四種除草劑原藥有效成分UPLC-MS/MS測定方法研究

許慶軒 ，張婷婷 ，周 芹 ，吳玉梅

（1.農業部甜菜品質監督檢驗測試中心，哈爾濱 150080；2.黑龍江大學農作物研究院，哈爾濱 150080；3.中國農業科學院甜菜研究所，哈爾濱150080；4.黑龍江中醫藥大學藥學院，哈爾濱150040）

黑龍江省位于北緯53°至43°之間，年平均氣溫僅4℃左右，氣溫偏低導致除草劑在土壤中的降解十分緩慢，很容易對下茬作物造成藥害[1]。甜菜對某些除草劑十分敏感，在黑龍江地區藥害十分嚴重，經常造成減產，甚至絕產[2-6]，已經成為甜菜生產中的重要問題。

在黑龍江，對甜菜危害較大的除草劑主要是豆磺隆、普斯特、賽可津和莠去津。本研究采用UPLC-MS/MS技術對上述4種除草劑市售原藥進行檢測，建立較為快捷的準確定量方法，便于指導田間及試驗準確用藥，同時可以辨別原藥除草劑中有效成分，防止摻加禁用除草劑，為安全合理用藥奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

4種除草劑原藥均購自農藥商店，其標識含量如下：普斯特，有效成分為咪唑乙煙酸，50g/L；豆磺隆有效成分為氯嘧磺隆，20%（質量比）；莠去津有效成分50%（質量比）；賽克津有效成分為嗪草酮，有效成分70%（質量比）。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器設備 UPLC-Quattro Premier超高效液相色譜串聯三重四級桿質譜儀，美國Waters公司生產。

1.2.2 儀器條件 （1）色譜條件：色譜柱為 ACQUITY UPLCTMBEH C18column（50mm×2.1mm i.d.，1.7μm，Waters Corp，Milford，USA）；流速：0.3mL/min；柱溫：35℃；流動相：A：0.1%甲酸乙腈，B：0.1%甲酸水；進樣量：2μL；梯度洗脫，初始流動相比例為A：10%，B：90%，之后在1.5minA相比例線性增加到35%，B相為65%，在4minA相比例線性增加到90%，B為10%，在這個比例持續1min，到第5min恢復到初始流動相比例，平衡2min到第7min結束。

（2）質譜條件：電噴霧離子源（ESI），正離子模式檢測；毛細管電壓3.5kV，提取電壓3.0V，離子源溫度120℃，脫溶劑氣溫度350℃，錐孔氣流量為30L/h，脫溶劑氣流量500L/h，離子對監測時間0.2s，莠去津（Atrazine）定量離子對 216>174，錐孔電壓 35kV，碰撞能量 18；嗪草酮（Metribuzin）定量離子對 215>187，錐孔電壓25kV，碰撞能量18；氯嘧磺隆（Chlorimuron-ethyl）定量離子對415>186，錐孔電壓43kV，碰撞能量15；咪唑乙煙酸（Imazethapyr）定量離子對290>177，錐孔電壓30kV，碰撞能量25。

1.2.3 主要試劑 乙腈和甲醇：色譜純，美國Fisher公司生產；甲酸：色譜純，天津科密歐化學試劑有限公司生產；除草劑：咪唑乙煙酸純度99.0%，氯嘧磺隆97.5%，莠去津99.5%，嗪草酮99.0%，標準品由德國Dr.Ehrenstorfer生產。

2 實驗方法

2.1 除草劑標準溶液儲備液及標準混合溶液的配制

取咪唑乙煙酸、莠去津、嗪草酮、氯嘧磺隆標準品適量，精密稱定，加乙腈溶液配制成4種除草劑標準品的工作儲備液（濃度為10 mg/L）。精密吸取4種除草劑標準品的工作儲備液各1 mL置于10 mL容量瓶中，以乙腈稀釋至刻度，搖勻，配制成濃度為1.0mg/L的標準混合溶液用于標準曲線的制備。精密吸取混合標準品溶液各0.1mL、0.3mL、0.5mL、1mL、3mL、5mL置10mL容量瓶中，用10%乙腈水溶液釋至刻度，搖勻，用于標準曲線制備。

2.2 供試品溶液的制備

⑴普施特（標注有效成分50g/L）：吸取20mL普施特原藥溶液于1000mL容量瓶，用蒸餾水定容，得到1 mg/mL的原藥溶液；用10%乙腈水溶液再稀釋至0.1mg/L。⑵豆磺隆（標注有效成分20%）：稱取豆磺隆原藥5g，用蒸餾水溶解，定容到1000mL容量瓶中，得到1mg/mL的原藥溶液，用10%乙腈水溶液再稀釋至0.1 mg/L。⑶莠去津（標注有效成分50%）：稱取莠去津原藥2g，用蒸餾水定容到1000mL溶量瓶中，得到1mg/mL的溶液，用10%乙腈水溶液再稀釋至0.1mg/L。⑷塞克津（標注有效成分70%）：稱取塞克津原藥1.5g，用蒸餾水定容到1000mL，得到1mg/mL的溶液，最后采用10%乙腈水溶液再稀釋至0.1mg/L。以上樣品用0.22μm濾膜過濾，直接用于UPLC-MS/MS分析。

3 結果與討論

以4種除草劑混和標準溶液優化色譜質譜條件，最終確定其條件如1.2.2所示，圖一為4種除草劑的多反應監測（MRM）的提取離子流圖（EIC），如圖所示，4種除草劑分離度較好，峰形也較好，可以用來做定性定量分析，說明1.2.2所示的色譜質譜條件適當。

使用0.01、0.03、0.05、0.1、0.3、0.5mg/mL 的標準混和溶液 5μL 注入UPLC-MS/MS分析系統，記錄峰面積，以標準品濃度（mg/L）為橫坐標，峰面積為縱坐標，曲線過原點，繪制標準曲線并進行回歸分析，得各成分的線性回歸方程結果見表1。從表中結果可以得知該方法用于分析4種除草劑的標準曲線線性很好，待測組分具有較好的定量準確性。

取各組分濃度均為0.1×10-6的除草劑原藥1mL用于UPLC-MS/MS分析，每次進樣5μL，記錄峰面積，用原藥溶液作為空白，以外標法計算原藥溶液加標準品的含量。用原藥加標準品的含量減去原藥所得含量，所得差值與標準品含量作比較，計算回收率。結果見表2。加標水平在0.1mg/L的情況下，仍然有很好的回收率，說明本方法定量準確度高，適合4種除草劑的定量分析。

取0.1mg/L的除草劑原藥用于UPLC-MS/MS分析，連續進樣3次，每次進樣5μL，記錄峰面積，以外標法計算原藥中咪唑乙煙酸、氯嘧磺隆、莠去津、嗪草酮的有效成分含量。結果見表3。通過結果可以看出，普施特原藥中有效成分的含量低于標注含量38%、莠去津原藥中有效成分的含量低于標注量18%，塞克津原藥中有效成分的含量高于標注量14%，豆磺隆原藥中有效成分的含量高于標注量5%。普斯特、莠去津和賽克津中有效成分的含量與標注有很大誤差，說明對原藥除草劑有效成分的檢測是十分必要的。另外，在每種除草劑原藥中均未檢出其它類型除草劑成分，本分析方法可以作為違禁除草劑的檢測方法。

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