[3]P＞0.05

組別 男性 女性n CysC(mg/L）n CysC(mg/L）≤1月 20 9.16±1.69 21 9.84±1.65＞1月-≤1歲 32 7.58±1.89[1] 30 8.83±1.79 1歲-≤3歲 28 4.66±1.33[2] 31 3.89±1.26[2]3歲-≤7歲 26 4.08±1.32[2][3] 19 3.18±1.13[2][3]7歲-≤15歲 22 3.76±1.11[2][3] 20 3.08±0.98[2][3]

表2 249例兒童血清CysC檢測結果(±s）

表2 249例兒童血清CysC檢測結果(±s）

組別 男性 女性n CysC(mg/L）n CysC(mg/L）≤1月 20 1.86±0.32 21 1.90±0.29＞1月-≤1歲 32 1.66±0.28 30 1.72±0.23 1歲-≤3歲 28 0.86±0.11 31 0.91±0.10 3歲-≤7歲 26 0.73±0.09 19 0.88±0.08 7歲-≤15歲 22 0.69±0.08 20 0.71±0.09

3 討論

3.1 CysC是一種非糖基化的堿性蛋白質,主要分布于細胞外液中,如腦脊液、唾液、尿液、精液等,其中腦脊液中濃度最高,尿中的濃度最低[2]。它含有120個氨基酸,相對分子質量Mr=13 359,人體所有的有核細胞都可以持續的產生CysC,其產量不受其他因素(如年齡、性別、飲食、炎癥等）的影響。腎臟是CysC的主要分解代謝器官,低分子量和高等電點(PI=9.3）使其能自由的通過腎小球基底膜,而且在近端腎小管幾乎全部被重吸收和分解代謝。CysC是近年來逐步被臨床關注的評價腎小球濾過率的一項敏感指標,自從Price等[3]在腦脊液中發現CysC后,僅有少量文章研究某種疾病的腦脊液中的CysC,如Asgeirsson等[4]測定HCCAA患者腦脊液中CysC水平并與健康人對照發現,HCCAA患者腦脊液中CysC濃度僅為健康人的1/3,而對兒童腦脊液中的CysC知之甚少。

3.2 據史清海[5]報道,新生兒1歲前,血清中胱抑素C水平最高,約為2.16 mg/L。表1、表2結果比較,兒童腦脊液中CysC含量比血清中高,其中一歲前腦脊液中的CysC是血清中CysC的4-5倍。與其它組比較,≤1月組男女兒童腦脊液中CysC含量,都高于其它各年齡組,差異具統計學意義。一歲后兒童腦脊液中CysC含量趨于穩定,3歲—≤7歲組、7歲—15歲組男女兒童腦脊液中CysC與1歲—≤3歲組比較,差異不具統計學意義。表明兒童腦脊液中CysC在一歲前比一歲后含量高,一歲后腦脊液中CysC含量變化不大。

3.3 對各組男女間腦脊液中CysC進行統計學分析,各年齡組男女間的差異均不顯著,均為P＞0.05,表明兒童腦脊液CysC濃度在不同性別之間差異無統計學意義,因此沒必要建立不同性別的腦脊液CysC參考范圍。

[1]余洪立.血清胱抑素 C測定的方法學研究進展[J].廣西醫學,2004,26(3）:366.

[2]顧春瑜,鄭 磊.血清胱抑素C在評價腎移植患者腎功能中的應用[J].國外醫學?臨床生物化學與檢驗學分冊,2004,25(6）:559.

[3]Price CP,Finney H.Developments in the assessment of glomerular filtration rate[J].Clin Chim Acta,2000,297(122）:55.

[4]Asgeirsson B,Haebel S,Thorsteinsson L,et al.Hereditary cystatin C amyloid angiopathy:Monitoring the p resence of the Leu268→Gln cystatin C variant in cerebrosp inal fluids and monocyte cultures by MS[J].Biochem J,1998,329(Pt 3）:497.

[5]史清海,占麗娜,路西春,等.血胱抑素C測定對新生兒窒息后腎功能損傷的評價[J].中國小兒急救醫學,2006,13(4）:373.