蔗糖鐵注射液鐵含量測定方法的研究

李 莉，汪一帆，花傳政

南京醫科大學第二附屬醫院，南京 210011

蔗糖鐵注射液[1]是一種靜脈鐵注射劑，用來提高非血紅素鐵利用度以治療缺鐵性貧血。由于其安全性高，副作用少和可以精確計算的鐵補充劑量等優點，目前該產品已經成為缺鐵性貧血臨床治療最重要的靜脈鐵劑品種。

鐵是蔗糖鐵注射液中重要活性成分，本文對蔗糖鐵注射液鐵含量控制方法進行研究，對比了原子吸收法、氧化還原滴定法和絡合滴定法等鐵含量測定方法在蔗糖鐵注射液鐵含量測定中的優缺點[2-4]，選擇絡合滴定法作為蔗糖鐵注射液鐵含量分析方法并進行了全面的方法學驗證，結果證實該方法是蔗糖鐵注射液鐵含量較適的測定方法。

1 材 料

BP211D電子天平；島津AA-670原子吸收分光光度計；PB-10型pH計。

蔗糖鐵注射液，南京恒生制藥廠，批號:110101、110102、110103，規格:5 mL∶100 mgFe。

乙二胺四醋酸二鈉滴定液、硫代硫酸鈉滴定液（按照《中國藥典》2010年版二部附錄XⅤF進行標定）；高錳酸鉀試液、碘化鉀試液、淀粉指示液、過氧化氫、冰醋酸、Tiron試液、十二水硫酸鐵銨均市售。

2 方法和結果

2.1 原子吸收法

按照USP32-NF27 iron sucrose injection mono graph鐵含量測定方法進行測定。

2.2 氧化還原滴定法

用內容量移液管精密量取本品2 mL，置500 mL具塞錐形瓶中，用少量的水分次沖洗移液管，洗液并入錐形瓶，加30 mL水和2 mL硫酸，混勻，加熱至溶液微沸；放冷，滴加高錳酸鉀試液，至溶液恰顯粉紅色并持續5 s，加鹽酸30 mL與碘化鉀試液30 mL，密塞，靜置3 min，加水50 mL，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1 mol·L-1）滴定，至近終點時，加淀粉指示液2 mL，繼續滴定至藍色消失。每1 mL硫代硫酸鈉滴定液（0.1 mol·L-1）相當于 5.585 mg 的 Fe。

2.3 絡合滴定法

因本品分子結構中含有三價的鐵離子，能與乙二胺四醋酸二鈉發生絡合反應，隨著乙二胺四醋酸二鈉的不斷加入，被測金屬離子不斷減少，從而置換出與指示劑結合的金屬離子，最終通過溶液顏色發生突變，指示絡合滴定終點，從而測定樣品中的鐵含量，在此對最佳測試條件進行篩選。

2.3.1 蔗糖鐵復合物消解條件的考察 絡合滴定測試的第一步也應是消解蔗糖鐵復合物，使得鐵離子游離，而且消解過程中應不加熱，盡量避免溶液中蔗糖發生顯色變化，因此鹽酸用量的選擇就顯得比較重要。根據表1，鹽酸使用量超過8.0 mL時，在不加熱的情況下，蔗糖鐵已能完全消解，測試溶液呈透明的淡亮黃色，能夠滿足需要，實驗中選擇10.0 mL鹽酸加入量。

2.3.2 二價鐵/三價鐵完全轉化條件的考察 蔗糖鐵注射液中的鐵主要是三價鐵，但是由于蔗糖鐵復合物化學合成過程的高溫和強堿性反應條件，其中一部分會轉化成二價鐵；測試過程，加入的氧化劑是將二價鐵氧化成三價鐵，使之與絡合劑按照既定比例形成穩定的絡合物。此過程中加入過氧化氫的量直接影響二價鐵是否能夠完全轉變成三價鐵，是影響測試準確度的重要條件之一。根據表1顯示的實驗結果，過氧化氫用量不應少于0.6 mL，實驗中過氧化氫用量設定為1.0 mL。

表1 不同體積鹽酸和過氧化氫用量試驗結果

2.3.3 指示劑顯色靈敏條件考察 由表2可知，pH值在1.9～2.8之間，反應物易形成穩定的絡合物，指示劑指示終點顯色靈敏，本實驗溶液pH優選的范圍為2.2～2.5。同時，Tiron指示劑用量在2.0 mL以上（即2.5 mL）時，顏色變化明顯，易于判斷，結果穩定。

表2 不同pH值或指示劑用量時的試驗結果（批號:110101）

2.3.4 優化后的絡合滴定反應條件 用內容量移液管精密量取本品3 mL，置500 mL具塞錐形瓶中，用少量的水沖洗移液管，洗液并入錐形瓶，加鹽酸10 mL，振搖至溶液透明，呈淡黃色，加過氧化氫溶液1 mL，水100 mL和冰醋酸10 mL，振搖混勻，用氫氧化鈉溶液調節pH值至2.2～2.5，加Tiron指示液 [取4,5-二羥基苯-1,3-二磺酸鈉一水合物2.0 g，用水稀釋至100 mL]2.5 mL，用乙二胺四醋酸二鈉滴定液（0.05 mol·L-1）滴定至溶液顯純黃色。每1 mL乙二胺四醋酸二鈉滴定液 （0.05 mol·L-1）相當于2.7925 mg的 Fe。

2.3.5 絡合滴定法的分析方法學驗證

空白試驗:按照蔗糖鐵注射液的蔗糖含量配制相同濃度的蔗糖空白溶液，進行試驗。結果表明:樣品中其他成分不干擾樣品中鐵含量的測定。

離子干擾試驗:稱取氯化鈣適量，加入少量水溶解，按照空白溶液的配制方法配制樣品，進行試驗。實驗結果表明:鈣離子不干擾樣品中鐵含量測定。

精密度試驗:重復性（一人在一日內連續測定同一批號樣品6份，鐵含量平均值為98.6%，相對標準偏差RSD為0.07%）；中間精密度（不同日不同人按測試方法測定同一批號樣品各3份，鐵含量平均值為98.7%，相對標準偏差RSD為0.09%）。

準確度試驗:取已知鐵含量的蔗糖鐵注射液9份，分別加入十二水硫酸鐵銨，制成鐵含量分別為標示量80%、100%、120%的樣品溶液各3份，按測試方法進行測定，計算鐵加樣回收率，見表3。

2.3.6 三種方法測定鐵含量結果比較 見表4。

表3 鐵含量準確度試驗結果（批號:110101）

表4 三種方法測定鐵含量的結果比較

3 討 論

由表4可知:氧化還原滴定法測得的蔗糖鐵注射液鐵含量較原子吸收法測定值約高8%。我們初步分析原子吸收法雖為美國藥典給出的蔗糖鐵注射液鐵含量測定方法，但仍具有其自身缺點，如:該方法是一種微量的儀器分析方法，方法操作比較繁瑣，實驗過程可能引入的誤差較大，同時測試設備投資較大，測試成本較高。

氧化還原滴定測試中，有一些條件不易控制，比如:“加熱至溶液微沸”、“滴加高錳酸鉀試液，至溶液恰顯粉紅色并持續5 s”等；測試體系有一定的底色，近終點時，淀粉指示液與碘產生的藍色褪去不容易把握。這些都可能影響測定結果。而絡合滴定法測定蔗糖鐵注射液鐵含量，其終點顏色突變明顯，稍過量的乙二胺四乙酸二鈉滴定液就會使溶液的顏色由淺綠色變為純黃色，易于判斷，靈敏度高；同時在一定的酸性條件下，鐵離子與乙二胺四乙酸二鈉形成穩定的化合物，不易受其它離子的干擾；該方法專屬性、精密度、準確度均符合要求，是目前研究范圍內測定蔗糖鐵注射液鐵含量較經濟、快速、準確可靠的測定方法，能夠有效的控制產品的鐵含量，該方法已獲得國家食品藥品監督管理局批準[5]。

[1]FDA Drug Application Number:21-135.

[2]Kudasheva DS,Lai J,Ulman A，et al.Structure of carbohydrate-bound polynuclear iron oxyhydroxide nanoparticles in parenteralformulations [J].J Inorg Biochem,2004,98(11):1757-69.

[3]Geisser P,Baer M,Schaub E.Structure/histotoxicity relationship of parenteral iron preparations[J]. Arzneimittelforschung,1992,42(12):1439-52.

[4]Iron Sucrose Injection Monograph,USP32-NF27[M].P2690.

[5]蔗糖鐵注射液質量標準（YBH02012010）[S].