甲狀腺乳頭狀癌組織學變型中ERα亞型和VEGF的表達*

金東嶺 席 豐 王 蕾 王廣邑 時志民

雌激素對靶組織的調節是通過雌激素受體（es?trogen receptor，ER）的介導完成已得到業界共識。ER分為α受體（ERα）和β受體（ERβ），但ERα與甲狀腺癌之間的關系尚未明確。有研究發現ERα和ERβ在多個器官的血管存在并對血管有廣泛的影響[1]。血管內皮生長因子（VEGF）作為腫瘤血管生成中最重要的刺激因子,已被證實是腫瘤侵襲轉移的關鍵因素。本研究旨在應用免疫組化SP法檢測部分甲狀腺乳頭狀腺癌（PTC）及甲狀腺腺瘤標本中ERα和VEGF的表達情況及其關系。

1 資料與方法

1.1 資料 選取2004年1月—2009年12月河北工程大學醫學院病理教研室資料完整的甲狀腺腫瘤石蠟包埋標本115例。其中PTC組59例，伴淋巴結轉移20例，無淋巴結轉移39例，男13例，女46例，年齡24～69歲，平均（40.55±7.89）歲；甲狀腺腺瘤組（腺瘤組）56例，男15例，女41例，年齡23～72歲，平均（39.64±6.46）歲。標本常規石蠟切片，HE染色，由兩位高年資病理醫師明確診斷并按照WHO甲狀腺腫瘤組織學分類標準做組織病理分型[2]，患者主要有典型PTC、濾泡亞型、彌漫硬化型、高細胞型、透明細胞型、嗜酸細胞型、乳頭狀微癌及實性型。全部患者術前均無化療、放療及免疫治療史。另取腺瘤旁經病理證實的正常甲狀腺組織30例為對照組，男10例，女20例，年齡25～65歲，平均（37.24±5.52）歲。3組年齡（F=1.724）和性別（χ2=1.333）差異無統計學意義（P>0.05）。

1.2 方法 所有標本均經4%的中性甲醛固定，常規脫水，石蠟包埋，連續4 μm切片，分別做HE和鏈酶親和素-過氧化物酶（streptavidin-peroxidase，SP）染色。兔源性ERα單克隆抗體購自Santa Cruz公司（濃度1∶100）。兔抗人VEGF單抗、SP檢測試劑盒以及DAB顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。SP染色按試劑盒說明操作，以3%H2O2室溫孵育5～10 min除去內源性過氧化物酶的活性，抗原熱修復，常規免疫組化標記，DAB顯色，蘇木素襯染，中性樹膠封片，顯微鏡觀察。用已知ERα、VEGF陽性的人乳腺導管浸潤癌標本作為陽性對照；用PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結果判斷及評分標準 在細胞膜、細胞漿或細胞核有棕黃色顆粒分布即為ERβ陽性細胞。定性觀察按細胞有無顯色及染色強度記分（a）：細胞無顯色為0分；淺黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。按顯色細胞的比例記分(b):0分為顯色細胞<10%；1分為10%～30%細胞顯色；2分為31%～60%顯色；3分為≥61%以上顯色。每例積分=a×b。按積分高低判定：陰性積分為0分；陽性積分≥1分。由2名高年資病理醫師逐一觀察同一切片以減少人為因素造成的判斷誤差，以2人觀察結果一致作為最終評定結果。

1.4 統計學處理 采用SPSS 10.0統計軟件進行統計學分析。符合正態分布的計量資料以±s表示，組間比較用F檢驗，計數資料組間比較采用χ2檢驗，相關分析采用Spearman秩相關，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ERα和VEGF的表達 ERα主要表達于部分正常甲狀腺腺上皮細胞、甲狀腺腺瘤和PTC的腫瘤細胞質和細胞核，VEGF陽性物質主要表達于甲狀腺腺瘤和PTC的腫瘤細胞及其間質血管內皮細胞的細胞質和細胞核，正常甲狀腺組織無VEGF表達，見圖1～3。3組間ERα和VEGF陽性表達差異均有統計學意義（均P<0.01），組間兩兩比較差異亦有統計學意義（P<0.05或P<0.01），見表1。

2.2 ERα和VEGF在PTC各組織類型中的表達及其與淋巴結轉移的關系 PTC中的彌漫硬化型、高細胞型ERα和VEGF的陽性表達較高，而淋巴結轉移較低，乳頭狀微癌陽性表達較低，見表2。

表1 各組甲狀腺組織中ERα和VEGF的表達 例（%）

2.3 甲狀腺癌中ERα和VEGF表達的相關性 PTC組ERα和VEGF的表達呈正相關（rs=0.514，P=0.033）。

3 討論

雌激素具有廣泛的生物學效應，其功能是通過其受體介導特定的靶基因轉錄以促進蛋白質的合成和器官的發育。有研究表明，ERα和ERβ在雌激素敏感器官可以對惡性腫瘤細胞增殖發揮不同的影響[3-4]。雖然甲狀腺并非雌激素經典的靶器官，但有研究表明ER與甲狀腺細胞的增殖有關[5]。本研究結果顯示，ERα表達主要定位于甲狀腺腺上皮或腺上皮起源的腫瘤細胞，其在正常甲狀腺、甲狀腺腺瘤和PTC中的表達率逐漸增高,表明在甲狀腺上皮細胞的增生乃至于癌變過程中，雌激素可能通過ERα的表達發揮著重要作用；轉移率較高的彌漫硬化型和高細胞型PTC中ERα陽性表達率顯著高于轉移率相對較低的乳頭狀微癌，表明ERα的過度表達可能與甲狀腺癌的演進和轉移有密切關系，這與最近報道的人乳腺癌的研究相似[6]。

表2 ERα和VEGF在PTC組織類型的陽性表達及淋巴結轉移情況 例（%）

有研究認為，雌激素有調節雌激素靶組織血管生成的作用[7]。Hyder等[8]研究表明ER與VEGF基因結合可激活其轉錄作用。雖然雌激素是否能夠調節甲狀腺組織的血管生成尚不能完全確定，但本研究表明PTC組VEGF高表達，其陽性表達率顯著高于對照組和腺瘤組，而且其在高細胞型和彌漫硬化型中的陽性表達也較高，PTC中ERα的表達與VEGF的表達呈正相關，提示雌激素可能通過ERα調節VEGF基因轉錄，從而對良性和惡性甲狀腺腫瘤的血管的生成發揮一定的促進作用。

綜上所述，ERα的過度表達可促進甲狀腺上皮細胞的增生和分化及其甲狀腺腫瘤的血管生成，從而與甲狀腺癌的發生發展以及轉移有關。

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