MMP1、Ⅲ型膠原在胎膜早破患者胎膜組織中表達(dá)的研究

賈曉慧

（鄭州人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 鄭州 450003）

研究顯示，胎膜早破（PROM）的發(fā)生與胎膜組織彈性降低有關(guān)，而維持胎膜組織彈性的主要物質(zhì)為膠原蛋白，膠原蛋白主要由基質(zhì)金屬蛋白酶降解。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究PROM患者胎膜組織中MMP1和Ⅲ型膠原的表達(dá)，分析其在PROM發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象與取材

選擇2010年7月至11月在鄭州人民醫(yī)院產(chǎn)科住院分娩的健康孕婦，年齡23～30周歲，孕周37～41周。所選對(duì)象均為足月單胎頭位。其中臨床診斷PROM患者30例，正常待產(chǎn)者20例，兩組研究對(duì)象均在臨產(chǎn)前以剖宮產(chǎn)終止妊娠，另外20例為自然分娩者。三組孕婦均在胎盤娩出5min內(nèi)取距胎膜破口5cm以上全層胎膜組織2cm×2cm，取下的組織在10%甲醛溶液中固定24h后，進(jìn)行石蠟包埋，制成2μm厚切片。部分切片按常規(guī)方法進(jìn)行HE染色，以明確組織學(xué)結(jié)構(gòu)。

1.2 免疫組化染色

MMP1和Ⅲ型膠原抗體及SP試劑盒購(gòu)自北京中杉公司，應(yīng)用SP二步法進(jìn)行免疫組化染色。切片常規(guī)脫蠟水化，新鮮配制3%H2O2阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，經(jīng)微波修復(fù)抗原后，正常山羊血清封閉，依次加一抗、二抗及鏈霉素-過(guò)氧化物酶，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，中性樹膠封片。用PBS液代替一抗、二抗作為陰性對(duì)照。

1.3 免疫組化結(jié)果圖像分析

每張免疫組化片上隨機(jī)選取5個(gè)不重疊的400倍視野，采用Biosens Digital Imaging System v1.6免疫組化定量分析軟件計(jì)算每一視野中免疫組化陽(yáng)性表達(dá)的積分光密度值，然后計(jì)算平均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 免疫組化陽(yáng)性表達(dá)比較

鏡下可見三組研究對(duì)象胎膜組織中均有MMP1和Ⅲ型膠原蛋白陽(yáng)性表達(dá)，MMP1陽(yáng)性細(xì)胞胞漿內(nèi)有棕黃色顆粒沉著，Ⅲ型膠原位于細(xì)胞外，呈棕黃色束狀或條索狀。在剖宮產(chǎn)組中，MMP1僅見表達(dá)于羊膜上皮細(xì)胞漿內(nèi)，而PROM組和自然分娩組中，在絨毛膜層內(nèi)也有較明顯表達(dá)。且PROM組和自然分娩組中MMP1陽(yáng)性表達(dá)明顯高于剖宮產(chǎn)組；Ⅲ型膠原蛋白主要位于絨毛膜的細(xì)胞外基質(zhì)中，PROM組和自然分娩組中陽(yáng)性表達(dá)明顯低于剖宮產(chǎn)組。

2.2 積分光密度分析

計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)測(cè)定結(jié)果顯示，PROM組和自然分娩組中MMP1表達(dá)量明顯高于剖宮產(chǎn)組（P＜0.01）；PROM組和自然分娩組中Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)量明顯低于剖宮產(chǎn)組（P＜0.01）（表1）。

表1 MMP1和Ⅲ型膠原蛋白在胎膜組織的表達(dá)（ ±s）

3 討 論

3.1 Ⅲ型膠原蛋白與PROM

胎膜由絨毛膜和羊膜組成，外層為絨毛膜，至妊娠晚期與羊膜緊密相貼，絨毛膜厚約0.04mm，源于中胚層組織，由內(nèi)至外為胚外中胚層細(xì)胞、滋養(yǎng)細(xì)胞和合體滋養(yǎng)細(xì)胞，其細(xì)胞外基質(zhì)含有Ⅲ型膠原，起維持絨毛膜彈性和張力的作用。胎膜內(nèi)層為羊膜，羊膜源于外胚層，外觀透明并有一定的彈性，在外力下有一定的延伸能力。羊膜細(xì)胞與細(xì)胞之間是以橋粒和相互交織的微絨毛相互連接，在羊膜之下是由Ⅳ型及Ⅴ型膠原組成的基底膜，而基底膜又附著于主要由Ⅰ型及Ⅲ型膠原、網(wǎng)狀纖維及纖維母細(xì)胞組成的細(xì)胞外基質(zhì)上。在細(xì)胞外基質(zhì)中，Ⅲ型膠原是主要成分，羊膜能保持一定的彈性和張力強(qiáng)度，Ⅲ型膠原起了重要作用。Pressman等[1]在有關(guān)PROM的研究中證實(shí)胎膜的彈性隨孕周的增長(zhǎng)而發(fā)生變化，妊娠20周時(shí)劇增，持續(xù)到39周時(shí)又驟降。關(guān)于羊膜Ⅲ型膠原的檢測(cè)結(jié)果顯示PROM組Ⅲ型膠原含量明顯減少[2]。Ⅲ型膠原的減少可能使胎膜的彈性和張力下降，可能是導(dǎo)致PROM的原因之一。本研究通過(guò)檢測(cè)胎膜組織中Ⅲ型膠原的表達(dá)也發(fā)現(xiàn)，PROM組及自然分娩組Ⅲ型膠原的表達(dá)顯著低于剖宮產(chǎn)組（P＜0.01），提示胎膜組織中Ⅲ型膠原的減少可能是導(dǎo)致胎膜組織彈性降低，從而引起PROM的重要原因，此結(jié)果與其他研究者的研究結(jié)果一致。

3.2 MMP1與PROM的關(guān)系

MMPs是一組結(jié)構(gòu)和功能相關(guān)的高度保守的鋅離子依賴性內(nèi)肽酶超家族，主要由結(jié)締組織、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等合成和分泌，在基質(zhì)的許多重要部位直接表達(dá)。它能影響局部組織中多種類型膠原蛋白的代謝功能，是細(xì)胞外基質(zhì)降解過(guò)程中的重要酶，在生理pH環(huán)境中即能達(dá)到其最高活性。MMPs在人胎膜組織中主要分布于羊膜上皮細(xì)胞、絨毛膜和蛻膜細(xì)胞中，但不同的MMPs隨著妊娠的進(jìn)展，其分布和含量存在一定差異。Maymon等[3]通過(guò)對(duì)353位孕婦羊水研究發(fā)現(xiàn)，間質(zhì)膠原酶（MMP-1、8）在整個(gè)妊娠期間羊水中持續(xù)存在并一直持續(xù)至產(chǎn)后，其含量隨著妊娠的進(jìn)展而逐漸升高，特別是在早產(chǎn)臨產(chǎn)、生理破膜、早產(chǎn)PROM和感染中顯著升高。本研究通過(guò)檢測(cè)胎膜組織中MMP-1的表達(dá)也發(fā)現(xiàn)，PROM組及自然分娩組MMP-1的表達(dá)顯著高于剖宮產(chǎn)組（P＜0.01），而MMP-1主要降解Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型膠原，提示胎膜組織中MMP-1表達(dá)量增多，加強(qiáng)了對(duì)胎膜基質(zhì)中Ⅲ型膠原的降解，使胎膜組織彈性降低，導(dǎo)致PROM發(fā)生。

[1]Pressman EK,Cavanaugh JL,Woods JR.Physical properties of chorioamnion throughout gestation[J].Am J Obstet Ggnecol,2002,187(5):672-675.

[2]單連峰,黃德生,張惠丹.胎膜早破母體血清微量元素及羊膜Ⅲ型膠原含量變化[J].數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志,2005,18(1):33-35.

[3]Maymon E,Romcro R,Pacora P,et al.Evidence for participation of interstutual collagenase(matrix metalloproteinase 1) in preterm prematurely rupture of the membranes[J].Am J Obstet Ggnecol,2000,183(1):94-99.