PCR技術在乙肝病毒感染檢測中的應用

韓建英

山西省呂梁市人民醫院分子生物實驗室，山西 呂梁 033000

1 資料和方法

1.1 一般資料

2009年的202份血清標本，其中有16份為急性乙肝患者的血清選取了某醫院標本，有30份為慢性乙肝患者的血清標本，6份為重度乙肝患者的血清標本，16份為原發性肝癌患者血清標本，有16份為肝硬化患者的血清標本，有64份為其他患者的血清標本，有54份為健康體檢者的血清標本。

1.2 方法

本研究所用的儀器是美國的PE7700自動熒光PCR儀，試劑是HBV－FQ－PCR試劑，以及ELISA試劑。

1.2.1 HBV—DNA檢測

熒光光譜分析儀能夠測得定量的結果，反應的是原始模板的量，FQ－PCR儀能夠通過全程的動態監測得出一個樣品實際擴增曲線來找到PCR擴增的對數期，并對標準樣品的對數期進行比較，從而得出每一樣品的特定模板DNA的起始拷貝數/ml，定量的范圍是0－1010/ml，定量的準確度是100%。

1.2.2 具體的操作過程

把標本進行洗滌液化，用12000r/min的轉速離心5分鐘，去上清液，采用常規堿裂解法來對HBV—DNA進行提取，在各個反應管中放入PE7700自動熒光儀，并按下條件擴增732min預變性，然后按下列條件擴增，也就是按9345s－55120s，一共進行40個循環，待反應結束之后，計算機會自動把定量的結果計算出來。對于肝炎標志物ELISA的原理和步驟直接按照試劑的說明書進行就可以了。

1.2.3 統計學方法

采用的是SAS統計軟件來進行統計學處理。

2 檢測結果

本研究中202份血清標本用FQ－PCR檢測HBV—DNA的結果與檢測結果的比較如下。

組別 ELISA陽性 例數 陽性數 (%)陽性樣品定值拷貝數 定量測值范圍拷貝數1 HbsAg HbeAg HbcAb 48 48(100%) 7.4×108 1.4×106－7.4×109 2 HbsAg HbeAb HbcAb 64 30(46.9%) 1.1×107 0－8.1×107 3 HbsAg HbeAg 20 10(50%) 2.4×106 0－7.0×104 4 HbsAb HbcAb 4 2(50%) 4.0×103 0－4.0×102 5 HbsAg HbcAb 2 0(0) —— ——6 HbsAb 28 2(7.1%) 5.0×104 0－5.0×104 7全陰性 36 2(5.6%) 4.9×105 0－4.9×105合計 202 94(46.5%)標本來源 例數 陽性率 (%)陽性樣品定制平均值 定量測值范圍急性乙肝患者 16 8(50%) 1.6×106 0－3.7×106慢性乙肝患者 30 22(73.3%) 7.0×108 0－7.0×109重度乙肝患者 6 4(66.7) 7.2×104 0－8.1×105肝癌患者 16 16(100%) 3.1×107 0－8.1×108肝硬化患者 16 10(62.5%) 1.3×107 0－8.1×107其他患者 64 10(15.6%) 1.9×107 0－8.1×107健康體檢者 54 0(0) 0 0合計 202 70(36.7%)

從第1、第2、第6以及第7組的結果可以看出，該試劑盒相對于乙肝血清免疫指標的假陽性和假陰性率比較低，靈敏度比較高。另外，第1組陽性組平均HBV—DNA拷貝數為7.4×108，第2組陽性組拷貝數為1.1×107，第6組陽性組拷貝數為5.0×104，可以知道FQ－PCR檢測HBV—DNA的結果能夠反映病程的發展。

本研究中202份血清標本用FQ－PCR檢測HBV—DNA的結果與臨床的關系如上表。

從中可以看出，16例急性乙肝患者血清標本FQ－PCR檢測，8例為陽性，陽性率為50%。30例慢性乙肝患者，16例肝癌患者，6例重度乙肝患者，16例肝硬化患者FQPCR檢測，其陽性率在62.5%至100%之間，要明顯比其他患者組來得高，這就表明了FQ－PCR檢測HBV—DNA的結果可以用來指導臨床。

3 結語

對于ELISA方法來講，是對DNA的表達物及其應答系統進行檢測的，PCR是HBV—DNA最敏感的方法，能夠結合酶動力學的特點來獲得DNA模板的準確定量結果。從本文的研究中，可以看出FQ－PCR能夠準確的反應病毒的復制情況，為HbsAg、HbeAb、HbcAb患者提供了比較有價值的診斷指標。

［1］徐明華，陸渝琳.1 034份血清乙型肝炎病毒前S1抗原與HBV－M、HBV－DNA檢測結果分析［J］.重慶醫學，2005.

［2］潘國慶.聚合酶鏈式反應在臨床醫學診斷中的應用［J］.青海科技，2005年01期.