吳茱萸化學(xué)拆分組分的性味藥理學(xué)評價——化學(xué)拆分組分抗炎作用的研究

楊志欣，孟永海，楊炳友，王秋紅，匡海學(xué)

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)北藥基礎(chǔ)與應(yīng)用研究省部共建教育部重點實驗室、黑龍江省中藥及天然藥物藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究重點實驗室，黑龍江 哈爾濱 150040)

中藥性味理論指導(dǎo)中醫(yī)臨床用藥幾千年，其成果極為豐厚。然而，由于其理論自身哲學(xué)氣息濃厚，內(nèi)容缺乏客觀、規(guī)范化的評價體系，導(dǎo)致性味理論對現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)的指導(dǎo)意義呈下降趨勢。因此，如何使深刻而豐富的性味理論得到科學(xué)的詮釋是我們面臨的迫切任務(wù)。遵循中醫(yī)藥學(xué)基本理論，本課題組提出了“中藥一味一性，一藥X味Y性(Y≤X)”的假說和基于中藥性味可拆分性和可組合性的研究思路，并構(gòu)建了中藥性味理論研究的新模式［1，2］。吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸［Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth］.、石虎［Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var.officinaLis(Dode)Huang］或疏毛吳茱萸［Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var.bodinieri(Dode)Huang］的干燥近成熟果實。2010版《中國藥典》收載，吳茱萸:辛、苦，熱。為闡明吳茱萸辛味和苦味的物質(zhì)基礎(chǔ)，我們采用與吳茱萸性味功效相關(guān)的抗炎、鎮(zhèn)痛、抗胃潰瘍、止嘔、止瀉等復(fù)合藥理學(xué)指標作為吳茱萸性味功效評價體系，對吳茱萸的各化學(xué)拆分組分的生物學(xué)效應(yīng)進行了研究。本文報道吳茱萸化學(xué)拆分組分的抗炎作用結(jié)果。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

昆明種小白鼠，雌雄各半，體質(zhì)量(20±2)g，合格證號為P00102007號，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全性評價中心提供;Wistar大白鼠，雌雄各半，體質(zhì)量(180±10)g，合格證號為P00102007號，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全性評價中心提供。

1.2 藥品與試劑

吳茱萸購自哈爾濱市藥材公司(產(chǎn)地:貴州銅仁)，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥資源學(xué)教研室王振月教授鑒定為疏毛吳茱萸［Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var bodinieri(Dode)Huang］的干燥近成熟果實;藥理實驗樣品(蒸餾水;吳茱萸水煎液;7個化學(xué)拆分組分由實驗室制備［3］);Evans Blue，Scientific research special exporation06/2009。

2 方法

2.1 對小鼠耳腫脹的影響［4］

昆明種小鼠90只，雌雄各半，按體質(zhì)量隨機分為9組，每組10只，分別為蒸餾水空白對照組、吳茱萸水煎液組、吳茱萸內(nèi)酯組、生物堿1組、生物堿2組、醇沉組、20%乙醇洗脫組、95%乙醇洗脫組和揮發(fā)油組。各組禁食12h后灌胃給藥，按小鼠體重0.2mL/10g－1給藥。給藥每日1次，連續(xù)4天，末次給藥1h后，立即在小鼠左耳前后兩面涂抹二甲苯20μL，2h后，將小鼠脫頸椎處死，用手術(shù)剪齊耳根剪下左右兩耳片，用7mm直徑打孔器，分別在同一部位打下圓耳片，用電子天平分別稱兩耳片的重量，每只鼠的左耳片重量減去右耳片重量作為腫脹度，并按下列公式求出各給藥組的腫脹抑制率。

2.2 對大鼠足趾腫脹的影響［5］

Wistar大鼠90只，雌雄各半，按體質(zhì)量隨機分為9組，每組10只，分組同2.1。每日給藥1次，灌胃量2.0mL/100g－1，連續(xù)5天。實驗前在大鼠右后足踝關(guān)節(jié)處作標記，用足容積測定儀測定各鼠右后肢足容積兩次，取平均值作為正常足容積。給藥后30min，每只大鼠右后足跖部皮下進針至踝關(guān)節(jié)附近皮下注射10%新鮮雞蛋清溶液0.1mL致炎，分別于致炎后0.5h、1h、2h、4h、6h 測定致炎足容積，按下列公式計算各大鼠致炎前后右后腫脹率變化值。

2.3 對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響［5］

昆明種小鼠90只，雌雄各半，按體質(zhì)量隨機分為9組，每組10只。分組及給藥同2.1。每日給藥1次，連續(xù)4天，末次給藥30min后，小鼠均經(jīng)尾靜脈注射1%的伊文思藍溶液0.1mL/10g，隨即腹腔注射0.6%的醋酸溶液0.2mL/只，20min脫頸椎處死，剪開腹腔，用6mL生理鹽水洗滌腹腔，吸出洗滌液，3 000r/min離心15min，取上清液，于590nm測定各組動物腹腔洗滌液染料吸光度A值。

3 結(jié)果

3.1 對小鼠耳腫脹的影響

吳茱萸水煎液及各化學(xué)拆分組分對小鼠耳腫脹的作用結(jié)果見表1。

表1 吳茱萸及各化學(xué)拆分組分對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響(s，n=10)

表1 吳茱萸及各化學(xué)拆分組分對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響(s，n=10)

注:與空白對照組比較，*P＜0.05。

組別 劑量(g/kg)腫脹度(mg)腫脹抑制率(%)－ 11.76 ±3.09吳茱萸水煎液組 1.95 8.49 ±2.46* 38.5揮發(fā)油組 1.95 9.24 ±3.06* 21.4吳茱萸內(nèi)酯組 1.95 10.94 ±2.97 7.0生物堿1 組 1.95 9.04 ±1.74* 23.1 95%乙醇洗脫組 1.95 10.45 ±3.25 11.1醇沉組 1.95 10.99 ±2.93 6.55生物堿2 組 1.95 10.27 ±2.10 12.8 20%乙醇洗脫組 1.95 9.23 ±2.85*空白對照組21.5

由表1可見，各組給藥后吳茱萸水煎液組對二甲苯所致小鼠耳腫脹的抗炎作用與空白對照組比較有顯著性差異(P＜0.01)，腫脹抑制率為38.5%。生物堿1組、20%乙醇洗脫組、揮發(fā)油組對小鼠耳腫脹的抗炎作用與空白對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)，抑制率分別為23.1%、21.5%及21.4%。

表2 吳茱萸及各化學(xué)拆分組分對大鼠足趾腫脹的影響(s，n=10)

表2 吳茱萸及各化學(xué)拆分組分對大鼠足趾腫脹的影響(s，n=10)

注:與空白對照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

空白對照組 0.974 ±0.139 44.6 ±11.9 46.4 ±10.1 43.0 ±12.1 4*

3.2 對大鼠足趾腫脹的影響

吳茱萸水煎液及各化學(xué)拆分組分對大鼠足趾腫脹的作用見表2。10%新鮮雞蛋清致炎的規(guī)律是0.5h就出現(xiàn)明顯的足腫，此后腫脹繼續(xù)加劇，1h達到最高值，2h后腫脹開始逐漸恢復(fù)。對大鼠足趾腫脹的抗炎作用，吳茱萸水煎液組與空白對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)，給藥后0.5h就有緩解炎癥的表現(xiàn)，但是與空白對照組比較作用不顯著(P＞0.05)，1h與空白對照組比較有顯著差異(P＜0.05)，該作用與空白對照組比較一直持續(xù)到6h(P＜0.01)。吳茱萸生物堿1組及20%乙醇洗脫組與空白對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)。其余各化學(xué)拆分組與空白對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。

3.3 對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響

吳茱萸水煎液組及各拆分組分對小鼠腹腔毛細血管通透性的抗炎作用結(jié)果見表3。可見，吳茱萸水煎液組、生物堿1組和20%乙醇洗脫組的抗炎作用與空白對照組比較有顯著性差異(P＜0.05);其余各組與空白對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。

表3 吳茱萸及各化學(xué)拆分組分對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響(s，n=10)

表3 吳茱萸及各化學(xué)拆分組分對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響(s，n=10)

注:與空白對照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

空白對照組 0.753±0.160 95%乙醇洗脫組0.687 ±0.114吳茱萸水煎液組 0.380 ±0.125＊＊醇沉組 0.682 ±0.161揮發(fā)油組 0.709±0.201 生物堿2組 0.628±0.212吳茱萸內(nèi)酯組 0.665±0.095 20%乙醇洗脫組 0.408±0.103＊＊生物堿1組 0.559 ±0.152*

4 討論

吳茱萸生物堿1組、20%乙醇洗脫組對三種炎癥模型均顯示較強的抗炎作用，此外揮發(fā)油組對小鼠耳腫脹模型也顯示抗炎作用，故吳茱萸抗炎物質(zhì)基礎(chǔ)為生物堿1組分、20%乙醇洗脫組分、揮發(fā)油組分。

［1］匡海學(xué)，程偉.中藥性味的可拆分、可組合性研究［J］.世界科學(xué)技術(shù) －中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2009，11(6):768－771.

［2］匡海學(xué)，王艷宏，王秋紅，等.基于中藥性味可拆分性和可組合性的中藥性味理論研究新模式［J］.世界科學(xué)技術(shù)－中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2010，12(6):1 －5.

［3］楊志欣，孟永海，王秋紅，等.吳茱萸化學(xué)拆分組分的性味藥理學(xué)評價－化學(xué)拆分組分的制備及其鎮(zhèn)痛作用的研究［J］.中醫(yī)藥學(xué)報，2011，39(4):11 －14.

［4］李宗鐸，趙君枚，李建生，等.毒素清顆粒抗炎作用的實驗研究［J］.中國中醫(yī)藥科技，2006，13(1):42.

［5］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［J］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1993:305，308.