動物轉基因技術研究新進展及其在牛育種上的應用

黃永震,賀 花,陳 宏

(西北農林科技大學動物科技學院,陜西省農業分子生物學重點實驗室,陜西 楊凌 712100)

動物轉基因技術研究新進展及其在牛育種上的應用

黃永震,賀 花,陳 宏＊

(西北農林科技大學動物科技學院,陜西省農業分子生物學重點實驗室,陜西 楊凌 712100)

動物轉基因技術已應用于生命科學的各個領域,尤其在研究基因功能、轉基因動物育種(抗病育種和提高生產性能)、治療人類疾病(生產藥用蛋白、干細胞治療和種器官移植)等方面得到了廣泛的應用。本文從轉基因技術的歷史和發展狀況入手,簡要介紹了幾種傳統的轉基因技術方法,重點綜述了近幾年為提高轉基因效率和轉基因精確調控的一些新技術。另外,本文就轉基因技術在牛育種方面的研究現狀,以及對轉基因技術在牛新品種培育和生物制藥等領域的應用和前景進行了綜述。

動物轉基因技術;轉基因效率;轉基因精確調控

轉基因動物實驗可追溯到1974年,Brackets等將兔的精子與SV40病毒DNA孵育后,進行體外受精獲得轉基因兔。同年,Jaenisch等將SV40病毒DNA注射到小鼠胚胎囊腔中,獲得攜帶外源基因的嵌合體小鼠。1980年,Gordon等首次報道用原核注射獲得了轉基因小鼠。此后,世界各國相繼開展轉基因動物的研究。1982年,美國科學家Palmiter等將大鼠生長激素(GH)基因導入小鼠受精卵中獲得轉基因“超級鼠”,被認為是世界上首批轉基因動物。直到1990年,美國Genzym e T ransgene公司才通過原核顯微注射法獲得了世界上第1頭轉基因牛。但由于牛本身具有產奶量大等獨特優勢,還是吸引了不少科學家對其進行研究,尤其是在 1997年,英國羅斯林研究所首次利用羊體細胞獲得克隆羊多莉,表明高等動物也可以由無性生殖來繁殖[1]。同年,乳腺中表達人凝血因子IX的轉基因克隆羊Polly培育成功[2]。2005年抗乳房炎轉基因牛的誕生[3],2006年多不飽和脂肪酸轉基因克隆豬的培育成功[4],標志著轉基因動物育種進入了新的發展歷程。2009年生產高比例的抗原特異性人源抗體的轉染色體牛的出生[5],是轉基因動物生產藥用蛋白的又一個里程碑。

隨著基因工程技術的不斷發展,從顯微操作技術、體細胞核移植技術、精子介導載體法和胚胎干細胞介導法等傳統轉基因動物生產方法,到結合基因打靶技術、生殖干細胞介導法和鋅指核酸酶介導的敲除或轉基因技術等現代生產方法的不斷出現,轉基因技術將會不斷得到完善,這項技術必將在未來的動物育種中將發揮巨大的作用。

1 傳統的轉基因技術

1.1 顯微操作技術

顯微操作技術(micromanipulation technique):是用精細的顯微注射針將外源基因直接注入牛受精卵的雄原核,使外源基因整合到基因組,從而獲得轉基因動物。

1982年,Palmiter等首次將大鼠生長激素基因與金屬硫蛋白基因啟動子拼接成融合基因,導入小鼠受精卵后,獲得了轉基因級鼠。現在的轉基因動物研究大都是在Palmiter等方法的基礎上改進進行的,顯微注射技術是一種應用比較廣泛、效果比較穩定的轉基因動物制作方法,在轉基因牛的研究中,Brandl等[6]利用該方法成功制作成了轉基因兔、轉基因豬和轉基因綿羊。目前通過顯微注射法已經獲得的轉基因動物有小鼠、兔、豬、羊、牛和魚等。

1.2 體細胞核移植技術

體細胞核移植技術(nuclear transplantation of animal somatic cells):是先把外源基因整合到供體細胞上,然后將供體細胞的細胞核移植到去核卵母細胞,組成重構胚胎,再把其移植到假孕母體,待其妊娠、分娩后便可得到轉基因動物。

1997年,首例體細胞核移植綿羊在世界上誕生,之后不久出現了體細胞核移植小鼠及牛,并通過體細胞核移植技術制作了轉基因動物。體細胞克隆不同于其它供體細胞,它為轉基因技術開辟了新的紀元,事實證明了選擇體細胞作供體細胞能生產高比例的轉基因后代。在體細胞核移植生產轉基因動物過程中,人們將綠色熒光蛋白導入供體細胞,使重構建的轉基因胚胎便于鑒定,通過轉綠色熒光蛋白體細胞核移植已生產出了轉基因后代小鼠、豬和牛。

1.3 胚胎干細胞介導法

胚胎干細胞介導法(embryonic stem cell-mediated):首先將基因導入胚胎于細胞;然后將轉基因的胚胎干細胞注射于動物囊胚后可參與宿主的胚胎構成,形成嵌合體,再將這種嵌合體動物與正常動物連續交配,則可生產出轉基因動物。

1.4 精子介導載體法

精子介導載體法(sperm-mediated gene transfer):使具有受精能力的精子與外源 DNA一起孵育,然后將該精子用于人工授精或體外受精,以期獲得轉基因動物。

1989年,科學家首次利用小鼠精子與DNA溫育產生轉基因小鼠。由于結果不穩定,目前,該方法體系還未完全建立成熟,但是它是非常有發展前途的一種方法。它可以與體外受精、早期胚胎陽性選擇和胚胎超低溫保存技術相結合,使轉基因技術更加實用化、簡單化。

1.5 逆轉錄病毒載體法

逆轉錄病毒載體法(retrovirus-mediated gene transfer):主要是利用其DNA的LTR區域的活性特點,將外源基因連接到LTR下部進行重組后,包裝成高滴度病毒顆粒,去直接感染受精卵,或微注入囊胚腔中。病毒載體進行轉基因是一種溫和的轉基因方法,同時也是對細胞損傷較小的一種轉染方式,并且可以得到較高的轉染效率。

1985年,Jaenisch等人成功地用逆轉錄病毒法獲得了轉基因小鼠。2007年,Ryu等[7]利用病毒載體感染精原干細胞,再將其注射到大鼠睪丸中,得到的轉基因大鼠表達的外源基因可以穩定遺傳。

2 現代的轉基因技術

2.1 基因打靶技術(提高轉基因精確性)

基因打靶技術(gene targeting protocols):是指通過同源重組將外源基因定點整合入靶細胞基因組上某一確定的位點,以達到定點修飾改造染色體上某一基因為目的的一項技術。該技術可細分為:胚胎干細胞基因打靶;體細胞基因打靶和條件性基因打靶。該技術克服了隨機整合的盲目性和危險性,是一種理想的修飾、改造生物遺傳物質的方法。

2000年,McCreath等[12]首次利用基因打靶技術生產了轉基因克隆羊,證實了基因打靶技術可用于生產轉基因大家畜。2003年,Yutaka等[13]利用基因敲除的方法獲得了1,3半乳糖苷轉移酶基因滅活的轉基因牛,首次在牛中實現了基因打靶技術。

2.2 RNA干擾介導的基因沉默技術(提高轉基因精確性)

RNA干擾(RNA interference,RNAi):是雙鏈RNA介導的特異性基因表達沉默現象。利用該方法,可以部分地抑制特定內源基因的表達,或通過mRNA的降解使目的基因表達下調沉默,從而實現基因表達調控的時空性和可逆性。

2005年,Acosta等[14]設計了斑馬魚Myostatin基因的干擾片段并注入其受精卵,這段干擾片段解除該基因對肌肉組織生長和發育的抑制作用,產生肌肉發達的斑馬魚。2007年,Dickins等[15]將啟動子四環素反應元件(T RE)與RNA干擾基因結合后轉入小鼠中,成功轉入的小鼠再與轉有轉錄因子(tTA)的小鼠雜交,制備出同時含有 TRE、RNA干擾基因以及tTA的轉基因小鼠。

2.3 誘導多能干細胞轉基因技術(提高轉基因精確性)

誘導多能干細胞(induced pluripotent stem cells,iPS cells):是將幾種轉錄因子轉入已經分化的體細胞中,使其重編程為類似胚胎干細胞的一種細胞類型。在轉基因動物研究中,將iPS細胞誘導技術同動物轉基因技術相結合是一種創新,應用該方法不僅可以避免種間繁殖障礙,克服親緣關系的制約,而且可獲得用傳統的交配方法無法得到的動物新性狀。

2006年,日本京都大學Takahashi等[16]將攜帶有Oct4、Sox2、Klf4和 c-Myc四種限定因子基因的逆轉錄病毒載體導入小鼠成纖維細胞,結果顯示轉入限定因子的成纖維細胞被誘導重編程為胚胎干細胞樣的多能性細胞,該細胞被稱為“誘導多功能干細胞”。

2.4 慢病毒載體技術(提高轉基因效率)

慢病毒載體技術(lentiviral vector-mediated gene transfer):慢病毒隸屬于逆轉錄病毒,由于具有較長的致病潛伏期因此被稱為慢病毒,它包括愛滋病病毒,貓科免疫缺陷病毒以及其他相關病毒。基于對愛滋病病毒HIV-1的研究,科學家已研發出極具吸引力的慢病毒載體技術系統,該系統可將外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達目的基因,或抑制靶基因的表達。

目前,轉基因研究中,使用最多的病毒載體是慢病毒。慢病毒載體技術是一種高效的轉基因動物制備技術,轉基因效率可達60%以上。2003年,Clark等利用慢病毒載體制備轉基因動物的效率高達80%～100%。

2.5 生殖干細胞法(提高轉基因效率)

1) 精原干細胞法(spermatogonial stem cells),即將外源基因整合入精原或卵原干細胞中,就有可能連續不斷地獲得成熟的結合有外源基因的精子或卵子,經過體外受精過程,獲得整合有外源基因的轉基因動物。一般采用的技術方法為將DNA直接注射入睪丸、卵巢或者曲細精管中。

1994年,Brinster等[8]首先建立了該技術,并實現了供體小鼠的精原干細胞在受體中進行精子發生和單倍體的生殖遺傳。2008年,Honaramooz等[9]通過腺病毒攜帶GFP報告基因轉染體外培養的山羊精原干細胞,采精后進行體外受精,轉基因胚胎陽性率可達10%。這是第一個成功通過精原干細胞移植的方法進行大家畜轉基因研究的報道,為建立轉基因大動物模型帶來了希望。

2) 原始生殖細胞法(primordial germ cells),是指能夠發育成為精子或卵子的祖先細胞,來源于胚胎生殖嵴,與來源于囊胚內細胞團的胚胎干細胞同屬全胚層多能干細胞。

2002年,Natio等[10]從早期雞胚血液分離得到了原始生殖細胞法,利用脂質體法導入LacZ基因,然后注入受體胚,在雞胚的生殖嵴表達了LacZ基因。2006年,Van de Lavoir等[11]將攜帶有綠色熒光蛋白基因的原始生殖細胞法注入孵化雞胚內,將孵化出的公雞與未轉入基因的母雞交配,成功獲得生殖腺轉入外源基因并帶有綠色熒光的雛雞。

2.6 轉座子介導的轉基因(提高外源基因的整合效率)

轉座子又稱跳躍基因,它是基因組上不必借助于同源序列就可以移動的DNA片段。它能夠在基因組內自我復制,并隨機插入基因內其它位點。

2005年,復旦大學發育生物研究所的科研人員改造了一種源于飛蛾的PB(Piggy Bac)轉座子可在小鼠等哺乳動物細胞中高效導入外源基因,并穩定表達[17],從而創立了一個高效實用的哺乳動物轉座因子系統。這種技術可以將外源基因高效地整合到基因組中轉座酶目標序列上,很大程度上提高了外源基因的整合效率。

2.7 人工染色體介導轉基因(提高外源基因的表達量)

人工染色體介導轉基因(artificial chromosome gene transfer):是體外重組的含有類似天然染色體組件的具有特定結構的DNA分子。常見的有酵母人工染色體(YAC),細菌人工染色體(BAC),哺乳動物人工染色體(MACs)等。傳統轉基因研究中,由于外源基因不能攜帶足夠的調控元件以及受到染色體位置效應的影響,往往表達量很低,甚至不表達或者異位表達,這些都不利于轉基因動物的研究。由于人工染色體含有較多的調控元件以及側翼序列,受染色體位置效應的影響較小,人工染色體的出現可以彌補上述不足,實現外源基因較高水平的表達。

2008年,楊鵬華[18]等將含有人乳鐵蛋白的BAC和GFP質粒共注射,得到了乳腺特異性高表達乳鐵蛋白的轉基因克隆牛。近兩年出現的RED/ET重組系統(Red/ET recombination)可以對BAC在細菌中進行精確修飾,比如對BAC修飾后加入藥物篩選基因,然后通過電轉染的方法將含有篩選標記基因的BAC導入體細胞并進行藥物篩選,將篩選得到轉基因陽性細胞進行核移植。這樣克服了顯微注射方法效率低的缺點,提高了使用BAC進行轉基因的效率和實用性。

2.8 鋅指核酸酶介導的敲除或轉基因技術(提高外源基因的高效定點整合)

鋅指核酸酶(zinc-finger nucleases,ZFNs):由一個DNA識別域和一個非特異性核酸內切酶構成。DNA識別域是由一系列鋅指蛋白串聯組成,每個鋅指蛋白識別并結合一個特異的三聯體堿基。鋅指核酸酶能識別特異的DNA序列,并在此特異位點產生一個DNA雙鏈切口,而后細胞固有的DNA修復機制通過同源重組或非同源末端連接將切口修復,從而達到DNA靶向修飾的目的。鋅指核酸酶技術不僅將基因組靶向修飾的效率提高了3～5個數量級,而且具有極高的特異性。鋅指核酸酶激活了體內的DNA損傷修復機制,可以大大提高基因打靶的效率。

2009年,Hockemeyer等[19]利用ZFN對人的ES細胞和iPS細胞設計4對鋅指酶對OCT 4基因位點進行打靶時發現,有2對鋅指酶誘導的同源重組效率達到36%～94%。2009年,Geurts等[20]直接將ZFNs質粒或者編碼ZFNs的mRNA直接注射到大鼠原核或者胚胎胞質中,得到的子代大鼠檢測發現IgM基因和Rab38基因敲除的效率高達25%～100%,并且子代老鼠中發現一只實現了一次對兩個等位基因的敲除,而這在傳統的基因打靶中幾乎是不可能的。這種高效率的基因打靶使得基因敲除變得簡便易行,極大地方便了基因功能的研究和疾病模型的建立。同時,ZFN的應用提高了同源重組的效率,在供體基因存在的情況下,實現了外源基因的高效定點整合。但是ZFN進行基因打靶也存在脫靶的問題,有可能造成不可預知的后果,這需要在以后的研究中進一步提高ZFN的特異性。

3 轉基因牛的研究進展

3.1 國外研究進展

1990年,荷蘭Pharming公司通過顯微注射法獲得世界上第一頭轉入有人乳鐵蛋白基因的公牛。該公牛與非轉基因母牛生產的轉基因后代母牛乳汁中表達了人乳鐵蛋白。

1998年,日本的科學家Cibelli等采用母牛輸卵管和子宮內膜細胞為核供體獲得了世界首例體細胞克隆牛。同年,他們以胎兒成纖維細胞為核供體,用同樣的方法獲得了攜帶半乳糖苷酶外源基因轉基因牛。

2001年,Krimpenfort等利用顯微注射技術向牛體外受精早期胚胎注射外源基因,通過非外科手術法進行胚胎移植,在所生的19頭牛中,經檢測有2頭為轉基因牛。

2002年,Berkel等利用牛的酪蛋白啟動子與人乳鐵蛋白基因組的6.2 kb片段構建轉基因載體,通過顯微注射獲得轉基因牛。

2002年,新西蘭與澳大利亞科學家合作也獲得了轉基因體細胞克隆牛。

2002年,Donovan等將編碼溶葡球菌酶的基因轉入奶牛基因組中獲得轉基因牛,證明在其乳腺中表達的溶葡球菌酶可以有效預防由葡萄球菌引起的乳房炎[21]。

2003年,日本的科學家Yutaka等利用基因敲除的方法獲得了α-1,3半乳糖苷轉移酶基因單等位基因滅活的轉基因牛,首次在牛中實現了基因打靶[13]。

3.2 國內研究進展

1999年,上海醫學遺傳研究所黃淑幀等,利用向體外受精的早期胚胎中注射外源基因的方法成功培育出了我國第1頭轉入有人血清白蛋白基因的轉基因牛。

2002至2006年,中國農業大學李寧教授及其科研團隊利用轉基因體細胞克隆技術,獲得了轉基因克隆奶牛49頭,存活29頭。人乳鐵蛋白、人α乳清白蛋白和人溶菌酶在轉基因牛乳中平均表達量達到了國際上最好水平。

2003年,中國農業大學李寧課題組培育了10頭體細胞克隆牛。其中包括兩頭轉基因體細胞克隆牛:“樂娃”和“巖娃”。“樂娃”轉入了綠色熒光蛋白基因,“巖娃”創造了兩個世界首次:首次轉有人巖藻糖轉移酶基因;首次在同一頭牛中轉有3種外源基因(綠色熒光蛋白基因、人巖藻糖轉移酶基因和新霉素抗性基因)。標志著我國轉基因體細胞克隆牛的生產技術體系已經漸趨成熟。

2006年4月,中國工程院院士旭日干指導完成的體細胞克隆牛和轉基因克隆牛技術研究通過專家鑒定,該項目獲得內蒙古首批3頭體細胞克隆牛、首例胚胎冷凍保存的體細胞克隆牛和首例攜帶有人胰島素基因的轉基因克隆牛。

2006年世界首例抗瘋牛病轉基因克隆牛在中國山東淄博誕生。

2010年5月,國家轉基因肉牛育種課題組主要成員在國家肉牛改良中心良種牛繁育場,實施了首批轉ω-6脂肪酸脫氫酶基因(FAT 1)的肉牛胚胎移植工作。

2010年7月,內蒙古大學大動物研究中心與內蒙古科維爾有限公司聯手育出轉基因克隆肉牛。這種轉基因克隆肉牛是在動物耳朵上提取細胞,再通過無性繁殖人工培育而成。這種牛因剔除了肌肉生長抑制素基因(Myostatin),從而與其他牛相比產肉量更多,肉質優良。

4 轉基因牛的應用

4.1 研究基因功能和治療人類疾病

通過轉基因技術,可以精確地失活或增強某些基因的表達,研究基因功能,制作各種研究人類疾病的動物模型。利用轉基因技術建立人類疾病動物模型比其他方法有優勢,它可以在動物原來遺傳背景的基礎上,通過改變某種基因的表達水平而實現,用以研究外源基因在整體動物中的表達調控規律,從而對人類疾病的病因、發病機理和治療學產生極大的促進作用。

日本科學家Kuroiw a等[22]將微細胞介導的染色體轉移技術(MMCT)與體細胞克隆技術相結合,把含有整個人類免疫球蛋白重鏈基因Ig H和輕鏈基因Igλ的染色體片段轉入牛的原代胎兒成纖維細胞,獲得了4只健康存活的轉基因克隆牛,它們的血液中能不同程度表達人類多克隆抗體,這些轉染色體牛無疑會極大地促進利用動物生物反應器大量生產人源化的抗體、酶、牛奶和其他藥用蛋白的研究工作。

李寧院士與合作者用轉基因克隆技術將人的巖藻糖轉移酶基因植入牛的基因組內,使其在牛奶中含有巖藻糖抗原,這種轉基因牛奶可作為口服藥,用來防治各種胃病,具有重要的醫學價值和經濟社會價值。

4.2 應用于生物反應器,生產藥用蛋白

通過家畜乳腺分泌大量安全、高效、廉價的人體藥用蛋白,一直是轉基因動物研究的熱點。從1987年Gordon等人在轉基因小鼠乳汁中得到人組織型纖維蛋白溶酶原激活因子,到現在已有數十種人體蛋白在家畜乳腺中表達,這些蛋白可以用于治療人類相關疾病。

1990年12月,荷蘭Pharming公司用酪蛋白啟動子與人乳鐵蛋白(h LF)的cDNA構建了轉基因載體,通過顯微注射法獲得世界上第一頭名為 Herman的轉基因公牛。該公牛與非轉基因母牛生產的轉基因后代中1/4后代母牛乳汁中表達了人乳鐵蛋白。2002至2006年,中國農業大學李寧教授及其科研團隊利用轉基因體細胞克隆技術,獲得了轉基因克隆奶牛49頭,存活29頭。人乳鐵蛋白在轉基因牛乳中平均表達量達到3.43 g/L,人α乳清白蛋白表達量也達到1.55g/L,人溶菌酶在轉基因牛乳中含量達1.50 g/L以上,這些重組蛋白表達量達到了國際上最好水平。

近十幾年來,在利用轉基因技術制取新藥方而取得了驚人的成就,目前已在牛的乳汁中生產出一些人類蛋白質藥物:抗凝血酶、纖維蛋白原、人血清白蛋白、膠原蛋白、乳鐵蛋白、糖基轉移酶、蛋白C等。

4.3 提高抗病能力

2004年,日美聯手利用基因工程手段培育出對瘋牛病具有免疫力的牛,這種轉基因牛不攜帶普里昂蛋白或其他傳染性蛋白。

2005年,Donovan等將編碼溶葡球菌酶的基因轉入奶牛基因組中獲得轉基因牛,證明在其乳腺中表達的溶葡球菌酶可以有效預防由葡萄球菌引起的乳房炎,轉基因牛葡萄球菌感染率僅為14%,而非轉基因牛感染率達71%。

2006年,萊陽農學院董雅娟等與日木山口大學合作,成功地培育出2頭轉有抗瘋牛病基因的轉基因奶牛。2007年,該研究組的Richt等通過基因打靶技術將牛的PRNP基因雙位點滅活,獲得了存活兩年以上的轉基因牛[23]。這些牛在臨床解剖、生理發育、組織病理以及免疫和生殖發育方而都很正常,而且在體外試驗中能夠很好的抵抗瘋牛病的傳染,這為生產不含骯蛋白的肉、奶制品提供了一種很好的方法。

4.4 改良品種

轉基因技術可用于改造動物的基因組,提高家畜的經濟性狀,如加快生長速度、提高瘦肉率,改善肉質,提高飼料利用率和抗病力等。轉基因技術用于育種,不僅可以加快改良進程,提高選擇效率,而且不會受到有性繁殖的局限。

2003年,Brophy等研究人員在奶牛的胚胎細胞中加入了兩種額外的基因:β-酪蛋白和κ-酪蛋白,由此培育的轉基因奶牛所產的奶中β-酪蛋白含量提高了20%,κ-酪蛋白的含量也增加了一倍。

人們利用轉基因技術把有利基因轉移到肉牛中,使肉牛帶有外源基因,且能夠在后代中表達出來,對肉牛業的發展和人們生活水平的提高有重要作用。

5 問題與展望

現在轉基因動物的應用主要集中在醫藥方面,在食品工業上的應用很有限,主要原因是轉基因的效率太低,建立優質轉基因動物品系的時間太長。今后的工作還應集中在現有的技術水平上建立更加簡便、經濟、有效的轉基因技術,制備出外源基因穩定遺傳的有生產應用價值的健康動物。隨著家畜基因組計劃的完成,人類將更有針對性地改良家畜基因,把外源基因插入到對動物生長影響較小的DNA片段中,從而克服隨機整合和異常表達給家畜健康帶來的問題,而基因打靶等新的轉基因技術創造了這種可能。

2008年7月,國務院常務會議審議并原則通過了轉基因生物新品種培育科技重大專項,投入資金約200億元,轉基因動物新品種培育已經得到了我國政府的高度重視。轉基因動物的研究和應用將是21世紀生物工程技術領域最活躍、最具有應用價值的項目之一。它將給人類的醫藥衛生、生物材料、家畜改良等領域帶來革命性的變化,它所帶來的經濟效益和社會效益將是難以估量的。

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Current Status of Transgenic animals and Application in Transgenic Cattle Breeding

HUANG Yong-zhen,HE Hua,CHEN Hong＊

(Co llege of Animal S cience and Technolo gy,North west A&F University,Yang ling,S haan xi 712100,China)

Transgenic animals have been applied to all areas of life sciences.It has comprehensive application especially in the bioreactor,drug screening,xenotransplantation,improved varieties and improved production performance of animals and other aspects.In this paper,w e described the history of the transgenic technology and the state of the development,severaltraditionalm ethods of transgenic technology was introduced,some new transgenic technologies of focus on improve transgenic efficiency and precise control in recent years.In addition,research status of transgenic technology in cattle breeding and the application and development prospect of cultivate new varieties by transgenic technology in cattle breeding and biopharmaceuticalapplication and prospect and other fields of research in the future.

Transgenic Animals;Transgenic Efficiency;Precise Controlof Transgenic

S823.2

A

1001-9111(2011)04-0035-06

2011-03-15

2011-04-09

本研究由國家自然科學基金(編號:30972080);國家科技支撐計劃(編號:2008BADB2B03-19);農業部肉牛產業體系項目(編號:CARS-38);國家轉基因專項子課題(編號:2009ZX08009-157B,2008ZX08007-002,2009ZX08007-005B-07)項目資助。

黃永震(1983-),男,河南南陽人,博士研究生,主要從事動物遺傳育種與繁殖研究。

＊通訊作者:陳 宏(1955-),男,陜西西安人,教授,博士生導師,主要從事分子遺傳與家畜育種。