柔筋方對緊張型頭痛模型大鼠血漿及腦組織NO、NOS的影響

胡志強，吳宏赟，全 偉

(1山東中醫藥大學附屬醫院，濟南250000;2山東中醫藥大學)

緊張型頭痛是最常見的原發性頭痛，其病因和發病機制未完全明了，而近年研究表明，一氧化氮(NO)在緊張型頭痛的病理生理過程中起重要作用。Ashina等［1］研究發現，硝酸甘油(NO 前體)可能觸發慢性緊張型頭痛患者內源性NO的生成，從而激活血管周圍的傳入神經纖維。我們前期研究發現，NO及一氧化氮合酶(NOS)與緊張型頭痛密切相關，通過影響頭區肌肉和皮膚的痛閾值及頭區肌筋膜痛敏感性參與緊張型頭痛的發作。臨床資料表明，柔筋方治療緊張型頭痛的療效確切，能有效緩解患者的頭痛癥狀，降低頭痛指數。2010年9～12月，我們觀察了柔筋方對緊張型頭痛大鼠模型血漿和腦組織中NO及NOS含量的影響，探討柔筋方對緊張型頭痛鎮痛、鎮靜作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料 電子天平，大鼠固定器，大鼠手術臺，BNI-A精密電子天平(臺灣櫻花)秒表，玻璃勻漿器，721分光光度計(上海第三分析分析儀)，ATP為廣東天豐藥業有限公司出產(批號:090303)，臨用前用生理鹽水配置成1 μmol/L的溶液;10%水合氯醛(購于山東省齊魯醫院兒童醫院);NO試劑盒(南京建成建成生物工程研究所)。Wistar大鼠40只，雌雄各半，體質量(254±28)g，購自山東大學實驗動物中心。動物飼養于SPF級環境。動物分籠飼養，自由飲水。

1.2 方法

1.2.1 灌胃藥物制備 柔筋方煎劑按成人每日服用劑量:白芍40 g、炙甘草10 g、木瓜15 g、天麻12 g、卷柏10 g、羌活10 g，以蒸餾水煎煮30min，提取2次，再合并煎液，濃縮成含生藥濃度為1 g/ml的混懸液，避光貯于4℃冰箱中備用。復方羊角顆粒按成人每日服用劑量16 g/d，以蒸餾水溶解，配置成0.165 g/ml的混懸液，避光貯于4℃冰箱中備用。

1.2.2 模型制作及干預 所有大鼠正常飼養15 d后開始實驗。所有動物隨機分為四組各10只，對照組頸部注射生理鹽水，模型組、柔筋方組及羊角顆粒組均頸部雙側半棘肌局部注射ATP制作緊張型頭痛模型。柔筋方組予柔筋方煎劑灌胃，羊角顆粒組予復方羊角顆粒溶液灌胃，均每天1 ml/100 g，每日1次，連續用藥1周。對照組、模型組均給予等容積的動物飲用水。

1.2.3 NO和NOS含量的檢測 于末次給藥后1 h用分光光度法測定NO濃度，比色法測定NOS。操作均按試劑盒說明書操作。

1.3 統計學方法 采用SPSS16.0統計軟件。計量數據以±s表示。各組NO、NOS含量先進性正態分布和方差齊性檢驗，各組間進行單因素方差分析，并作LDS檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

各組腦組織及血漿中NO、NOS的表達見表1。

表1 各組腦組織及血漿中NO、NOS的表達(±s)

表1 各組腦組織及血漿中NO、NOS的表達(±s)

注:與模型組相比，*P ＜0.01;與柔筋方組相比，#P ＜0.01

組別 腦組織NO(mmol/L)NOS(U/gprpt)血漿NO(mmol/L)NOS(U/gprpt)模型組 25.88 ±0.79 1.55 ±1.26# 52.08 ±2.60#17.91 ±0.92#羊角顆粒組 21.38 ±0.75*#1.22 ±1.00* 37.09 ±2.09*#15.30 ±0.62*#柔筋方組 16.10 ±0.48*1.21 ±0.97* 33.09 ±1.27*13.58 ±1.2*對照組 16.47 ±0.64*1.02 ±0.57* 32.87 ±1.88*13.24 ±0.68*

3 討論

NO是一種非經典的新型遞質和信息傳遞分子，它參與機體的許多生理過程和生命活動，如細胞信號傳遞、神經修復、疼痛調制等［2］。NO主要由酶學途徑生成:在NOS催化下，由左旋精氨酸(L-Arg)末端胍基上的一個氮原子氧化生成NO。一般認為NOS是生成內源性NO的最主要限速物質。NO引起頭痛的機制可能是:①在中樞神經系統中起神經元間信使物質作用，同時介導谷氨酸等興奮性氨基酸細胞毒性作用，舒張腦血管，產生疼痛。②使降鈣素基因相關肽從周圍血管神經末梢中釋放出來，并在神經源性炎癥反應中起作用。③與活化的鳥苷酸環化酶的鐵離子結合，誘導環磷酸鳥苷增加，環磷酸鳥苷作為第二信使和神經遞質而激活三叉神經節，使局部神經肽—降鈣素基因相關肽反復釋放。④通過激活平滑肌細胞內可溶性鳥苷酸環化酶，提高環磷酸鳥苷水平，從而松弛血管平滑肌，產生血管舒張作用，引起血管擴張性頭痛。⑤激活腦血管周圍三叉神經末梢，使血管周圍組織產生血管性多肽，導致無菌性炎癥。⑥直接影響血管旁感覺神經，腦神經元對NO毒性反應極脆弱，從而直接激活感覺神經纖維。⑦可直接通過前列腺素調節機制使傷害性感覺神經元的活動增加。⑧在頭痛的痛覺傳遞中起易化作用，產生和維持頭痛的中樞敏化。

柔筋方中的白芍、甘草、天麻等藥物均具有鎮痛、鎮靜的作用。芍藥與甘草配伍具有明顯鎮痛抗炎作用，與抑制多種致痛因子、炎性因子有關，其鎮痛部位既在外周神經末梢，亦可能在中樞神經，其鎮痛作用機制可能與NO有關［3］。葉紅等［4］通過扭體法發現具有良好的鎮痛作用。實驗研究發現，野木瓜片對多種疼痛，包括物理性致痛(熱板法)、化學性致痛(扭體法)、大鼠三叉神經痛模型均有顯著的鎮痛作用［5］。秦彩玲等［6］對羌活的鎮痛作用進行的研究顯示，紫花前胡苷為中藥羌活鎮痛作用的有效單體化合物。此外，卷柏也有較明顯的鎮痛作用，而且毒性小，無成癮性，鎮痛作用特點為起效慢，持續時間長［7］。我們以往的研究證實，復方芍甘柔筋湯能緩解顱周肌肉緊張與壓痛，降低血漿中縮血管物質的濃度［8］。

實驗中發現緊張型頭痛模型大鼠腦組織及血漿中NO、NOS含量均異常升高;柔筋方湯劑和復方羊角顆粒均能降低腦組織中NO、NOS含量;柔筋方湯劑相較于復方羊角顆粒更能有效的降低緊張型頭痛模型大鼠血漿中NO、NOS含量及腦組織NO含量，雖然腦組織NOS含量兩組無統計學差異，但柔筋方湯劑亦低于復方羊角顆粒，可能與樣本量偏少有關。因此柔筋方湯劑可能通過調節體內血漿、腦組織中NO、NOS的含量對緊張型頭痛發揮作用。但柔筋方湯劑調節血漿、腦組織中NO、NOS的具體機制，尚有待研究。

［1］Ashina M，Simonsen H，Bendtsen L，et al.Glyceryl trinitrate may trigger endogenous nitric oxide production in patients with chronic tension-type headache［J］.Cephalalgia，2004，24(11):967-972.

［2］朱長庚.神經解剖學［M］.北京:人民衛生出版社，2002:351-358.

［3］鄢順琴，吳愫清，鳳良元，等.芍藥甘草湯的鎮痛作用機制［J］.安徽中醫學院學報，2001，34(6):43.

［4］葉紅，沈映君，汪鋆植，等.天麻種子、種麻及商品麻的藥理作用比較［J］.時珍國醫國藥，2003，14(9):3.

［5］張孝友，譚毓治，趙詩云.野木瓜片鎮痛抗炎作用的實驗研究［J］.廣東藥學院學報，1998，14(3):195-198.

［6］秦彩玲，張毅，劉婷，等.中藥羌活有效成分的篩選試驗［J］.中國中藥雜志，2000，25(10):639.

［7］陳美琳，傅正中，李嚴，等.卷柏復方鎮痛研究［J］.中成藥研究，1986，(6):25.

［8］胡志強，侯書偉，田財軍，等.復方芍甘顆粒治療緊張型頭痛療效觀察［J］.山東中醫雜志，2007，25(12):810-812.