痛風患者CXCL16血清水平的變化及臨床意義*

吳 帆， 龔 琦， 俞佳文， 盧婷婷， 李校堃， 林灼鋒△

(1中山大學達安基因診斷中心，廣東 廣州 510665;2溫州醫學院藥學院，浙江 溫州 325035)

痛風是一種由尿酸鹽晶體沉積在關節和其它組織所引發的常見的炎癥關節炎。在關節處的尿酸鹽結晶沉積物能引起嚴重的炎癥應答。這種炎癥應答是由帶負電荷的晶體表面活化補體引發的。補體活化促進炎細胞因子和趨化因子，如白細胞介素8(interleukin 8，IL－8)、C-X-C趨化因子配體8(CXC chemokine ligand 8，CXCL8)、CXCL18 等的產生［1，2］。CXCL16是趨化因子家族中的一員，對白細胞表達的C-X-C趨化因子受體6(CXCR6)有趨向特性［3］。與其它所有的趨化因子相比，CXCL16和曲動蛋白較為相似，由跨膜蛋白和可溶的趨化物組成，表達于巨噬細胞、樹突狀細胞、成纖維細胞、平滑肌細胞和腎小囊臟層細胞的表面［4］。最近研究發現:CXCL16在類風濕性關節炎滑膜組織(rheumatoid arthritis synovial tissue，RAST)中高度表達，同時介導單個核細胞(mononuclear cell，MNC)積聚于關節滑膜組織［4］;抑制CXCL16的生物活性能顯著改善膠原誘發的風濕性關節炎病變狀況。這表明CXCL16在類風濕性關節炎的發病機制上起著重要作用，是一個治療類風濕性關節炎的潛在生物靶點［5］。與類風濕性關節炎的功能相似，在痛風的模型中，CXCL16作為重要的介質促使白細胞堆積于關節滑膜組織［6］。這表明CXCL16在痛風的發病過程中也扮演著重要的角色，但痛風患者血清CXCL16水平變化及臨床價值依然未明。本研究采用病例對照的方法，觀察痛風患者血清CXCL16水平及其臨床意義。

材料和方法

1 臨床資料

研究對象為2009年7月－2010年2月入住溫州醫學院附屬第二醫院南浦院區腎內科的20例痛風并有慢性腎病患者、22例年齡性別相匹配的慢性腎病患者以及22例無其它并發癥的痛風患者。痛風患者的入選嚴格按美國大學風濕病學臨床診斷標準［7］和歐洲抗風濕病聯盟推薦的痛風診斷標準進行［8］。同時在正常體檢人群中隨機抽取20個作為對照人群。

2 血清CXCL16水平測定

用采血管取晨空腹靜脈血，3000 r/min離心5 min，分離上層血清，置于－80℃冰箱待用。采用酶聯免疫法測定CXCL16的水平。操作程序嚴格按照試劑盒說明書，該試劑盒購自R＆D。

3 單個核細胞RNA提取及實時定量PCR檢測

采用Trizol(Invitrogen)試劑盒分別從慢性腎病患者、痛風患者、正常人的新鮮外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMC)中分離出RNA，并采用Promega生產的cDNA合成試劑盒進行反轉錄實驗。我們使用實時熒光PCR儀(ABI生物系統公司)進行實時定量PCR擴增，以SYBR Green定量分析試劑擴增檢測目標基因在患者和正常對照人群中的表達差異，實驗重復2次，總反應體積為20 μL，并以下參數進行PCR擴展反應:50℃ 2 min，95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，40 個循環。CXCL16引物序列分別為:正義鏈 5'－CGTCACTGGAAGTTGTTATTG －3'，反義鏈 5'－ACACCGATGGTAAGCTCTC －3'。

4 其他臨床相關指檢測

各臨床指標按臨床實驗室的檢測標準進行，其中包括:體重指數(body mass index，BMI)、舒張壓(diastolic pressure)、肌酐清除率(creatinine clearance rate，CCR)、估計腎小球濾過率(estimated glomerular filtration rate，eGFR)、C 反應蛋白(C －reactive protein，CRP)、24 h 尿蛋白(24 h urine protein)、血總蛋白(blood total protein)、血白蛋白(blood albulimin)、空腹血糖(fasting glucose)、血尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、血肌酐(creatinine)、甘油三酯(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)、甲狀旁腺激素(parathyroid hormone，PTH)、血紅蛋白(hemoglobin)和血沉(erythrocyte sedimentation rate，ESR)。

5 統計學處理

應用SPSS 16.0統計學軟件分析，兩組數據之間采用非配對t檢驗，多組數據之間采用One－way ANOVA和多元逐步回歸分析。

結 果

1 痛風患者的血漿CXCL16水平顯著升高

圖1A所示，痛風患者的血清 CXCL16水平［(2.68±0.09)μg/L］顯著高于正常研究對象人群［(1.56±0.06)μg/L］，也高于年齡性別相匹配的慢性腎病(chronic kidney disease，CKD)患者［(2.40 ±0.08)μg/L］，但明顯低于痛風并伴有CKD的患者［(3.24±0.23)μg/L］(P ＜0.05)。圖1B 所示，在痛風患者外周單個核細胞中，CXCL16 mRNA表達水平比健康的研究對象水平顯著升高(P＜0.05)，但與年齡性別相匹配的慢性腎病患者相比，兩者不存在顯著差異;此外，在未伴有其它并發癥的痛風患者與伴有CKD的痛風患者中，兩者的外周血單核細胞CX- CL16 mRNA水平也無顯著差異。

Figure 1.Changes of serum CXCL16 level(A)and CXCL16 mRNA expression(B)in gout，chronic kidney disease(CKD)and normal subjects..A:n=20－22;B:n=8.*P＜0.05 vs normal group;△P＜0.05 vs CKD group;#P＜0.05 vs gout group.圖1 CXCL16表達水平在痛風、CKD及正常人群的表達狀況

2 痛風患者中并發癥對血清CXCL16的影響

痛風伴有2型糖尿病患者的CXCL16水平［(3.17 ±0.71)μg/L，n=12］顯著高于不伴有2型糖尿病患者的痛風患者［(2.09±0.11)μg/L，n=14，P＜0.05，見圖2A］;痛風伴有高血壓患者的血漿CXCL16水平顯著高于痛風無高血壓癥狀的患者［(2.97 ± 0.44)μg/L vs(1.95 ± 0.09)μg/L，P＜0.05，見圖2B］;同時伴有糖尿病和高血壓的痛風患者的血漿CXCL16水平［(2.65 ±0.45)μg/L，n=8］與未伴有這兩種并發癥的痛風患者［(1.88±0.10)μg/L，n=8］相比較，前者也顯著高于后者(P＜0.05)，見圖2C。

Figure 2.The effects of diabetes mellitus(DM)and hypertension(H)on serum CXCL16 level in gout patients..n=8－14.*P＜0.05 vs gout without DM;△P＜0.05 vs gout without H;#P＜0.05 vs gout without DH.DH:diabetes mellitus and hypertension.圖2 痛風并發癥對痛風患者血清CXCL16水平的影響

3 血清CXCL16與臨床指標之間的關系

表1和圖3顯示，在痛風患者中血清CXCL16水平與eGFR和內源性CCR呈負相關，與血肌酐和BUN呈正相關，這些表明上升了的CXCL16濃度與腎臟功能有密切關系。此外，在痛風患者和正常研究對象(表1)中調整了BMI、年齡、性別、高血壓和糖尿病等因素后，血清CXCL16水平與收縮壓、舒張壓、CRP、脂聯素、空腹血糖值、尿酸、24 h尿蛋白、PTH和血清磷酸鹽呈正相關(P＜0.05)。

4 CXCL16水平與24 h尿蛋白、CCR和CRP的相關性研究

經年齡、性別、BMI、T2DM和高血壓等因素校正后，痛風患者的CXCL16水平與24 h尿蛋白、CCR和CRP 3個因素獨立相關(P＜0.05)，見表2。

討 論

本研究目的是觀察CXCL16在痛風患者生理和病理條件下的臨床特征。我們的結果表明:在痛風并有慢性腎病患者中，其血漿CXCL16水平顯著高于正常對照人群以及年齡性別相匹配的慢性腎病患者;在痛風患者中，相關的并發癥如DM、高血壓等影響血清CXCL16水平;在痛風患者中，CXCL16與患者的腎功能密切相關。這些結果提示CXCL16在痛風的發病過程中扮演著重要的角色。

表1 CXCL16與痛風患者臨床指標之間的關系Table 1.The relationship between serum CXCL16 level and clinical indexes in patients with gout

表2 與CXCL16獨立相關的幾個因素Table 2.Several parameters independently associated with CXCL16 in gout patients

CXCL16是一種在巨噬細胞、樹突狀細胞、成纖維細胞、平滑肌細胞和腎小囊臟層細胞的表面表達的趨化因子［4，5，9］，同時發現它在 RAST 中高度表達，且MNC聚集于RAST［6］。此外，早期的研究發現:活動期痛風患者單核細胞表面CXCL16的表達與正常對照人群比較處較低的表達水平;但痛風患者的PBMC CXCL16 mRNA水平與健康對照組相當［10］。在本研究中，我們發現:痛風患者伴有CKD的循環CXCL16水平顯著高于正常對照人群以及年齡性別相匹配的CKD患者;此外，痛風患者中取出的新鮮PBMC CXCL16 mRNA水平與健康對照組相比較，前者顯著高于后者。這些結果提示:CXCL16在痛風發病過程中可能扮演著不同的角色。

Figure 3.Correlation of serum CXCL16 level with eGFR(A)，CCR(B)，creatinine(C)and BUN(D)in gout and normal subjects.圖3 血清CXCL16水平與eGFR、CCR、血肌酐和BUN相關

除了作為趨化因子配體，CXCL16(又稱SRPSOX)以跨膜蛋白的形式作為氧化型低密度脂蛋白(oxidized low －density lipoprotein，oxLDL)的清道夫受體。早期的研究發現:高代謝壓力條件下，如鏈脲霉素導致的糖尿病小鼠模型［11］、糖尿病伴有冠狀動脈疾病和冠心病患者中均出現高血清oxLDL水平［12，13］。痛風是一種由尿酸鹽晶體沉積在關節和其它組織所引發的的常見的炎癥關節炎，也是機體代謝失衡所引發的一種疾病。我們前期研究表明:在CKD患者中循環CXCL16水平比起正常研究對象水平顯著上升。而本研究中，我們也發現了在痛風并伴有CKD患者的循環CXCL16水平顯著高于年齡、性別、eGFR匹配的CKD患者(圖1A)。這說明CXCL16在痛風發病過程中扮演著重要的角色，而它是否與機體代謝失衡所引發的高oxLDL相關，需要進一步的研究。

eGFR、CCR、血肌酐和BUN都是傳統的生物標志，它們反應腎小球功能的改變［14］。本研究中，我們的數據顯示:在痛風患者中血清CXCL16水平與eGFR、CCR、血肌酐和BUN高度相關(圖3)，這表明痛風患者中高濃度的CXCL16與腎小球受損和腎小球功能改變有著密切關系。然而，有關痛風發病過程中CXCL16濃度升高的具體機制依然未能明了。我們推測:CXCL16在痛風中的升高是一種應激反應，由新陳代謝變化所引起。由于CXCL16水平的改變也在其它代謝性疾病如冠心病、腎衰竭等中發現，這需要進一步研究來闡明CXCL16在痛風發病中所扮演的角色。

本項目研究還存在幾個局限:(1)患者及對照人群的樣本量相對較少;(2)作為臨床研究，其本身未能闡明CXCL16和痛風發病機制的因果關系。因此，加大樣品量，進一步探索CXCL16與痛風發病之間的關系也是本項目必須深入的首要任務之一。

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