補(bǔ)康靈對(duì)Lewis肺癌小鼠癌性惡病質(zhì)的改善作用研究Δ

倪美鑫，張錦林，王慶華，朱順星（.南通大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，南通市 6003；.南通大學(xué)，南通市6003）

癌癥惡病質(zhì)（Cancer cachexia）是惡性腫瘤患者晚期常見的臨床綜合征之一，它嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，是導(dǎo)致患者死亡的重要原因[1]。尋找能夠改善癌性惡病質(zhì)狀態(tài)，且毒性較低的藥物成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的重要課題。補(bǔ)康靈是南通大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院的特色制劑（批準(zhǔn)文號(hào)：蘇藥制字Z04000438），本研究觀察補(bǔ)康靈對(duì)Lewis肺癌小鼠癌性惡病質(zhì)的治療作用，并檢測(cè)分析與癌性惡病質(zhì)發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的血清細(xì)胞因子，探討補(bǔ)康靈改善癌性惡病質(zhì)的作用機(jī)制。

1 儀器與材料

1.1 儀器

COULTER EPICS XL型流式細(xì)胞分析儀（美國(guó)貝克曼庫爾特有限公司）；JY1002型電子天平（上海方瑞儀器有限公司）。

1.2 試藥

補(bǔ)康靈（南通大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院制劑室，批號(hào)：2009021001）；醋酸甲地孕酮（MPA，青島格瑞藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20091011）；腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素（IL）-1、IL-6 ELISA試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 動(dòng)物和細(xì)胞株

健康C57BL/6小鼠50只，♀♂兼半，體重（20±2）g，由南通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（蘇）2007-0021）。Lewis肺癌細(xì)胞株由中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所提供。

2 方法

2.1 癌性惡病質(zhì)動(dòng)物模型制備

[2]復(fù)制Lewis肺癌小鼠胸膜轉(zhuǎn)移惡病質(zhì)模型的方法，將Lewis肺癌細(xì)胞培養(yǎng)傳代后，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為1×107個(gè)·mL-1，在小鼠腋后線第6肋間胸膜腔，每只接種0.2 mL細(xì)胞懸液，胸腔成瘤率為100%，小鼠于第5天均逐漸出現(xiàn)惡病質(zhì)。

2.2 分組和給藥

將50只小鼠隨機(jī)分成5組，即空白對(duì)照（NC，等量蒸餾水）、癌性惡病質(zhì)（CC，等量蒸餾水）、MPA（0.12 g·kg-1）和補(bǔ)康靈高、低劑量（BKL-H、BKL-L，18、9 g·kg-1）組。模型復(fù)制第5天，ig給藥，每天1次，連續(xù)10 d。

2.3 觀察指標(biāo)

2.3.1 體重 每日上午8：00-10：00用電子稱測(cè)量每只小鼠的體重，精確到0.1 g。

2.3.2 攝食量及飲水量 每組小鼠同籠喂養(yǎng)，提供同一飼料和自來水，每日上午8：00-10：00記錄每組小鼠攝食總量和飲水總量。攝食總量＝前一天飼料量－次日測(cè)得飼料量，飲水總量＝前一天飲水量－次日測(cè)得飲水量。

2.3.3 小鼠生存時(shí)間 模型復(fù)制成功后，隨機(jī)抽取其中3只，分別記錄其生存時(shí)間。

2.3.4 標(biāo)本采集與檢測(cè) ig給藥結(jié)束后，小鼠眼球靜脈采血，血液標(biāo)本置于肝素化Eppendorf（EP）管內(nèi)，2 000 r·min-1離心15 min，將上清分裝，檢測(cè)TNF-α、IL-1和IL-6，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行測(cè)定。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 補(bǔ)康靈對(duì)惡病質(zhì)小鼠的生存狀況的影響

3.1.1 體重變化 種荷瘤第5天，與NC組比較，CC組小鼠體重顯著下降（P＜0.05）。與CC組比較，BLK-H組在第10天體重顯著增加（P＜0.05），第15天BLK-H、BLK-L組小鼠體重顯著增加（P＜0.01或P＜0.05）。小鼠體重變化見表1。

表1 小鼠體重變化（±s，g）Tab 1 Changes of body weight of mic（e±s，g）

表1 小鼠體重變化（±s，g）Tab 1 Changes of body weight of mic（e±s，g）

與NC組比較：＊P＜0.05；與CC組比較：#P＜0.05，##P＜0.01vs.NC group：＊P＜0.05；vs.CC group：#P＜0.05，##P＜0.01

組別NC組CC組BKL-L組BKL-H組MPA組第1天19.20±0.75 19.12±0.51 19.22±0.58 19.09±0.47 19.24±0.63第5天21.43±1.02 19.62±0.98＊19.71±0.83 19.57±1.11 20.35±0.65第10天22.76±0.85 18.26±0.80＊19.07±0.98 20.21±1.27#21.20±0.91#第15天23.62±0.79 16.16±1.02＊17.49±1.16#18.23±1.05##18.67±0.81##

3.1.2 攝食量和飲水量 種荷瘤第5天，與NC組比較，CC組攝食量和飲水量顯著下降（P＜0.05）。BKL-H、BKL-L組攝食量和飲水量較同期CC組均有顯著改善（P＜0.01或P＜0.05）。小鼠攝食量變化見表2；小鼠飲水量變化見表3。

3.1.3 小鼠生存時(shí)間 CC組（16.78±1.05）d，BKL-L組（17.45±1.20）d，BKL-H 組（18.07±1.03）d，MPA組（18.13±1.07）d，NC組長(zhǎng)期存活。與CC組比較，H-BKL組、MPA組小鼠生存時(shí)間顯著延長(zhǎng)（P＜0.05）。

表2 小鼠攝食量變化（±s，g）Tab 2 Changes of food intake of mice（±s，g）

表2 小鼠攝食量變化（±s，g）Tab 2 Changes of food intake of mice（±s，g）

與NC組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與CC組比較：#P＜0.05，##P＜0.01vs.NC group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.CC group：#P＜0.05，##P＜0.01

組別NC組CC組BKL-L組BKL-H組MPA組第1天4.68±0.72 4.91±0.36 4.88±0.29 4.85±0.38 4.69±0.25第5天4.71±0.33 3.26±0.29＊3.39±0.42 3.28±0.31 3.44±0.46第10天4.47±0.24 1.92±0.41＊＊2.45±0.39#2.73±0.28#2.88±0.37#第15天4.59±0.35 1.59±0.26＊＊2.16±0.51#2.77±0.44##2.83±0.30##

表3 小鼠飲水量變化（±s，mL）Tab 3 Changes of water intake of mice（±s，mL）

表3 小鼠飲水量變化（±s，mL）Tab 3 Changes of water intake of mice（±s，mL）

與NC組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與CC組比較：#P＜0.05，##P＜0.01vs.NC group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.CC group：#P＜0.05，##P＜0.01

組別NC組CC組BKL-L組BKL-H組MPA組第1天3.51±0.29 3.40±0.31 3.47±0.32 3.44±0.22 3.39±0.27第5天3.60±0.24 2.33±0.35＊2.38±0.30 2.31±0.28 2.26±0.19第10天3.47±0.30 1.41±0.37＊＊2.55±0.43#2.63±0.41#2.87±0.29#第15天3.55±0.41 1.39±0.33＊＊2.31±0.39#2.57±0.46##2.69±0.38##

3.2 惡病質(zhì)小鼠血清細(xì)胞因子的測(cè)定

小鼠種荷瘤后IL-1、IL-6及TNF-α較NC組均有不同程度升高（P＜0.05）。與CC組比較，BKL-H、BKL-L組水平較同期CC組顯著下降（P＜0.05）。小鼠血清細(xì)胞因子測(cè)定結(jié)果見表4。

表4 小鼠血清細(xì)胞因子測(cè)定結(jié)果（±s，pg·mL-1）Tab 4 The determination of serum cytokines in mic（e±s，pg·mL-1）

表4 小鼠血清細(xì)胞因子測(cè)定結(jié)果（±s，pg·mL-1）Tab 4 The determination of serum cytokines in mic（e±s，pg·mL-1）

與NC組比較：＊P＜0.05；與CC組比較：#P＜0.05vs.NC group：＊P＜0.05；vs.CC group：#P＜0.05

組別NC組CC組BKL-L組BKL-H組MPA組IL-1 14.58±3.92 31.87±7.23＊25.39±7.46#21.97±6.33#20.63±5.15#IL-6 59.71±15.72 116.23±20.19＊101.35±23.59 92.36±21.45#90.89±22.82#TNF-α 73.42±11.37 98.51±10.82＊90.47±11.76 85.66±12.34#84.39±11.50#

4 討論

癌癥惡病質(zhì)的治療一直是臨床上的難題，且抗腫瘤治療（如化療、放療等）會(huì)加重惡病質(zhì)的發(fā)生、發(fā)展，使治療方案難以正常實(shí)施，甚至導(dǎo)致患者死亡。雖然支持治療取得了一定效果，但是由于其發(fā)生機(jī)制復(fù)雜，多數(shù)患者治療并不滿意[3]。

中醫(yī)認(rèn)為癌癥惡病質(zhì)屬于“虛勞”的范疇，臟腑功能障礙及納差、消瘦等癥狀乃是由于患者久病不愈，氣血陰陽不足，臟腑功能衰竭，脾失運(yùn)化，肌膚失于濡養(yǎng)所致[4]。因此，研究晚期腫瘤惡病質(zhì)的中醫(yī)藥治療有重要意義。根據(jù)腫瘤惡病質(zhì)的中醫(yī)基本病理變化，結(jié)合現(xiàn)代研究成果，補(bǔ)康靈以黨參、黃芪、茯苓、白術(shù)、當(dāng)歸、熟地、枸杞子等18味中藥組方。方中黃芪、黨參善補(bǔ)脾肺之氣，茯苓、白術(shù)善養(yǎng)脾腎之陰，配伍應(yīng)用有益氣養(yǎng)陰之功，當(dāng)歸、丹參為補(bǔ)血活血要藥，全方重在補(bǔ)氣養(yǎng)血、滋陰益腎，共奏健脾益腎、補(bǔ)氣養(yǎng)血之功效。研究該藥物對(duì)晚期Lewis肺癌惡病質(zhì)小鼠的治療作用，并初步探討其可能機(jī)制，可為中醫(yī)藥提高晚期肺癌患者生活質(zhì)量提供依據(jù)，尋找具有中國(guó)特色的治療模式。

本研究發(fā)現(xiàn)，荷瘤小鼠體重均出現(xiàn)不同程度的下降、攝食減少等惡病質(zhì)狀態(tài)，病程中除NC組外，其余各組小鼠均出現(xiàn)活動(dòng)減少、睡眠時(shí)間縮短及部分小鼠有毛發(fā)脫落，經(jīng)ig給藥后BLK組、MPA組在第10天體重?zé)o明顯下降，第15天治療組體重顯著高于CC組。目前研究顯示，部分致炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、干擾素-γ（IFN-γ）等參與了惡病質(zhì)的發(fā)生、發(fā)展過程，在一些惡液質(zhì)模型當(dāng)中IL-1、IL-6、TNF-α與惡液質(zhì)的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[5～7]。本研究結(jié)果表明，荷瘤小鼠血清中IL-1、IL-6、TNF-α顯著高于NC組，BKL組和MPA組指標(biāo)顯著低于CC組（P＜0.05），說明補(bǔ)康靈在一定的程度上可以改善小鼠癌性惡病質(zhì)狀態(tài)，其機(jī)制可能與其降低小鼠血清中TNF-α、IL-1、IL-6水平有關(guān)，但確切機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1] Finley.Management of cancer cachexia[J].AACN Clin Issues，2000，11（4）：590.

[2] 杜秀平，韓正祥，高向陽，等.小鼠Lewis肺癌胸腔與皮下移植模型的比較研究[J].中華腫瘤防治雜志，2007，14（23）：1 783.

[3] 邱正國(guó)，陳思曾.癌癥惡病質(zhì)的綜合性治療進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2009，15（3）：359.

[4] 高 軍，王貝貝.癌癥惡病質(zhì)中醫(yī)研究現(xiàn)狀[J].廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，13（3）：61.

[5] Esper DH，Harb WA.The cancer cachexia syndrome：a review of metabolic and clinical manifestations[J].Nutr Clin Pract，2005，20（4）：369.

[6] 王海燕，趙雪花，何麗婭.黃連素抗癌作用的分子機(jī)制[J].中國(guó)藥房，2007，18（3）：221.

[7] 周開國(guó)，何桂珍.腫瘤惡病質(zhì)的機(jī)制及可能的治療基礎(chǔ)[J].醫(yī)學(xué)與臨床，2011，31（1）：106.