苯磺酸氨氯地平片的有關物質檢查方法研究

秦書德，馬曉偉，陳 靜，郭興杰

苯磺酸氨氯地平是目前臨床應用廣泛的一線抗高血壓藥物。國家藥品標準中已對苯磺酸氨氯地平片的含量均勻度以及溶出度作出了相關質量規范，但無有關物質檢查標準[1]。筆者建立了苯磺酸氨氯地平片有關物質檢查方法，并利用該方法對5個廠家生產的市售苯磺酸氨氯地平片進行了檢查，現將結果報道如下。

1 儀器與試藥

LC－10A型高效液相色譜儀，配備SPD－10A型紫外可見光檢測器、Solution色譜工作站(日本島津公司);BS110S型電子天平(德國Sartorius公司);As3120B型超聲波清洗器(天津奧特賽恩司儀器有限公司);HHS 21－4型電熱恒溫水浴鍋(上海醫療器械五廠)。苯磺酸氨氯地平對照品(中國藥品生物制品檢定所);苯磺酸氨氯地平片(共5個廠家產品，批號分別為20100122，20100106，20100215，20100129，20100301);甲醇、水以及其他試劑均為色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Diamonsil C18柱(200 mm×4.6 mm，5μm);流動相:甲醇－30 mmol/L磷酸二氫鉀溶液(60∶40);流速:1.0 mL/min;檢測波長:238 nm;柱溫:室溫;進樣量:20μL。在上述色譜條件下，氨氯地平峰與相鄰雜質峰的分離度大于1.5，理論板數按氨氯地平計算大于1 000。苯磺酸氨氯地平對照溶液連續進樣6次，峰面積的RSD為1.0%。

2.2 溶液制備

圖1 破壞性試驗高效液相色譜圖

圖2 高效液相色譜圖

取本品10片，研細，精密稱取片劑粉末適量(約相當于氨氯地平5 mg)，置25 mL量瓶中，用適量流動相溶解，超聲處理30 min，放冷至室溫，用流動相稀釋至刻度，濾過，得到氨氯地平質量濃度為200μg/mL的供試品溶液。取供試品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，得質量濃度為2μg/mL的對照溶液。

2.3 專屬性試驗

2.3.1 空白試驗

按照處方比例配制空白輔料溶液，取此溶液20μL進樣，記錄色譜圖。結果表明，空白輔料對測定無干擾(圖1 A)。

2.3.2 破壞性試驗

酸、堿破壞:分別取片劑粉末適量(約相當于氨氯地平1 mg)，置10 mL試管中。酸破壞條件為0.1 mol/L的鹽酸溶液，100℃水浴加熱20 min。堿破壞條件為0.1 mol/L氫氧化鈉溶液，100℃水浴加熱20 min。再分別用相應濃度的堿或酸中和破壞溶液，流動相定容至5 mL，濾過，作為供試品溶液。色譜圖見圖1 B和圖1 C。

光照破壞:取片劑粉末，用水配制成質量濃度約為200μg/mL的氨氯地平溶液，于自然光下光照96 h，濾過，作為供試品溶液。色譜圖見圖1 D。

氧化破壞:取片劑粉末，置10 mL試管中，加入3%過氧化氫0.5 mL，100℃水浴 20 min，用流動相定容至 5 mL，搖勻，得質量濃度為200μg/mL的氨氯地平氧化破壞溶液，濾過，作為供試品溶液。色譜圖見圖1 E。

高溫破壞:取片劑粉末，在100℃下加熱1 h(樣品粉末微黃，略黏附于管壁)，精密稱取適量，用流動相溶解制成氨氯地平質量濃度約為200μg/mL的溶液，濾過，作為供試品溶液。色譜圖見圖1 F。

2.4 方法學考察

線性關系考察:精密稱取苯磺酸氨氯地平對照品適量，用流動相溶解并稀釋制成氨氯地平質量濃度為7.10μg/mL的溶液。精密量取上述溶液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置 10 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，得到氨氯地平系列對照品溶液。取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖峰面積。以峰面積(A)為縱坐標、質量濃度(C)為橫坐標繪制標準曲線，得線性回歸方程 A=28 169 C+1968，r=0.9997(n=5)。結果表明，氨氯地平溶液質量濃度在0.71 ～3.57μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

檢測限確定:取氨氯地平系列對照品溶液，逐級稀釋，注入液相色譜儀，當信噪比為3時，測得氨氯地平的最低檢測限為0.4 ng;當信噪比為10時，測得氨氯地平的定量限為1.7 ng。

穩定性試驗:將對照品溶液在室溫下避光放置，分別于0，2，4，6，8 h時進樣，測得峰面積的 RSD為1.4%(n=5)。結果表明，溶液在室溫下避光放置8 h穩定。

重復性試驗:取批號為20100129的片劑，按2.2項下方法平行制備6份供試品溶液，依法測定，計算有關物質含量。結果的RSD為1.8%(n=6)，表明方法重復性良好。

2.5 有關物質檢查

取本品10片，研細，用流動相制成每1 mL中約含200μg氨氯地平的溶液，作為供試品溶液;精密量取適量，用流動相制成每1 mL中含2μg氨氯地平的溶液，作為對照溶液。精密量取對照溶液20μL，注入液相色譜儀，調節儀器檢測靈敏度，使主成分的峰高約為滿量程的10% ～20%;再精密量取供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。供試品溶液的色譜圖中如有雜質峰，各雜質峰峰面積之和不得大于對照品溶液主峰面積。按有關物質檢查方法對市售5個廠家生產的苯磺酸氨氯地平片進行了檢查，有關物質含量分別為0.08%，0.79%，0.27%，0.61%，0.21%，均符合規定。批號為20100106的片劑的有關物質檢查色譜圖見圖2。

3 討論

以高效液相色譜法為分離手段，光電二極管陣列檢測器為檢測手段，考察苯磺酸氨氯地平的紫外吸收特性。結果表明，在200～400 nm波長范圍內，苯磺酸氨氯地平在208，238，360 nm波長處有最大吸收值。360 nm波長處的吸收值較小，靈敏度較低，不適合作為有關物質的檢測波長;208 nm波長靠近紫外吸收末端，試驗中空白輔料在此波長下有干擾。故選擇238 nm作為檢測波長。專屬性試驗結果表明，在建立的色譜條件下，氨氯地平可與各破壞試驗產生的降解產物和樣品中的相關雜質得到良好分離，方法專屬性良好。

在本研究中，采用不加校正因子的主成分自身對照法進行有關物質檢查，可以比較直觀地反映有關物質含量，符合藥典規定?！痘瘜W藥物雜質研究的技術指導原則》規定，最大日劑量為10～100 mg的藥物制劑，其雜質的質控限度可定為0.5%或200μg(取最小值)。根據測定結果，5個廠家苯磺酸氨氯地平片的有關物質含量最高為0.79%，考慮到實際生產情況，在進行苯磺酸氨氯地平片的質量研究時，將有關物質檢查的限度定為1.0%。

[1]WS1－ (X －010)－2001Z，衛生部頒藥品標準[S].