高效液相色譜法測定肌醇煙酸脂及其制劑的有關物質

王憲忠 王丹彧 李東偉 張椿影 陳笑強

1.吉林省四平市食品藥品檢驗所，吉林四平 136000；2.黑龍江省齊齊哈爾市第一醫院，黑龍江齊齊哈爾161005

肌醇煙酸脂是降血脂藥，具有降低膽固醇及擴張末梢血管的作用。用于高膽固醇血癥、動脈粥樣硬化及末梢血管障礙性疾病等的輔助治療。目前肌醇煙酸脂收載于《衛生部藥品標準》化學藥品及制劑第1冊[1]，有關物質檢查為薄層色譜法；隨著部頒標準轉為國家標準，雜質方法檢查應該修訂；本研究根據試驗結果，建立了高效液相色譜法測定肌醇煙酸脂的有關物質，使質量標準更加完善。

1 儀器與試藥

Ajient1100液相色譜儀，WVD檢測器，1100工作站。KQ-1000型超聲波機（昆山市超聲儀器有限公司，200W）。乙晴、四氫呋喃均為色譜純，水為二次蒸餾的純化水；肌醇煙酸脂對照品（齊齊哈爾鼎恒升藥業，20100623）；供試品肌醇煙酸脂片（北京賽科藥業有限公司，0903023；臨汾寶珠制藥有限公司，0906022；山西威奇達藥業有限公司，0904011），規格0.2 g。

2 試驗方法與結果

2.1 色譜條件和系統使用性試驗[2]

使用色譜柱為 Diamonsil-C18（150 mm×4.6 mm，5μm），流動相[3]：水-甲醇-四氫呋喃（45∶45∶10）；檢測波長262 nm；流速1.0 mL/min；柱溫28℃，進樣量10μL。理論塔板數按肌醇煙酸脂峰計為3 800。系統適用性試驗溶液的配制：取肌醇煙酸脂對照品25 mg，置25 mL量瓶中，加水-四氫呋喃（50∶50）適量，溫水浴10 min，振搖溶解，冷卻至室溫，再加水-四氫呋喃（50∶50）至量瓶刻度，搖勻，量取10μL注入其中液相色譜儀，并調節其靈敏度，使主成分色譜峰的峰高達到滿量程，色譜圖中肌醇煙酸脂與降解產物的分離度不小于1.5。

2.2 溶液制備

2.2.1 供試品溶液 取肌醇煙酸脂25 mg，加置25 mL量瓶中，加水-四氫呋喃（50∶50）適量，溫水浴10 min，振搖溶解，冷卻至室溫，加水-四氫呋喃（50∶50）至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液 取肌醇煙酸脂對照品25 mg，置25 mL量瓶中，加水-四氫呋喃（50∶50）適量，溫水浴10 min，振搖溶解，冷卻至室溫，加水-四氫呋喃（50∶50）至刻度，搖勻，作為儲備液；精密量取供試品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，加水-四氫呋喃（50∶50）至刻度，搖勻，作為對照溶液。

2.3 方法專屬性考察

2.3.1 堿破壞性試驗 取肌醇煙酸脂對照品25 mg，置25 mL量瓶中，加0.1 mol/L氫氧化鈉[水-四氫呋喃（50∶50）]溶液10 mL，置60℃水浴中加熱4 h，放冷后以1 mol/L鹽酸溶液調pH至中性，再加水-四氫呋喃（50∶50）溶解至刻度，依法測定，記錄色譜圖。見圖1-A。

2.3.2 光破壞性試驗 取“2.2”相下的供試品日光下照射8 h，依法測定，記錄色譜圖。見圖1-B。

2.3.3 熱破壞性試驗 精密量取肌醇煙酸脂對照品25 mg，置25 mL量瓶中，加水-四氫呋喃（50∶50）至刻度，水浴中加熱4 h，放冷至室溫，另取肌醇煙酸脂對照品適量置120℃烤箱中加熱4 h后，精密量取肌醇煙酸脂對照品25 mg，置25 mL量瓶中，加水-四氫呋喃（50∶50）適量，溫水浴10 min，振搖溶解，冷卻至室溫，加水-四氫呋喃（50∶50）至刻度，搖勻，分別依法測定，記錄色譜圖。見圖1-C。

2.3.4 酸性破壞性試驗 取肌醇煙酸脂對照品25 mg，置25 mL量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸（水-四氫呋喃（50∶50）10mL，置60℃水浴中加熱4 h，加水-四氫呋喃（50∶50）10 mL溶解，放冷后加0.1 mol/L氫氧化鈉調節至中性，再加水-四氫呋喃（50∶50）10 mL溶解至刻度，依法測定，記錄色譜圖。見圖1-D。

2.3.5 氧化破壞性試驗 取肌醇煙酸脂對照品25 mg，置25 mL量瓶中，加0.5%過氧化氫溶液10 mL，置60℃加熱4 h后煮沸2 h，放冷，加水-四氫呋喃（50∶50）至刻度，依法測定，記錄色譜圖。見圖1-E。

2.3.6 溶劑干擾試驗 本品溶液制備以水-四氫呋喃（50∶50）為溶劑，精密量取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。見圖1-H。

圖1 HPLC方法專屬性考察圖譜

2.4 最低檢測限試驗

對照品溶液經過逐漸稀釋后開始測定，最低檢測限以信噪比3∶1時的峰高為準，測得肌醇煙酸脂的最低檢出量為0.001 ng。

2.5 精密度試驗

按照“2.2”項下的方法，取同一批樣品，分別配制出6份供試品溶液，記錄這6份供試品溶液的進樣色譜圖，6份樣品中，測得的最大單一雜質的含量平均值為0.16，RSD為0.86%，測得雜質總和的平均值為0.42，RSD為1.21%，精密度表現良好。

2.6 穩定性試驗

分別在 0、2、4、8、12、24 h 依法測定“2.2”項下的對照溶液和供試溶液，對照溶液和供試溶液的主峰面積RSD為分別為0.21和0.89，其中在供試溶液中測得最大單一雜質含量平均值為0.18%，雜志總和的平均值為0.36%，RSD為0.78%，表明24 h內兩種溶液基本穩定。

2.7 線性關系考察

精密稱取肌醇煙酸脂25 mg，置25 mL量瓶中，用在以水-四氫呋喃（50∶50）10 mL溶解至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。分別精密量取對照品儲備在以水-四氫呋喃（50：50）稀釋成濃度為 0.1、0.25、0.5、0.75、1.0 mg/mL 的系列溶液（約相當于雜質0.1%～3.0%），分別精密量取上述溶液10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；以肌醇煙酸脂的濃度為橫坐標（X），以相對應的峰面積為縱坐標（Y）進行線性回歸，回歸方程為Y=306.96X－0.93，r＝0.9998（n=6），結果表明肌醇煙酸脂在1～30 mg/L濃度范圍內與峰面積呈良好線性關系。

2.8 樣品的有關物質測定

取3個廠家樣品，按“2.2”項下配制供試品、對照品溶液，精密量取對照品溶液10μL注入色譜儀，調節檢測靈敏度使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20%，在量取“2.2”項下的供試品溶液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時間的2倍。量取個雜質峰面積，按主成分自身對照法計算雜質量。供試品溶液色譜中如有雜質峰，個雜質峰面積的和不得大于對照溶液的主峰面積。樣品有關雜質測定結果見表1、圖1-F。

表1 樣品測定結果（%）

3 討論

近年來我國心腦血管疾病發病率不斷升高，高脂血癥在中老年疾病中十分常見，血脂水平異常是引起動脈粥樣硬化的一個主要因素，肌醇煙酸脂作為降血脂藥，本研究主要對肌醇煙酸脂及其制劑的有關物質通過高效液相色譜法進行測定。高效液相色譜法（HPLC）在藥品理化的鑒定上應用比較廣泛，其優勢在于迅速、敏捷、分離效能相對較高等，應用高效液相色譜法鑒定時，將待檢測成分予以分離后，通過紫外檢測器或色譜檢測器對其進行結構及定量等相關方面分析，根據檢測結果對待檢藥物質量做出合理評價[1-2]。

與原藥品標準方法的比較，原標準肌醇煙酸脂收錄了雜志檢查，其方法是薄層色譜法；其制劑沒有雜志檢查項，本研究通過對制劑雜質檢查能夠更好的控制制劑質量。本研究應用HPLC法測定肌醇煙酸脂中的有關物質。通過對精密度回收率的考察說明，本實驗提出的方法簡便、靈敏、準確，適用于肌醇煙酸脂及其制劑的質量控制。采用本法后排出了溶劑的干擾，由色譜圖明顯看出靈敏度相對于薄層色譜法顯著提高。

[1]衛生部.藥品標準化學藥品及制劑（第1冊）[M].北京：人民衛生出版社，1989：44.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010：5.

[3]李文治，楊連生，黃強.反相高效液相色譜法檢測肌醇煙酸酯片[J].藥物分析雜志，2003，23（5）：376-378.

[4]何昔遠.淺談高效液相色譜法在假劣中藥檢驗中的應用[J].中外健康文摘，2011，8（18）：45.

[5]李鳳蘭，曾衛華.脂必妥與煙酸肌醇酯治療高脂血癥的比較[J].農墾醫學，2002，24（3）：198.