延胡索鮮品及炮制品的指紋圖譜研究分析

王 榮

（湖南省郴州市臨武縣人民醫院藥劑科，湖南 郴州 424300）

延胡索為罌粟科（Papaveraceae）紫堇屬植物的干燥塊莖，最早見于唐朝《本草拾遺》，有兩千多年的使用歷史，延胡索味辛性溫，有行氣、行血功效，是臨床治療血瘀氣滯、心腹及肢體疼痛的要藥[1]，為《止痛中藥》重點研究課題之一。

中藥指紋圖譜作為中藥現代化的重要手段，已經在中藥注射劑中正式實施，該方法通過對某種中藥或中藥制劑進行系統性的化學成分研究，并進行對應的藥效學研究，篩選出中藥的有效部位，再采用適當的分析手段對該中藥特征性的成分和有效性成分描繪在一張圖譜上，通過這張圖片可以較為全面的反映出該中藥或中藥制劑所含化學成分的種類和數量，達到識別中藥及中藥制劑真偽，辨認質量優劣，從而對其質量及療效進行判定。這種圖譜和人的指紋較為相似，故被形象的稱為指紋圖譜[2,3]。根據所研究的中藥有效成分的特性不同，指紋圖譜的研究方法及技術也有所不同，當前，中藥指紋圖譜絕大多數還是以色譜指紋圖譜的方式出現[3]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

烘箱、恒溫水浴鍋、日本島津HPLC系統。

1.2 試劑

甲醇、乙腈、冰醋酸、純化水、食用醋、黃酒。

1.3 對照品與藥材

延胡索乙素對照品；去氫紫堇堿對照品；原阿片堿對照品；鹽酸小檗堿對照品；巴馬汀對照品。四川、陜西、浙江產三種延胡索藥材。

2 方法及結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Micsphere-C18。流動相A為乙晴，B為0.01%冰醋酸溶液（三乙胺調pH至6.0），梯度洗脫。檢測波長：280nm；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；分析時間85min，進樣量：10μL。

2.2 炮制

將所購三種藥材進行炮制，分別得水煮品、醋制品和酒制品，共12個樣品。

2.3 對照液制備

精密稱取延胡索乙素對照品、去氫紫堇堿對照品、原阿片堿對照品、鹽酸小檗堿對照品、巴馬汀對照品制備五種對照品的混合對照液。

2.4 供試品溶液制備

分別精密稱取12個待測樣品延胡索細粉于250mL磨口圓底燒瓶中，按照如下步驟制樣：向磨口燒瓶中加入濃氨-甲醇溶液50.0mL，稱定重量，浸漬1h，加熱回流lh，放冷至室溫，再稱定重量，并用濃氨試液-甲醇溶液補足減失重量，震搖均勻，用快速濾紙過濾。吸取續濾液25.0mL，水浴揮干，用甲醇少量多次溶解浸膏并轉移至5mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，震搖，過濾，取續濾液，即得供試品溶液。按照選定的色譜條件進樣檢測。

2.5 采用國家藥典委員會制定的中藥色譜指紋圖譜相似度系統軟件，對測定的供試品HPLC色譜圖進行處理，得到供試品間色譜峰的相似度（0.912～0.992）及延胡索藥材HPLC指紋圖譜。

2.6 鮮延胡索和不同制品延胡索的指紋圖譜中，峰的數量和出峰時間相似度較高，但是鮮品和制品延胡索的峰面積有明顯的差異。結果見表1。

表1 不同延胡索五種主要有效成分含量均值

從表1可以看出，酒制延胡索五種有效成分的含量較其他制品延胡索和鮮品延胡索均較高。

3 討 論

延胡索在臨床用量較大，研究其質量控制標準，有助于規范延胡索的質量管理。指紋圖譜是今后中藥材及中藥制劑質量標準的發展方向[4-6]。我們采用高效液相色譜法對延胡索的有效成分組進行檢測，通過對12各樣品的分析檢測，確定了色譜條件（檢測波長、流動相、流動相流速）及對照物質。本組資料采用二級管陣列檢測器，在檢測樣品時，我們對樣品進行了200～600nm波長之間的紫外連續掃描，得到了三維光譜圖[7,8]。分析光譜圖，以280nm掃描的色譜峰峰形為佳、各色譜峰間分離度較好、出峰數量和延胡索的主要有效成分一致，因此，我們將280nm確定為延胡索樣品的檢測波長。延胡索中含有的有效成分主要為多種生物堿，因此在流動相中適當加一些堿性物質可以防止延胡索生物堿的解離而影響有效成分含量的正確檢出。我們采用過多種堿性物質，如磷酸鹽緩沖溶液、醋酸鹽緩沖溶液，采用他們做流動相，均獲得了良好的分離效果，然磷酸鹽類屬難揮發物質類，醋酸鹽則為有機物，具有一定的揮發性，對色譜的損傷小于磷酸鹽類物質，因此我們選擇了醋酸加三乙胺調節pH 6.0，形成醋酸銨-醋酸緩沖液。我們還對流動相的洗脫方式進行了比較，分別采用等度洗脫和梯度洗脫，結果表明，梯度洗脫程序條件更易控制，且溶劑對指紋圖譜無干擾，樣品的保留時間亦具有良好的重現性好，獲得了良好的分離度及柱效。延胡索的主要有效活性成分有5種[9]，出于指紋圖譜是綜合反映藥材質量的考慮[10]，我們選擇了這五種成分延胡索乙素、去氫紫堇堿、原阿片堿、鹽酸小蘗堿、巴馬汀作為為延胡索的含量控制項目。通過本組研究資料，我們建立了延胡索藥材的HPLC指紋圖譜的測定方法，得到延胡索藥材HPLC指紋譜及相關數據，為延胡索藥材及其他含延胡索的中藥復方制劑制定質量標準提供參考。

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