子宮內膜癌組織中脂聯素、抵抗素的表達及意義

李 倪，李建文，朱爭艷

(1天津醫科大學三中心臨床學院，天津300170;2天津市第三中心醫院;3天津市第三中心醫院人工細胞重點實驗室)

子宮內膜癌是女性生殖器惡性腫瘤之一，多見于老年婦女，近年來隨著生活水平的提高、人口的老齡化、激素替代治療的廣泛應用，其發病呈年輕化趨勢。2007年1月～2010年6月，我們采用免疫組化法檢測了子宮內膜癌組織標本中脂聯素、抵抗素的表達，探討其在子宮內膜癌發生發展中的作用。

1 材料與方法

1．1 材料 選擇我院手術切除的子宮內膜癌組織標本40份(內膜癌組)，均經病理檢查確診，且術前未行放化療及6個月未用激素替代治療;其中子宮內膜腺癌36例、漿液性癌2例、腺鱗癌1例、透明細胞癌1例;FIGO 分期(2009)［1］Ⅰ、Ⅱ期33例，Ⅲ、Ⅳ期7例;腫瘤為高分化18例，中分化12例，低分化10例。另取同期住院手術病理確診為不典型增生標本30份(增生組)及正常增殖期子宮內膜標本30份(正常組)。各組一般資料無統計學差異。主要試劑:脂聯素兔抗人多克隆抗體及抵抗素兔抗人多克隆抗體均購自北京博奧森生物工程有限公司，免疫組化試劑盒及DAB試劑購自武漢博士德生物工程有限公司。

1．2 脂聯素、抵抗素表達檢測 所有標本均經中性甲醛固定、石蠟包埋、4 μm切片用于染色。采用乳腺癌組織和已知的組織作為陽性對照，用PBS替代一抗作為陰性對照。切片在70℃下烘烤1 h后，經二甲苯脫蠟及梯度乙醇(100%、95%、80%和75%)水化，0．01 M的檸檬酸鈉緩沖液(pH 6．0)熱修復組織切片，冷卻至常溫后滴加3%H2O2常溫孵育10 min，正常山羊血清封閉15 min，按步驟分別滴加一抗工作液(濃度均為1∶100稀釋)，生物素化二抗及DAB顯色，常規蘇木素復染，氨水返藍，脫水，透明，封片后顯微鏡下觀察。結果判斷:低倍鏡下細胞質內出現棕黃色顆粒或片狀為陽性表達。高倍鏡視野(400×)攝像，IPP5．1計算該視野的積分光密度(IOD)，觀察10個視野取平均值。

1．3 統計學方法 采用SPSS17．0統計軟件，計量資料均以±s表示，多組間均數的比較采用單因素方差分析，相關性分析采用Spearman秩相關分析。檢驗水準 α =0．05。

2 結果

2．1 脂聯素、抵抗素表達 見表1。

表1 各組脂聯素、抵抗素表達比較(IOD值，±s)

表1 各組脂聯素、抵抗素表達比較(IOD值，±s)

注:與正常組比較，*P ＜0．01

組別 n 脂聯素 抵抗素內膜癌組 40 28．37 ±8．51* 22．22 ±5．59*增生組 30 29．03 ±8．03* 15．81 ±5．06*正常組30 36．40 ±9．98 10．49 ±4．80

2．2 脂聯素、抵抗素表達與子宮內膜癌臨床病理參數的關系 見表2。

2．3 相關性分析 子宮內膜癌組織中的脂聯素的表達與抵抗素的表達呈負相關(r=－0．337，P＜0．01)。

3 討論

脂聯素也被稱為ACRP30、apM1、adipoQ或GBP2，是一種新發現的脂肪分泌的內源性生物活性多肽或蛋白質。其通過與其受體結合而發揮特異的生物學效應，具有增加脂肪酸氧化，抑制肝糖原的再生，提高葡萄糖攝取量、改善胰島素抵抗、抗動脈粥樣硬化、抗炎、抗血管生成的作用。現有流行病學資料顯示，脂聯素水平與多種激素依賴性腫瘤的發生呈負相關，如乳腺癌、結直腸腫瘤、子宮內膜癌、前列腺癌、胃癌。Takemura等［2］首次用原位雜交的方法證明正常子宮內膜組織在月經周期中均有脂聯素及其受體的表達，脂聯素在增生早期的表達高于其他月經時期。本研究內膜癌組及增生組的脂聯素表達水平明顯低于正常組，提示低的脂聯素水平可能與子宮內膜癌發生、發展有關。此與體外研究發現脂聯素能直接抑制子宮內膜癌細胞系HEC-1及RL95-2 增殖，誘導其凋亡一致［3］。Rzepka-Górska 等［4］研究子宮內膜癌患者血漿脂聯素水平時發現，脂聯素水平與腫瘤的分期無關，而與腫瘤的分化程度有關。張麗志等［5］用ELISA法檢測64例子宮內膜癌患者血漿脂聯素水平，發現脂聯素水平與腫瘤的分化、分級均有關。本研究也發現，脂聯素表達與子宮內膜癌分化程度及FIGO分期均有關，這可能與本實驗樣本量少，組織類型單一有關，有待進一步進行大量本、多中心的研究。

表2 脂聯素、抵抗素表達與子宮內膜癌臨床病理參數的關系(±s)

表2 脂聯素、抵抗素表達與子宮內膜癌臨床病理參數的關系(±s)

臨床病理參數 n 脂聯素 P值 抵抗素 P值分化程度高分化 18 34．44 ±6．20 17．29 ±3．02中分化 12 27．35 ±5．85 ＜0．05 24．72 ±3．42 ＜0．05低分化 10 18．66 ±4．41 28．10 ±2．93 FIGO分期Ⅰ、Ⅱ期 33 30．83 ±7．14 ＜0．05 21．06 ±5．27 ＞0．05Ⅲ、Ⅳ期7 16．75 ±2．76 27．71 ±3．47

抵抗素是Ghosh等［6］通過小鼠研究治療糖尿病藥物噻唑烷二酮類時發現的一種新的脂肪細胞因子，在白色脂肪組織中特異性表達。而人的抵抗素在白色脂肪組織中幾乎不表達，主要表達于單核、巨噬細胞。人類抵抗素基因位于第19號染色體，以二聚體形式分泌入血循環，可減弱脂肪細胞、肝細胞、骨骼肌細胞對胰島素的敏感性，誘導胰島素抵抗，導致空腹血糖升高，糖耐量降低，高胰島素血癥。而高胰島素血癥可能導致高雄激素血癥，進而增加癌癥的風險。且現有研究表明，抵抗素與乳腺癌、結直腸腫瘤、前列腺癌的發生有關［7］。本研究內膜癌組及增生組的抵抗素表達水平明顯高于正常組，表明抵抗素在子宮內膜癌的病理發展中起一定作用;抵抗素表達與腫瘤分化程度相關，與腫瘤分期無關，這與體外研究抵抗素能誘導前列腺癌細胞的增殖，在高分化前列腺癌中表達水平明顯高于低分化癌一致［8］。但有研究顯示，高水平抵抗素能誘導絨毛膜癌細胞的侵襲力，且能促進血管內皮細胞的生成［9］。這可能與本研究樣本量少，組織類型單一有關。本研究還顯示，子宮內膜癌中兩者表達呈負相關。

總之，脂聯素可能在子宮內膜癌的發生、發展中起抑制作用，而抵抗素可能起促進作用。

［1］Creasman W．Revised FIGO staging for carcinoma of the endometrium［J］．Int J Gynaecol Obstet，2009，105(2):109．

［2］Takemura Y，Osuga Y，Yamauchi T，et al．Expression of adiponectin receptors and its possible implication in the human endometrium［J］．Endocrinology，2006，147(7):3203-3210．

［3］Cong L，Gasser J，Zhao J，et al．Human adiponectin inhibits cell growth and induces apoptosis in human endometrial carcinoma cells，HEC-1-A and RL95-2［J］．Endocr Relat Cancer，2007，14(3):713-720．

［4］Rzepka-Górska I，Bedner R，Cymbaluk-Poska A，et al．Serum adiponectin in relation to endometrial cancer and endometrial hyperplasia with atypia in obese women［J］．Eur J Gynaecol Oncol，2008，29(6):594-597．

［5］張麗志，溫克，劉榮，等．子宮內膜癌患者血清脂聯素水平變化及意義［J］．山東醫藥，2010，50(26):4-5．

［6］Ghosh S，Singh AK，Aruna B，et al．The genomic organization of mouse resistin reveals major differences from the human resistin:functional implications［J］．Gene，2003，305(1):27-34．

［7］Nakajima TE，Yamada Y，Hamano T，et al．Adipocytokines as new promising markers of colorectal tumors:adiponectin for colorectal adenoma，and resistin and visfatin for colorectal cancer［J］．Cancer Sci，2010，101(5):1286-1291．

［8］Kim HJ，Lee YS，Won EH，et al．Expression of resistin in the prostate and its stimulatory effect on prostate cancer cell proliferation［J］．BJU Int，2011，108(2 Pt 2):E77-83．

［9］Simone ND，Nicuolo FD，Sanguinetti M，et al．Resistin regulates human choriocarcinoma cell invasive behaviour and endothelial cell angiogenic processes［J］．J Endocrinology，2006，189(3):691-699．