慢性乙型肝炎患者檢測乙型肝炎病毒大蛋白的臨床意義

趙 霞

南京市紅十字醫(yī)院檢驗科，江蘇南京 210001

我國慢性乙型肝炎患者約占世界的1/3[1]，且HBeAg陰性患者較多，目前對慢性乙型肝炎患者的治療效果監(jiān)測仍以HBeAg和HBV-DNA陰轉(zhuǎn)及臨床肝臟功能改善為主，對HBeAg陰性患者沒有有效監(jiān)測指標(biāo)。近年來研究表明，HBVLP具有反式激活HBV細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的功能，與HBV感染、病毒復(fù)制及預(yù)后均具有密切關(guān)系[2]。本文中筆者對120例慢性乙型肝炎患者血清HBV-LP、HBeAg、HBV-DNA進(jìn)行檢測，現(xiàn)將結(jié)果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2007年1月～2010年12月收治的慢性乙型肝炎患者120例，其中，男78例，女42例；年齡34～67歲，平均（46.1±12.4）歲。所有患者均符合乙型肝炎病毒感染的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，且無其他類型病毒性肝炎合并感染。

1.2 方法

所有患者均于清晨采集空腹靜脈血2～5 ml，分離血清，并置于-20℃冰箱凍存?zhèn)溆谩BV-LP和HBeAg檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行，儀器為瑞士HAMILTON公司全自動酶聯(lián)免疫分析儀，試劑盒為蘇州新波生物技術(shù)公司生產(chǎn)。HBVDNA檢測采用免疫熒光分析法，儀器為美國PE7700型自動熒光PCR分析儀，試劑為中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)。所有試劑均在有效期內(nèi)嚴(yán)格按試劑使用說明書使用。比較HBV-DNA、HBV-LP及HBeAg的檢出率，并對HBeAg陰性的患者HBV-LP、HBV-DNA血清學(xué)檢出率進(jìn)行比較，并分析HBV-LP與HBeAg、HBV-DNA的相關(guān)性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 慢性乙型肝炎患者三組指標(biāo)的檢測結(jié)果

HBV-LP陽性率為87.50%（105/120），顯著高于HBV-DNA的檢出率[70.00%（84/120）]以及 HBeAg的檢出率[38.33%（46/120）]（均 P<0.01）。見表 1。

表1 HBV-LP、HBV-DNA、HBeAg檢出率比較

2.2 HBeAg陰性患者中HBV-LP與HBV-DNA檢測結(jié)果

74例HBeAg陰性的慢性乙型肝炎患者中，HBV-LP陽性率為 82.43%（61/74），HBV-DNA陽性率為 44.59%（33/74），HBV-LP 陽性率顯著高于 HBV-DNA 陽性率（P<0.01）。見表2。

表2 HBeAg陰性者HPV-LP與HBV-DNA檢出率

2.3 HBV-LP同HBeAg及HBV-DNA表達(dá)的相關(guān)關(guān)系

相關(guān)性檢驗顯示HBV-LP與HBV-DNA及HBeAg之間存在正相關(guān)關(guān)系（rs=0.573，P<0.05；rs=0.681，P<0.05）。 見表 3。

表3 HBV-LP與HBeAg及HBV-DNA表達(dá)的相關(guān)關(guān)系（例）

3 討論

近年來，隨著對乙型肝炎發(fā)病機制、病毒感染、復(fù)制過程中HBV-LP的作用研究，HBV-LP受到專家、學(xué)者們越來越高的重視，越來越多的人逐漸認(rèn)識到HBV-LP的重要臨床意義。HBV-LP是一種由s基因編碼的HBV包膜蛋白[3]，具有復(fù)雜的空間構(gòu)象。Dane顆粒與管狀病毒顆粒（亞病毒顆粒）內(nèi)均存有HBV-LP。HBV核殼體膜可與其內(nèi)側(cè)結(jié)合，而病毒受體又能與其外側(cè)結(jié)合，HBV-LP對HBV顆粒的成熟、包裝有重要作用。HBV患者血清具有感染性與否，與富含HBVLP的亞病毒顆粒及Dane顆粒的多少有密切關(guān)系。目前臨床上廣泛應(yīng)用的HBV持續(xù)抗病毒治療方案僅對cccDNA的再復(fù)制具有一定的抑制作用，而對于已形成的病毒表達(dá)蛋白無抑制能力，故不能清除富含HBV-LP的亞病毒顆粒，其在細(xì)胞內(nèi)的長期累積可造成肝細(xì)胞的液化和凋亡，同時病毒的繼續(xù)復(fù)制可被亞病毒顆粒反式激活。臨床上即使患者達(dá)到治愈標(biāo)準(zhǔn)，其肝臟組織內(nèi)仍然能檢測出cccHBV-DNA的復(fù)制，說明仍有HBV持續(xù)感染[4]。因此，筆者認(rèn)為，可以通過患者血清HBV-LP的檢測對乙型肝炎病毒外膜的完整性進(jìn)行判斷，從而了解到病毒基因或亞病毒顆粒的存在與否。

本研究結(jié)果中顯示，HBV-LP與HBV-DNA及HBeAg之間均存在顯著相關(guān)性，其陽性檢出率與二者的陽性檢出率同樣顯著相關(guān)，但在總體對比上，HBV-LP陽性檢出率顯著高于HBV-DNA與HBeAg的陽性檢出率，在HBeAg陰性組患者中，HBV-LP陽性檢出率顯著高于HBV-DNA，同時在HBeAg與HBV-DNA均為陰性的患者組中，HBV-LP仍有67.64%的陽性檢出率。分析出現(xiàn)上述結(jié)果的原因可能為：①血清HBeAg的陰性結(jié)果不能說明不存在病毒的復(fù)制[5-6]，可能與長期抗病毒治療導(dǎo)致病毒基因變異造成抗原合成障礙有關(guān)；②血清HBV-DNA陰性同樣不是一定表明患者體內(nèi)的HBV完全清除，可能是因為HBV-DNA檢測敏感度有限或水平較低，有研究稱，血清HBV-DNA水平較低時，肝臟內(nèi)仍舊可以存在一定量的HBV-DNA；③HBV-LP易在細(xì)胞內(nèi)滯留等多種原因均可造成上述結(jié)果的出現(xiàn)。HBV患者血清HBV-LP濃度的檢測，可彌補HBV-DNA檢測在HBV患者抗病毒治療終點判斷及療效評估中的不足。當(dāng)HBV患者血清HBeAg陰性時，通過HBV-LP檢測可了解體內(nèi)病毒的復(fù)制、疾病進(jìn)展情況以及抗病毒療效與預(yù)后[7-9]，有效減少更嚴(yán)重的肝硬化及肝癌的發(fā)生。如果HBV患者血清HBV-LP陽性而HBV-DNA陰性時，進(jìn)行HBV-LP檢測可避免不必要的停藥反跳，具有更好的臨床指導(dǎo)意義。

綜上所述，筆者認(rèn)為對乙型肝炎患者特別是血清HBeAg陰性的乙型肝炎患者，檢測血清HBV-LP可作為監(jiān)測患者體內(nèi)病毒復(fù)制、疾病進(jìn)展及抗病毒治療效果的敏感指標(biāo)，對提高血清學(xué)手段診斷HBV的水平有積極意義。

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