凋亡基因蛋白Bcl-2、Bax，p53在子宮內(nèi)膜異位癥組織中的表達(dá)及相關(guān)研究

丁 麗 王艷萍 李彩慧

（日照市人民醫(yī)院婦科，山東 日照 276800）

子宮內(nèi)膜異位癥（endometiosis，EMS）是一種具有惡性行為的良性疾病，在育齡婦女中的發(fā)病率為10%～15%，近幾年具有上升趨勢(shì)。占普通婦科手術(shù)的30%以上，內(nèi)異癥所引起的痛經(jīng)，下腹痛等嚴(yán)重地影響婦女的健康和生活質(zhì)量，也是不孕癥的主要原因之一[1]。有研究表明，子宮內(nèi)膜中存在凋亡并受一些凋亡調(diào)節(jié)因子的調(diào)控[2]。正常子宮內(nèi)膜呈周期性增生和脫落，是通過調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜細(xì)胞增生與凋亡等方式實(shí)現(xiàn)的。越來越多的證據(jù)證實(shí)凋亡是子宮內(nèi)膜細(xì)胞保持穩(wěn)定的關(guān)鍵因素。本文通過應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)凋亡調(diào)節(jié)因子Bcl-2、Bax及p53在子宮內(nèi)膜異位癥患者子宮在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)，探討細(xì)胞凋亡機(jī)制在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生發(fā)展中的作用，為探討子宮內(nèi)膜異位癥的病因及臨床治療提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2008年1月至2010年12月期間日照市人民醫(yī)院確診受控子宮內(nèi)膜異位癥患者并手術(shù)治療者60例，年齡在30～55歲，平均為42歲，取盆腔異位內(nèi)膜組織并刮取在位內(nèi)膜分別60例。另取經(jīng)期非子宮內(nèi)膜異位癥（并排除其他婦科疾病）的正常人刮取內(nèi)膜組織 40例為對(duì)照組（自愿），年齡30～55歲，平均為40歲。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑

Bcl-2、Bax并克隆抗體、p53并克隆抗體，及SP試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.2.2 免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)

標(biāo)本均常規(guī)固定，包埋，過濾切片3張，分別作Bcl-2、Bax，p53免疫組織化學(xué)染色。Bcl-2陽性反應(yīng)物為棕褐色顆粒，分布于細(xì)胞膜和（或）細(xì)胞質(zhì)。Bax陽性反應(yīng)物為桔黃色顆粒，分布于細(xì)胞核（或）細(xì)胞質(zhì)。p53陽性反應(yīng)物為棕黃色顆粒，分布于細(xì)胞核。

1.2.3 結(jié)果判定

根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度和染色細(xì)胞所占面積的得分之和進(jìn)行評(píng)估：①染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)；②不著色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分；染色細(xì)胞占整張面積評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)；無陽性細(xì)胞染色為0分，≤25%為1分，26%～50%為2分，＞50%為3分；③各種評(píng)分相加，0～1分為（-），2分為弱陽性（+），3～4分為陽性（++），5～6分為強(qiáng)陽性（+++）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件，秩和檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 Bcl-2在異位內(nèi)膜組表達(dá)強(qiáng)于在位內(nèi)膜及對(duì)照組（P值均＜0.05），Bax在異位內(nèi)膜組的染色強(qiáng)度低于在位內(nèi)膜組和對(duì)照組，有顯著性差異（P值均＜0.05）。見表1。

表1 Bcl-1、Bax在不同內(nèi)膜組的表達(dá)

2.2 p53在正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜中均呈陰性表達(dá)。在子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜中的陽性表達(dá)率為20%，有顯著性差異（P＜0.05）。見表2。

表2 p53在不同內(nèi)膜組的表達(dá)

3 討 論

細(xì)胞凋亡是指有核細(xì)胞在一定條件下，通過啟動(dòng)內(nèi)部機(jī)制，經(jīng)過一連串的細(xì)胞變性，最終發(fā)生死亡的過程。它在有機(jī)體的發(fā)育、生殖、老化、免疫等生理過程中，病毒感染、增殖性疾病、腫瘤發(fā)生等病理過程中都起到十分重要的作用，對(duì)維持個(gè)體組織器官的正常形態(tài)和功能有重要意義[3]。

Bcl-2為凋亡抑制基因，Bax為促凋亡基因。Bcl-2與Bax比例決定細(xì)胞對(duì)某一凋亡刺激的敏感性。Bcl-2是目前發(fā)現(xiàn)的與凋亡關(guān)系密切的基因之一。多出現(xiàn)在壽命長(zhǎng)的干細(xì)胞群里，如子宮內(nèi)膜、結(jié)腸、皮膚、和前列腺等[4]。John等通過培養(yǎng)神經(jīng)元有絲分裂狀況也證實(shí)了Bcl-2在不引起細(xì)胞增殖的情況下，可以抑制細(xì)胞凋亡。Bax 的主要作用是加速細(xì)胞死亡，并與Bcl-2一起調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡，子宮內(nèi)膜的周期性增生與脫落是通過細(xì)胞增殖和凋亡的形式來實(shí)現(xiàn)的[5]。

此外，Bcl-2/Bax 異二聚體的比值越低凋亡越明顯。本研究結(jié)果顯示，Bcl-2表達(dá)在異位內(nèi)膜中最強(qiáng)，在正常內(nèi)膜中最弱。Bax蛋白表達(dá)在異位內(nèi)膜中最弱，正常內(nèi)膜中最強(qiáng)。正常內(nèi)膜中大量凋亡細(xì)胞的存在，使得正常月經(jīng)期脫落的內(nèi)膜細(xì)胞不再具有增殖分化的能力。在EMS異位內(nèi)膜組Bcl-2表達(dá)增強(qiáng)，Bax表達(dá)減少，Bcl-2/Bax比值大于對(duì)照組。由此我們可以推測(cè)EMS異位內(nèi)膜的抗凋亡性大大增強(qiáng)，使得月經(jīng)期逆流至腹腔的子宮內(nèi)膜的活性增高而具有繼續(xù)生長(zhǎng)的潛能。有利于子宮異位內(nèi)膜細(xì)胞的種植、侵襲和發(fā)展。這也是本研究結(jié)果的重要意義。

腫瘤抑制因子p53蛋白是人體內(nèi)一個(gè)關(guān)鍵的細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)因子，Gylfason等[6]研究結(jié)果提示，體細(xì)胞p53基因隨機(jī)改變?cè)诎l(fā)生重度子宮內(nèi)膜異位癥中起一定作用。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)p53在異位子宮內(nèi)膜的陽性表達(dá)，顯著高于在位子宮內(nèi)膜及正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)。再次證明了異位的子宮內(nèi)膜組織存在凋亡抑制，細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制發(fā)生了改變，從而使其存活種植，過度增生，促進(jìn)了內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展。

通過以上研究，我們得出子宮內(nèi)膜異位癥中異位的子宮內(nèi)膜組織抗凋亡性較內(nèi)異癥的在位內(nèi)膜及正常子宮內(nèi)膜明顯增強(qiáng)的結(jié)論。為探討子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展機(jī)理及臨床治療提供理論依據(jù)。如果能用藥物抑制異位內(nèi)膜增殖，誘導(dǎo)其凋亡，可能對(duì)EMS保守治療起積極作用。

[1]朗景和.子宮內(nèi)膜異位癥的研究與設(shè)想[J].中華婦產(chǎn)科雜志,2003,38(8):478-480.

[2]任云青.子宮內(nèi)膜異位癥與細(xì)胞凋亡[J].醫(yī)學(xué)綜述,2005,11(8):689-691.

[3]Biscotti CV,Hart WR.Apoptotic bodies: a consistent morphologic feature of endocervical adenocarcinoma in situ [J].Am J Surg Pathol,2008,22(3):434-439.

[4]Watanbe H,Kanzaki H,Narukawa S,et al.Bcl-2 and Fas expression in eutopic and ectopic human endometrium during the menstrual cycle in relation to endometrial cell apoptosis[J].Am J Obstet Gynecol,1997,176(2):360-368.

[5]王云霞.李亞里.細(xì)胞凋亡與子宮內(nèi)膜異位癥[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2000,25(6):161-163.

[6]GyHason JT,Dang D,Petursdottir V,et al.Quantitative DNA perturbations of p53 in endometriosis : analysis of American and Icelandic cases [J].Fertil Steril,2005,84(5):1388-1394.