不育癥患者218例精子形態(tài)分析

王冠軍

在這偏僻而落后的地區(qū)，以前不孕不育以為只有妻子的事情，現(xiàn)在隨著科學技術的發(fā)展，人們對男性生殖健康的重視，不孕不育不僅是妻子的問題，也有丈夫的問題。在不孕夫婦中，男性因素導致的不孕約為25% ～40%。因此，簡單的精液常規(guī)檢查已經(jīng)不能滿足臨床發(fā)展需要，也不能全面、客觀地反映患者的真實情況，更不能評價睪丸功能。精子形態(tài)作為精液參數(shù)的組成部分，是反映精液質(zhì)量的重要指標［1］，WHO特別強調(diào)了精子形態(tài)學是最能反映男性生育力的一項指標［2］，需要經(jīng)過染色鑒別。盡管精子形態(tài)分析本身存在不足，如：染色方法不同，分析標準各異，以及技術人員的主觀性，但是精子形態(tài)與精子功能的密切關系，以及精子形態(tài)分析在輔助生殖中的預測價值，均顯示出精子形態(tài)分析在評價精子體內(nèi)或體外受精(invitro fertilization，IVF)潛能中的重要地位［3］。因此，我們必須重視用染色方法報告精子形態(tài)學檢查結(jié)果，以評價睪丸功能。筆者于2011年采用瑞——姬染色方法(Gienrs染色)，對218例精液標本在油鏡下進行了精子形態(tài)學分類，現(xiàn)報告如下

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010年8月至2011年10月其間來我院就診的原發(fā)或者繼發(fā)不育癥患者218例，年齡19～49歲，平均32歲，不育史均在一年以上。

1.2 實驗方法

1.2.1 標本制備 禁欲3～5 d，手淫法取精。精液常規(guī)檢查參考世界衛(wèi)生組織《精液分析手冊》(第4版)。精液標本在常規(guī)分析后直接涂片，若精子密度高于20×106/ml，取5 μl精液在載玻片上拉薄，空氣中自然干燥。同份標本加入5倍體積的生理鹽水，在600 g下離心10 min去除精漿，輕彈試管使離心后的精子團重新懸浮于鹽水中，取20～40 μl涂片。光鏡下觀察精子密度，以無精子重疊為準，過稀或過密需重新涂片。

1.2.2 標本染色 方法采用瑞氏染色，將瑞氏染液滴加于干燥后的涂片上，靜置10 s后，再滴加等量的PH 6.9磷酸鹽緩沖液，染色10 min，流水沖洗玻片后室溫干燥。在油鏡視野下觀察并進行計數(shù)。

1.2.3 分類標準，在油鏡下對每份標本連續(xù)計數(shù)200個精子，分別記錄頭部、體部、尾部畸形精子的百分率和正常形態(tài)精子比率。求出每份精液樣本的正常精子形態(tài)百分率，正常精子形態(tài)百分率≥30%判為正常，正常精子的判定標準為。①精子頭部呈光滑卵圓形，長 4～5 μm，寬 2.5～3.5 μm，頭寬為頭長的2/3～3/5，頂體占頭的40% ～70%。②中部必須是細長的且與頭縱軸成一直線，中部寬≤1 μm，接近頭寬的一半。③尾部均一且直，比中段細(主段及末段)長45 μm，(4)胞質(zhì)小滴小于頭部大小的一半。異常精子包括頂體過小、過大、梨形頭、圓形頭、長形頭、不規(guī)則形頭、頭部空泡、無頂體，雙頭等;尾部連接部位異常、體部腫脹，彎曲中段，或聯(lián)合體缺陷等;尾部彎折(＞90°)、卷曲，無尾，斷尾，短尾，長尾，雙尾，發(fā)卡狀或聯(lián)合體缺陷等。(如下圖所示)

圖1

2 結(jié)果

在218份精液標本中，正常形態(tài)精子者74份，占33.9%，缺陷(畸形)精子者144份，占66.1%。其中精索靜脈曲張者63例，占28.9%;少精子癥者52例，占23.9%;無精子癥者12例，占5.5%;小睪丸癥者9例，占4.1%;尼古丁效應精子者8例(精子為：頭核固縮深染、尾部纏繞呈豆芽狀)，占3.7%。在少精子癥者中，有7例患者精子數(shù)量太少，無分類意義。因此，去除這7例患者及12例無精子癥患者，實際可分類精子的標本199份，這199份標本按精子形態(tài)學分析，以正常形態(tài)率≥30%判為正常，結(jié)果74例正常，為正常組A;125例異常，為異常組B。即A正常組和B異常組，兩組間的人口學資料統(tǒng)計無顯著差別。AB兩組精液分析參數(shù)和正常形態(tài)率結(jié)果比較(詳見表1)。

表1 兩組精液分析結(jié)果比較表

3 討論

目前精液分析是不育癥檢查最基本的檢驗指標，是臨床診斷、治療和療效觀察的依據(jù)。除精子動力學參數(shù)外，精子形態(tài)學也是精液分析的重要依據(jù)。由表1可見精子形態(tài)異常組不但精子的活動率、活動力顯著低于形態(tài)正常組(P＜0.05)，而且比正常精子形態(tài)率也顯著低(P＜0.01)。但目前缺乏統(tǒng)一的標準，WHO也沒有明確規(guī)定精子形態(tài)正常率的參考［2］，有學者認為［4］，應在染色涂片上觀察精子形態(tài)，畸形精子超過40%～50%為異常，屬畸形精子癥。國家人口和計劃生育委員會制定的操作規(guī)程［5］規(guī)定，當異常精子數(shù)量超過40%，會嚴重影響精子質(zhì)量。本人統(tǒng)計218例精液標本中，統(tǒng)計結(jié)果顯示異常精子形態(tài)的數(shù)量已進入此范圍。正常的精子形態(tài)和結(jié)構(gòu)是保證精子完成受精的基礎，因此，精子形態(tài)和結(jié)構(gòu)異常成為導致體內(nèi)或者體外受精失敗的重要原因［6］。在不育癥患者的檢查中，將精液常規(guī)與精子形態(tài)學分析相結(jié)合，有助于提高男性不育癥的診斷率［7］。精子形態(tài)檢查簡單、易行、可以直接反映睪丸生殖功能狀況和有害因素對睪丸的損傷程度，為臨床診斷提供參考信息，但必須強調(diào)是以染色的方法在油鏡下進行形態(tài)學鑒別和確定分類。

［1］蔣敏，陳新敏，岳煥勛，等.精子形態(tài)學分析在男性不育癥診斷中的應用.中國優(yōu)生與遺傳雜志，2007，15(6)：106-110.

［2］世界衛(wèi)生組織.人類精子及精子-宮頸粘液相互作用實驗室實驗手冊.第4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：23-24.

［3］Guzick Ds，Overstreet JW，F(xiàn)actor-Litrak P，et al.Sperm morphology，motility and concentration in fertile and infertile men(J).N Engl J Med，2001，345(19)：1388-1393.

［4］吳明章，曾超文，張君慧，等.男性生殖病理學.上海：上海科學普及出版社，1997：215.

［5］國家人口和計劃生育委員會科技司.臨床檢驗操作規(guī)程.南京：東南大學出版社，2005：202.

［6］王瑞雪，孫卉芳，劉睿智，等.畸形精子癥研究進展.生殖與避孕，2007，27：292-303.

［7］李然偉，劉睿智，許宗革，等.精子凋亡與精子密度、活力、形態(tài)關系探討.中國實驗診斷學，2007，11(6)：776-779.