錢草硝石顆粒提取工藝研究

范卓文，張娜，于海龍，武斌，張巍

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040;2.哈爾濱市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，黑龍江 哈爾濱 150525;3.哈藥集團(tuán)三精制藥股份有限公司，黑龍江 哈爾濱 150069)

錢草硝石顆粒是由金錢草、石韋、海金沙、瞿麥等九味中藥制成的復(fù)方制劑，具有清熱化濕，利尿排石，通淋止痛，軟堅(jiān)散結(jié)之功效，主要用于泌尿系統(tǒng)結(jié)石的治療［1］。本試驗(yàn)優(yōu)化了水煎煮工藝參數(shù)，確定了錢草硝石顆粒的最佳提取工藝。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀(Waters1515，美國(guó)Waters公司);紫外檢測(cè)器(Waters2487，美國(guó)Waters公司);電子天平(JD1000－2，沈陽(yáng)龍騰電子稱量?jī)x器有限公司)。

1.2 試藥

槲皮素對(duì)照品、山奈酚(山奈素)對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所);所用藥材經(jīng)檢查，符合《中國(guó)藥典》2005年版一部、衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)或地方標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)各項(xiàng)規(guī)定。

2 方法與結(jié)果

2.1 工藝路線擬定

根據(jù)處方中各藥味所含有效成分的理化性質(zhì)及臨床應(yīng)用等特點(diǎn)，擬定提取制備工藝:金錢草、瞿麥、石韋、車前子、冬葵子選用水煎煮提取，本文只對(duì)此部分進(jìn)行考察研究。

2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

影響水煎煮提取的因素主要有煎煮時(shí)間、加水量和提取次數(shù)，故設(shè)計(jì)對(duì)煎煮時(shí)間、加水量、提取次數(shù)三個(gè)因素，分別選擇3個(gè)水平，按L9(34)正交表進(jìn)行正交試驗(yàn)，以藥材中所含有的有效成分槲皮素和山奈酚的總含量為測(cè)定指標(biāo)，因素水平設(shè)計(jì)表見(jiàn)表1。

表1 提取因素

2.3 測(cè)定方法

色譜條件:色譜柱為 Shim－pack VP－ODS(150mm ×4.6mm，5μm);流動(dòng)相:甲醇 －0.4%磷酸溶液(50∶50);檢測(cè)波長(zhǎng):360nm;柱溫:室溫;流速:1.0ml/min。

2.4 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取槲皮素對(duì)照品及山奈酚對(duì)照品適量，加80%甲醇制成每1ml含槲皮素4μg、含山奈酚20μg的溶液，即得。

2.5 供試品溶液的制備 取1/30處方量的藥材，按正交試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)，提取液濾過(guò)，合并，適當(dāng)濃縮，定溶于200ml容量瓶中。精密量取15ml藥液，精密加入甲醇10ml，鹽酸5ml，置90℃水浴中加熱水解1h，取出迅速冷卻，轉(zhuǎn)移至50ml溶量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，即得。

2.6 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即可。

2.7 結(jié)果與分析

試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 方差分析表

由表3可知，C因素具有顯著性意義，A、B因素差異不顯著，極差A(yù)＞B，故影響試驗(yàn)結(jié)果的因素依次為:C＞A＞B。C因素中C3＞C2＞C1，A因素和B因素?zé)o顯著性差異，為次要因素，根據(jù)節(jié)省時(shí)間的原則B因素選B1水平，A因素選A3水平。確定最佳工藝為A3B1C3，即加水量分別為12倍，10倍，10倍，煎煮3次，每次1h。

2.8 驗(yàn)證試驗(yàn)

以處方量為一份，共三份。按A3B1C3條件進(jìn)行重復(fù)驗(yàn)證試驗(yàn)，槲皮素和山奈酚的總含量結(jié)果表明，該提取工藝正交優(yōu)化的條件穩(wěn)定、重現(xiàn)性好。見(jiàn)表4。

表4 重復(fù)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

3.1 以槲皮素和山奈酚的總含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果，確定錢草硝石顆粒最佳提取工藝為:加水量第一次為12倍，第二次和第三次分別為10倍，煎煮3次，每次1h。

3.2 從錢草硝石顆粒劑的處方組成來(lái)看，植物藥材金錢草中含有槲皮素、山奈酚［2－3］;從石韋葉中亦可分離得到山奈酚、槲皮素［4］。故以槲皮素和山奈酚總含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)是合理的。

3.3 根據(jù)處方中各藥味所含有效成分的理化性質(zhì)及臨床應(yīng)用等特點(diǎn)，對(duì)金錢草、瞿麥、石韋、車前子、冬葵子選用水煎煮提取，濃縮干燥后與其余四味藥合并制成顆粒。

［1］李均展，李剛.尿石病證治舉隅［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2009，37(6):78－80.

［2］沈聯(lián)德，姚福潤(rùn).金錢草化學(xué)成分的研究［J］.華西藥學(xué)雜志，1988，3(2):71 －75.

［3］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［S］.一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:152.

［4］宋立人.現(xiàn)代中藥學(xué)大辭典［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2001:552.