鹽城地區鵝致病性大腸桿菌的分離與鑒定

朱明 陳靜華 紀家玉 裔群英 卞紅春 高 崧 彭大新

（1 江蘇省鹽城市畜牧獸醫站 江蘇鹽城 224002 2 揚州大學江蘇省動物預防醫學重點實驗室 江蘇揚州 225009）

鵝大腸桿菌病是由大腸桿菌引起，廣泛流行于各鵝場，其中產蛋母鵝的卵黃性腹膜炎又稱為“蛋子瘟”。該病常隨著鵝產蛋而開始，產蛋停止而結束。患此病的鵝群產蛋下降，有死亡。在孵蛋期間出現大量死胚蛋。患病母鵝精神萎靡，拉白色稀糞，卵泡膜充血、易破裂，輸卵管內有大量白色干酪樣蛋白凝固塊，有臭味。泄殖腔黏膜充血、出血。腹腔內廣泛性腹膜炎，有黃色干酪樣物。患大腸桿菌病的公鵝則表現陰莖充血、腫大，表面潰瘍、壞死，在不同部位有數量不等的結節，不愿交配[1～3]。為了給鹽城地區養鵝場的特異性防治措施的制定提供依據，筆者對該地區的鵝大腸桿菌病的發生、血清型的類型及分布情況進行了調查，現將有關內容報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料 鹽城地區的建湖、大豐、鹽都、射陽、濱海、東臺、亭湖、阜寧、響水和市開發區共10個縣(市、區)臨診上獲取有典型大腸桿菌病變的病、死母鵝221只，發病公鵝83只。從鵝炕坊采集死胚蛋356枚。

1.1.2 培養基

1.1.2.1 葡萄糖、麥芽糖、甘露醇、尿素、硫化氫和蛋白胨水等生化發酵培養基、麥康凱干粉培養基為上海市醫學化驗所試劑廠產品。

1.1.2.2 檸檬酸鹽培養基、葡萄糖蛋白胨水和明膠培養基參照文獻[4]配制。

1.1.2.3 血清型鑒定所用營養瓊脂斜面、營養肉湯參照文獻[4]配制。

1.1.2.4 半固體培養基：肉汁1000mL，蛋白胨10g，磷酸氫二鉀1g，氯化鈉5g，瓊脂5g，調整pH至7.4～7.6，高壓滅菌121℃，10min,冷卻至50℃分裝試管。

1.1.3 大腸桿菌標準抗O血清 中國獸藥監察所制備，由揚州大學農業部畜禽傳染病學重點開放實驗室惠贈。

1.2 方法

1.2.1 細菌分離

1.2.1.1 從患病公鵝的陰莖結節、患病母鵝的泄殖腔黏膜、輸卵管分泌物、病死鵝的肝、十二指腸、卵泡、輸卵管及種鵝所產蛋孵化后死亡胚的卵黃用麥康凱培養基分離細菌。

1.2.1.2 無菌操作采取上述病、死鵝的病料和死胚蛋劃線于麥康凱斜面，37℃培養24h，再純培養后選取單個典型菌落用液體石蠟覆蓋法保存。

1.2.2 革蘭氏染色鏡檢 用接種環挑取一環生理鹽水蘸于潔凈玻片上，再用接種環挑取少量純化后的細菌與玻片上的生理鹽水混合，并均勻涂布于玻片上，自然干燥后用火焰固定；在玻片上滴加草酸銨結晶紫染色液，作用1min，水洗；加革蘭氏碘溶液于玻片上媒染，作用1min，水洗；再加95%酒精脫色，作用30～60s，水洗；加中性紅復染1min，水洗。自然干燥后鏡檢，觀察細菌染色與形態。

1.2.3 生化試驗 對所有分離株進行葡萄糖、麥芽糖、甘露醇、吲哚、硫化氫、脲酶、M.R、V-P、枸櫞酸鹽和明膠液化10項生化指標的測定。

1.2.4 血清型鑒定 將待檢菌株在瓊脂斜面上培養24h，用5g/L石碳酸生理鹽水洗下菌落（細菌數大于210個/mL），然后以121℃高壓2小時即制成O抗原。所有分離株首先經玻板凝集試驗初步篩選可能的O血清型，可疑的通過試管凝集試驗確定其O血清型。定型的標準為血清的試管凝集價不小于1∶640[1]。

2 結果

2.1 細菌分離鏡檢

表1 256個分離株的10項生化試驗結果

表2 不同地區、不同樣品鵝大腸桿菌的分離情況

表3 不同部位鵝大腸桿菌的分離情況

從病、死公、母鵝304只及死胚蛋356枚中共分離細菌293株，其中256個分離株在麥康凱培養基上長出大小一致的粉紅色小菌落，無雜菌生長。革蘭氏染色鏡檢，256個分離株均為兩端鈍圓的革蘭氏陰性小桿菌。

2.2 生化試驗

256個分離株的10項生化試驗結果完全符合大腸桿菌生化特性的分離株占多數，極少數菌株在個別項目上不符[5、6]，詳見表 1。

2.3 不同地區、不同來源的樣品的分離情況

從母鵝分離到136株，分離率為61.5%；從公鵝分離到79株，分離率為95.2%；從鵝炕坊死胚蛋中分離到41株，分離率為11.5%。所分離細菌分布情況詳見表2。

2.4 不同部位樣品分離情況

患病母鵝的泄殖腔、患病公鵝的陰莖結節和病、死母鵝的十二指腸、輸卵管或卵泡容易分離到細菌，病死母鵝的肝臟器官上和死胚蛋中不容易分離到細菌。不同部位的分離結果詳見表3。

2.5 血清型鑒定

256個分離株中有50株未能定型，自凝株9株，其余197株血清型從多到少依次為O1（13.3%）、O107（11.7%）、O141（8.2%）、O9（5.9%）、O78（5.5%）、O7（5.5%）、O36（5.5%）和O8（3.5%），詳見表4。

3 討論

3.1 鵝大腸桿菌病是嚴重危害養鵝業健康發展的傳染病之一。本次流行病學調查的對象主要是成年鵝及其所產蛋的孵化胚，調查的結果表明本病從性成熟開始發生，其傳播速度較慢。患有本病的鵝群中，公鵝陰莖上可發現結節，并從其中分離到與患病母鵝同一血清型的大腸桿菌。因此，可以認為感染公鵝與母鵝的大腸桿菌是屬于同一種來源。在母鵝未發病之前，檢查13群公鵝陰莖有病變者，結果有12群鵝發生本病，說明患病公鵝在傳播本病上起了重要作用。另外在鵝群所產蛋的孵化死胚中分離到相同血清型的大腸桿菌，說明大腸桿菌還可以通過卵進行垂直傳播感染［3］。

表4 不同地區256個分離株的血清型的分布情況

3.2 患病母鵝的泄殖腔，患病公鵝的陰莖結節，病、死母鵝的十二指腸、輸卵管或卵泡容易分離到細菌，但不是所有的病例都能分離到，尤其是用過藥物的鵝群。病死鵝的肝臟上不容易分離到細菌。

3.3 通過分離、染色鏡檢和生化試驗鑒定，本次試驗獲得了256株大腸桿菌。生化試驗結果表明，完全符合大腸桿菌生化特性的分離株占多數，極少數菌株在個別項目上不符。因此，在作大腸桿菌的生化鑒定時，應多設一些有針對性的檢驗項目，以便在個別項目不符時，不致誤判。

3.4 鹽城市10個縣（市、區）256個鵝源性大腸桿菌分離株中，共測出197個分離株的血清型，其種類(血清型) 達 21 個之多，但以 O1、O107、O141、O9、O78、O7和O36為主，共142株，占定型菌株的72.1%；前3種血清型在種類上僅占總量的1/7，卻擁有85個分離株，占定型菌株的43.1%。因此，在本次調查中，O1、O107和O141等3個血清型為優勢血清型。

3.5 高崧等對我國18個省市的禽大腸桿菌分離鑒定表明，O18、O78、O2、O88、O11和 O26等 6 個血清型為優勢血清型[7、8]。而我們分離的大腸桿菌的血清型主要為 O1、O107、O141、O9、O78、O7和 O36，同時存在著優勢血清型，與其他地區的血清型也有一定差異[9～11]。如樣品較多 (定型菌株20個以上)的4個地區，O1、O107和O141分離株數大多在前5位內，且Ol血清型列于其中3個地區的首位。多樣性體現在：197個定型菌株覆蓋了21個血清型。因此鹽城地區鵝大腸桿菌分離株存在地區性、多樣性，這對于當地鵝大腸桿菌病的特異性防制有重要指導意義。

3.6 根據256個鵝源大腸桿菌分離株的檢測結果，筆者認為，在當地門診量大的獸醫站、門診部采樣比在少數幾個鵝場采樣更具代表性。樣品量大的代表性強；反之，代表性弱。

[1]曹澍澤，郭玉璞，董國雄，等主編.獸醫微生物學及免疫學技術.北京：北京農業大學出版社，1992：34-95.

[2]甘肅農業大學主編.獸醫微生物學.北京中國農業出版社，1999：209-230.

[3]CalnekBW主編.禽病學(第9版).高福，劉文軍主譯.北京：北京農業大學出版社，1991：126-132.

[4]甘肅農業大學主編.獸醫微生物學實驗指導.北京：中國農業出版社，1999：81-87.

[5]霍龍飛，畢丁仁.湖北省雞源致病性大腸桿菌某些生物學特性研究.中國畜禽傳染病，1995(1)：23-26.

[6]韋平，李康然，施萬球.廣西雞大腸桿菌的分離與鑒定.廣西農學院學報，1989，8(2)：31-380.

[7]高崧等.我國部分地區禽源性大腸桿菌的分離與鑒定.畜牧獸醫學報，1999，30(2)：164，171.

[8]高崧,瞿國潤,唐一鳴,等.我國部分地區105個禽病原性大腸桿菌的藥敏試驗.中國畜禽傳染病,1998,20(5):300-304.

[9]王晶鈺，張國祥，王莢珍，等.陜西省雞致病性大腸桿菌的分離及血清型鑒定和藥敏試驗.中國獸醫科技，1996，26(3)：15-17.

[10]張春榮，蘇亞拉圖.我國流行的雞致病性大腸桿菌血清型.中國動物檢疫，1996，13(1)：27.

[11]夏業才，潘松年.禽大腸桿菌病研究-雞致病性大腸桿菌血清型鑒定.中國獸藥雜志,1991，25(4)：1-2.