人巨細胞病毒活動性感染與習慣性流產的關系探討

寧 琳，賈 卉

1.陜西省婦幼保健院婦科，陜西西安 710003；2.陜西省婦幼保健院醫學實驗中心，陜西西安 710003

習慣性流產（RSA）為自然流產連續3次以上者，每次流產往往發生在同一妊娠月份。RSA的原因大多與孕婦黃體功能不全、甲狀腺功能低下、子宮發育異常、染色體異常、自身免疫等有關。人巨細胞病毒（HCMV）是宮內感染最常見的病原體之一，易導致流產、死產、新生兒畸形、智力低下等[1]。傳統的HCMV-DNA檢查不能很好的顯示病毒的活動狀態，本文筆者采用免疫熒光技術檢測外周單個核細胞HCMVpp65抗原，探討HCMV活動性感染與習慣性流產的關系，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2008年5月～2010年5月本院婦產科收治的反復性流產患者40例作為研究組，年齡25～37歲，平均（26.5±3.7）歲；全部孕婦均有不明原因3次及以上自然流產，平均流產（3.5±1.2）次；流產時間為妊娠1～3個月。選擇同期體檢正常孕婦50例作為對照組，年齡23～35歲，平均（25.7±3.2）歲，妊娠1～3個月。兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

兩組患者均采集外周靜脈血5 ml，離心后分離血漿及外周血有核細胞，無菌PBS洗滌后計數細胞，制作外周血單個核細胞涂片（2×105/片）并固定。采用免疫熒光法（美國DAKO公司試劑盒）檢測外周血單個核細胞HCMVpp65抗原，嚴格按說明書操作。熒光顯微鏡下觀察每片HCMVpp65抗原陽性細胞數≥10個為陽性。采用HCMV-DNA熒光定量PCR試劑盒（中山大學達安基因診斷公司）以及全自動熒光定量PCR顯示儀（美國Roche公司），檢測外周血HCMV-DNA含量。HCMV-DNA拷貝數≥103/ml為陽性。

1.3 統計學方法

采用SPSS 13.0統計學軟件進行數據分析，計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，采用spearman相關性檢驗進行HCMVpp65抗原陽性細胞數與HCMV-DNA拷貝數的相關性分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組外周血有核細胞HCMVpp65抗原陽性率比較

研究組外周血有核細胞HCMVpp65抗原陽性率明顯高于對照組，兩組比較，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組HCMVpp65抗原陽性率比較（例）

2.2 研究組不同流產次數孕婦HCMVpp65抗原陽性率比較

研究組中流產次數多的孕婦，HCMVpp65抗原陽性率明顯高于流產次數相對較少的孕婦，兩組比較，差異有統計學意義（P<0.05）。說明HCMVpp65抗原陽性率增高孕婦流產的危險性也升高。見表2。

表2 研究組不同流產次數孕婦HCMVpp65抗原陽性率比較（例）

2.3 研究組HCMVpp65抗原與HCMV-DNA檢測的一致性

研究組中實時熒光定量PCR檢測HCMV-DNA和免疫熒光法檢測HCMVpp65抗原的一致性較好，達92.5%（37/40）。見表3。并且每份標本中HCMVpp65抗原陽性細胞數與HCMV-DNA 拷貝數呈正相關（r=0.647，P<0.05）。

表3 研究組HCMVpp65抗原與HCMV-DNA檢測結果比較[n（%）]

3 討論

HCMV是人類皰疹病毒的一種，有典型的皰疹病毒結構，在人群中廣泛傳播。程麗平等[2]報道顯示，我國成人HCMV感染率可達80%～97%，并且多為隱性感染。HCMV可由唾液、血液、尿液、乳液、精液、子宮分泌物等攜帶，通過口腔、生殖道、胎盤、出血等途徑轉移[3]。正常情況下患者無明顯臨床癥狀，當機體免疫功能下降時，病毒激活發生顯性感染。妊娠期婦女免疫力下降，容易導致病毒激活[4-5]，尤其是妊娠早期，病毒通過胎盤進入胎兒體內，可引起胎兒神經系統、心血管系統等損害而發生流產。

傳統的HCMV檢測多采用HCMV-DNA及抗HCMV IgM抗體檢測，但該方法不能很好地顯示病毒的活動狀態。近年來孕婦外周血單個核細胞HCMVpp65抗原檢測逐漸成為檢測HCMV活動性感染的標準[6]。本研究結果顯示，HCMVpp65抗原檢測與HCMV-DNA定量檢測一致性達92.5%，且HCMVpp65抗原陽性細胞數與HCMV-DNA拷貝數呈正相關（r=0.64、P＜0.05），從而證實了 HCMVpp65 抗原檢測在判斷HCMV活動性感染中的有效性。本研究結果還顯示，RSA孕婦外周血有核細胞HCMVpp65抗原陽性率明顯高于正常孕婦，并且隨著HCMVpp65抗原陽性率的升高，孕婦流產次數增加，提示HCMV活動性感染與孕婦RSA有密切關系。至于HCMV活動性感染導致孕婦流產的具體機制尚需進一步研究證實。

綜上所述，HCMV活動性感染與孕婦RSA有密切關系，外周血有核細胞HCMVpp65抗原檢測，對判斷孕婦HCMV活動性感染，早期預防RSA有較高的應用價值。

[1]蘆雅蘋,李冬梅,張燕玲,等.人巨細胞病毒感染與自然流產的關系[J].廣東醫學,2006,27(3):406-407.

[2]程麗平,韓愛民.自然流產婦女中人巨細胞病毒感染調查[J].山西臨床醫藥,2001,10(3):204-205.

[3]張富青,宮亞紅,劉毅,等.早孕自然流產婦女人巨細胞病毒感染的臨床分析[J].中國婦幼保健,2004,19(7):97-98.

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[6]Boeckh M,Huang M,Ferrenberg J,et al.Optimization of quantitative detection of cytomegalovirus DNA in plasma by Real-Time PCR[J].J Clin Microbiol,2005,42:1142-1148.