異丙酚對大鼠失血性休克復蘇后腸道的保護作用

常 杰 曹書華 王勇強 常文秀

嚴重多發(fā)傷伴失血性休克患者日漸增多，失血性休克在其原發(fā)性損傷之后所出現(xiàn)的并發(fā)癥一直是臨床重癥監(jiān)護面臨的問題。近年來關于重癥監(jiān)護室（ICU）常用鎮(zhèn)靜藥物異丙酚非鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜作用的研究逐漸增多[1-2]，但對于失血性休克復蘇后的臟器功能保護的研究報道較少。本實驗通過觀察Wistar大鼠失血性休克復蘇后腸道組織和血漿中脂質(zhì)過氧化物酶水平及腸道組織病理學變化，探討異丙酚對失血性休克復蘇后腸道的保護作用及其可能的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 健康清潔級Wistar大鼠24只（購自中國醫(yī)學科學院放射醫(yī)學研究所實驗動物中心），均為雄性，體質(zhì)量（270±20）g，隨機分為假手術組（C組）、失血性休克復蘇組（HS-R組）及異丙酚處理組（P組），每組各8只。

1.2 主要藥品與試劑 市售異丙酚（商品名：得普利麻，英國AstraZeneca公司）質(zhì)量濃度為10 g/L；市售平衡液為復方氯化鈉葡萄糖注射液（日本大冢制藥公司）。30%烏拉坦；肝素鈉；丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、二胺氧化酶（DAO）試劑盒，考馬斯亮藍蛋白測定盒均購于南京建成生物公司；4%多聚甲醛液購于天津灝洋生物技術有限公司。

1.3 動物模型的制備 模型參照Fan等[3]的方法并加以改進。大鼠經(jīng)腹腔注射30%烏拉坦（0.3 mL/100 g）麻醉。麻醉滿意后動物仰臥于操作臺上，固定四肢及頭部。術野備皮并用安爾碘消毒。分離左側(cè)頸總動脈，置入22 G導管，連接多道生理記錄儀持續(xù)監(jiān)測平均動脈壓。右頸內(nèi)靜脈置24 G導管供放血、回輸血液及液體復蘇用，于插管成功后向?qū)Ч芮粌?nèi)注入25 U/mL肝素鹽水0.5 mL抗凝，而不實施全身肝素化。完成置管后行氣管切開置入14 G氣管插管，避免阻塞性通氣障礙。自頸動脈快速放血至平均動脈壓（MAP）達到40 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa），穩(wěn)定此血壓水平30 min后開始液體復蘇，在1.5 h內(nèi)經(jīng)頸內(nèi)靜脈回輸全部放出的血液并追加輸入2倍于失血量的平衡液，血壓恢復至80 mm Hg以上視為復蘇成功，否則不入組。復蘇成功后，HS-R組經(jīng)頸內(nèi)靜脈持續(xù)泵入生理鹽水1 mL·kg-1·h-1，持續(xù)泵入2 h；P組給予1%異丙酚1 mL·kg-1·h-（110 mg·kg-1·h-1）經(jīng)頸內(nèi)靜脈持續(xù)泵入，持續(xù)泵入2 h。C組只做插管不進行放血、回輸?shù)忍幚怼?/p>

1.4 觀察指標 H S-R組和P組在復蘇后2 h，C組在插管完畢后4 h處死大鼠，經(jīng)頸動脈放血，立即離心，留取血漿1 mL，測血漿中DAO水平；放血后，立即開腹取距回盲部20 cm處小腸組織約5 cm，其中3 cm腸道組織立即勻漿，勻漿后，測定勻漿中蛋白含量，再用所測SOD、MDA值除以蛋白含量，最終結果分別用U/mg、nmol/mg表示；另外約2 cm腸道組織置于4%多聚甲醛液中固定，常規(guī)石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡觀察腸道組織病理學變化。

1.5 檢測方法 MDA采用硫代巴比妥酸比色法，SOD采用黃嘌呤氧化酶法,DAO及蛋白含量采用分光光度法進行測定；腸黏膜損傷按Chiu評分法[4]進行組織病理評分。0分:正常黏膜絨毛；1分:上皮下間隙增大，通常在絨毛尖端，常伴有毛細血管淤血；2分:上皮下間隙擴張伴隨上皮層同固有層的中度分離；3分:絨毛兩側(cè)上皮層大量地同固有層分離，部分絨毛頂端破損；4分:絨毛破損伴隨固有層毛細血管暴露，可觀察到固有層的細胞成分增多；5分:固有層破壞或不完整、出血和潰瘍。

1.6 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學處理，計量資料數(shù)據(jù)以s表示，采用Levene方差齊性檢驗，方差分析,組間比較采用LSD-t法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 3組SOD、MDA、DAO的比較 HS-R組腸道組織勻漿中具有抗氧自由基作用的SOD含量較P組明顯降低（P<0.01），而反映腸道脂質(zhì)過氧化損傷程度的MDA及DAO水平明顯高于P組（P<0.001），見表1。

表13 組SOD、MDA、DAO及Chiu評分比較（n=8±s）

表13 組SOD、MDA、DAO及Chiu評分比較（n=8±s）

*P<0.01

C組（1）HS-R組（2）P組（3）F P（1）∶（2）（1）∶（3）（2）∶（3）SOD（U/mg）146.639±27.826 80.538±3.219 105.399±5.082 33.009*<0.001<0.001 0.006 MDA（nmol/mg）2.299±0.320 6.037±0.371 4.782±0.528 167.713*<0.001<0.001<0.001 DAO（U/mL）1.409±0.780 8.769±0.527 5.027±1.732 247.253*<0.001<0.001<0.001 0.450±0.097 3.810±0.375 2.300±0.284 294.821*<0.001<0.001<0.001組別Chiu評分

2.2 小腸組織病理形態(tài)學變化 C組腸道組織各層結構完整，絨毛排列整齊；HS-R組腸道組織上皮下間隙擴張伴隨絨毛兩側(cè)上皮層大量地同固有層分離，腸絨毛毛細血管充血，部分絨毛頂端破損；P組腸道組織上皮下間隙擴張伴隨上皮層同固有層的中度分離，絨毛頂端輕度損傷，見圖1~3。對3組分別進行腸黏膜損傷病理學評分，結果顯示，P組及HS-R組均高于C組,P組較HS-R組低，差異均有統(tǒng)計學意義（均P<0.001），見表1。

3 討論

腸道組織是缺血發(fā)生時的敏感器官，其微循環(huán)的改善最終有賴于全身狀況的好轉(zhuǎn)和充足的血容量。積極地復蘇是避免腸道微循環(huán)障礙的最佳途徑，但復蘇又會涉及到腸道缺血再灌注損傷這一病理變化，無論失血發(fā)生時還是復蘇后，腸道組織的損傷往往不可避免，其屏障功能的損害易引發(fā)全身感染，導致過度的炎癥反應，即系統(tǒng)性炎癥反應綜合征（SIRS）和多器官功能不全綜合征（MODS）。對于其損傷機制，學者也先后提出了能量衰竭、氧自由基損傷、白細胞黏附、內(nèi)皮細胞損傷與遞質(zhì)病等一系列學說[5]。本研究主要探討氧自由基損傷這一病理機制。就腸道組織而言，缺血時腸道組織中三磷酸腺苷（ATP）含量急劇減少，生成大量次黃嘌呤，再灌注時內(nèi)皮細胞黃嘌呤脫氫酶轉(zhuǎn)化成黃嘌呤氧化酶產(chǎn)生大量自由基，導致組織嚴重損傷。其中MDA是氧自由基引發(fā)單位膜脂質(zhì)過氧化反應的產(chǎn)物之一，其含量高低可間接反映脂質(zhì)過氧化對膜系統(tǒng)的損傷程度[6]，故測定MDA水平可反映腸道組織細胞損傷程度。亦有大量研究表明，DAO是人類及哺乳動物腸黏膜細胞漿中具有高度活性的細胞內(nèi)酶，它與腸黏膜細胞的核酸和蛋白質(zhì)合成有關，在外周血中活性穩(wěn)定，是反映腸黏膜完整性的相對穩(wěn)定的生化指標，對腸黏膜損傷早期診斷敏感并且具有特異性[7-8]。因此，DAO可反映小腸黏膜損傷狀況。SOD是體內(nèi)重要的過氧化物酶，能及時地清除可能產(chǎn)生的氧自由基（OFR），從而減輕氧自由基對機體造成的損害，測定SOD的水平對評估機體抗氧自由基損傷的能力有一定價值。

異丙酚是一種新型靜脈麻醉藥，除麻醉作用外，研究發(fā)現(xiàn)異丙酚還可減少自由基的生成[1]。異丙酚在化學結構上與內(nèi)源性抗氧化劑維生素E和已知的抗氧化劑丁化羥基甲苯十分相似，其抗氧化作用的結構基礎也正是這種類似酚羥基的結構。Mur?phy等[9]研究證實異丙酚可切斷脂質(zhì)過氧化反應，與脂質(zhì)過氧化基形成一個穩(wěn)定的無活性產(chǎn)物，從而清除氧自由基。

本實驗結果顯示，失血性休克復蘇后大鼠血漿中DAO水平及腸道組織勻漿中MDA水平升高，腸道組織發(fā)生脂質(zhì)過氧化損傷，其完整性遭到破壞，而異丙酚處理組血漿中DAO水平及腸道組織勻漿中MDA水平有所下降，具有抗氧自由基損傷作用的SOD水平升高，表明異丙酚在短時間內(nèi)可通過減少氧自由基的生成，增強腸道組織抗氧自由基損傷能力，減輕失血性休克復蘇后腸道組織脂質(zhì)過氧化損傷程度，一定程度上使腸道黏膜組織保持完整性，起到腸道保護作用，對治療由于失血性休克復蘇后腸道黏膜屏障功能損傷而引發(fā)的全身炎癥反應甚至多器官功能障礙等具有一定臨床意義。但本實驗僅研究了短時間內(nèi)異丙酚對腸道的保護作用，其較長時間腸道保護作用尚需進一步研究。

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