關于聯合免疫法和化學法檢測糞便隱血的臨床應用研究

陳偉紅

（江蘇省昆山市錦溪人民醫院檢驗科，江蘇 昆山 215324）

糞便隱血試驗是診斷各種原因引起的消化道出血和篩選胃腸道惡性腫瘤的重要手段。目前，臨床上應用的糞便隱血檢測的方法不外乎兩大類：化學法和免疫法。過去一直沿用化學法檢測糞便隱血，為了探討轉鐵蛋白（Tf）/血紅蛋白（Hb）聯合免疫法在臨床應用中的價值，我們隨機選取昆山市錦溪人民醫院確診消化道出血患者112例的糞便標本進行了檢測。

1 材料與方法

1.1 試劑

便隱血免疫雙聯法檢測試劑盒由萬華普曼生物工程有限公司提供；化學法檢測試劑盒由珠海貝索生物技術有限公司提供。

1.2 方法

同時用上述2種方法進行檢測，并計算其相應的特異性、敏感性、陰性預測值和陽性預測值。

1.3 標本來源

在昆山市錦溪人民醫院就診經內鏡確診消化道出血患者112例糞便標本，其中73例為上消化道出血病例，39例為下消化道出血病例，陰性對照為65名為昆山市錦溪人民醫院門診的健康體檢者。

1.4 結果判斷

2種檢測方法均按說明書要求在規定時間內觀察結果。化學法按反應顏色深淺判斷陽性結果。聯合免疫法2條反應線分別代表Tf和Hb，任何1條出現陽性，結果判為陽性。

1.5 線性范圍檢測

將已知Hb濃度的人抗凝全血用生理鹽水稀釋成濃度為5000、2500、500、100、20、1.0、0.5、0.1μg/mL的紅細胞（RBC）懸液，再用2種方法分別進行檢測。

1.6 統計學處理

采用Excel 2003計算2種方法的特異性、敏感性、陰性預測值和陽性預測值。

2 結 果

2.1 聯合免疫法和化學法檢測患者標本結果比較，結果見表1。

表1 聯合免疫法、化學法檢測糞便隱血

2.2 聯合免疫法和化學法特異性、敏感性、陰性預測值和陽性預測值比較，結果見表2。

表2 聯合免疫法和化學法特異性、敏感性、陰性預測值和陽性預測值（%）

2.3 聯合免疫法和化學法線性檢測結果見表3。

表3 聯合免疫法和化學法線性范圍檢測

3 討 論

糞便隱血試驗是各級醫院對消化道出血的診斷及鑒別診斷有重要價值，同時也是消化道惡性腫瘤普查的一個篩選指標[1]。目前在糞便隱血的實驗室檢查中，化學法是目前主要采用的方法，比較常用的有鄰甲苯胺法、還原酚酞法、匹拉米洞法等。其原理基本相同，都是基于Hb中的亞鐵血紅素有類似過氧化酶活性，能催化H2O2作為電子受體使色原氧化呈色，呈色的深淺與Hb含量呈正比。但干擾因素多，易受飲食（肉類、蔬菜、藥物、鐵劑等）的影響[2]。而免疫法應用較早的是免疫學檢測Hb法，該方法利用抗人Hb的單克隆抗體進行隱血檢測，特異地與糞便中人Hb結合，再利用膠體金標記的抗人血紅蛋白抗體顯色測定，其特異性較強，靈敏度較高，被廣泛應用于臨床，已被世界衛生組織（WHO）和世界胃腸鏡檢查協會（OMED）作為糞便隱血試驗的一種較為確認的方法[3]。但是也有研究表明上消化道出血Hb法陽性率較低，是因為Hb在消化道中消化酶及細菌充分分解后不再具有原來的免疫原性，而且出血量過多時因血紅蛋白（抗原）濃度過高造成前帶現象以及患者血紅蛋白的抗原與單克隆抗體不匹配，均可導致假陰性[4]。國外學者對Hb以外的血液成分如Tf、結合血紅素、纖維蛋白原等作為出血示蹤進行了深入研究，結果發現Tf具有消化道出血的特異性和在對抗細菌分解的穩定性，在檢測Hb的同時檢測Tf就能減少假陰性反應的出現，提高臨床診斷準確率[5]。從表1中可以看出，Hb法在檢測下消化道出血時確實不及Tf法，而化學法與臨床診符合率更低，甚至低于2種免疫法單獨所得結果，這與相關報道[6]也較一致。表2中聯合免疫法特異性、敏感性、陰性預測值和陽性預測值與臨床診斷符合率均明顯高于化學法，其特異性和陽性預測值更是達到98.5%和99.1%，是由于該法按照Tf和Hb兩種方法來判斷，已知遺傳性無轉鐵蛋白血癥、各種惡性疾病、炎癥為主的多種疾病均可導致轉鐵蛋白低下，所以與血紅蛋白同時檢測可起到優勢互補的作用[7]。從表3中我們還可以發現，Hb檢測法檢測線性下限為0.5μg/mL左右，由于血液中Hb的含量高于Tf所以此檢測閾值下限也代表了雙聯法的最小檢出限，微量病理性出血就可以檢測出。而化學法在20μg/mL以下已無法檢出，消化道微量出血有可能發生漏檢。聯合免疫法可測出樣本中的微量Hb（0.5μg/mL），Tf法在Hb濃度為5000μg/mL仍可呈現陽性[8]。需要注意的是，在糞便形成過程中，少量的消化道出血不一定與之混合均勻，且消化道出血具有間斷性。因此，欲提高陽性率，必須遵照操作規程連續3d采集標本，要告知患者多部位取便，實驗室檢驗人員對標本要多點采樣進行檢測。

綜上所述，聯合免疫法既可消除化學法的假陽性問題，又可避免因抗原過量產生前帶反應和Hb被消化而出現的假陰性問題，有效提高消化道出血的檢出率，是消化道出血性疾病輔助診斷的可靠依據，值得廣泛推廣應用于臨床。

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