卵巢漿液性囊腺癌組織中Survivin和ki67蛋白的表達及意義

杜東梅，紀曉花

(河北省廊坊衛生職業學院，河北廊坊065001)

卵巢漿液性囊腺癌是常見的原發性卵巢惡性腫瘤，其惡性程度高，5年生存率僅為25% ～30%。2009年7月～2011年6月，我們采用流式細胞術(FCM)檢測了Survivin和ki67蛋白在卵巢漿液性囊腺癌組織中的表達，進一步探討卵巢漿液性囊腺癌的發生機制。

1 材料與方法

1．1 材料 選擇廊坊市人民醫院病理科手術切除的卵巢漿液性囊腺癌組織28份(囊腺癌組)，患者年齡24～75歲，平均50．08歲。均經病理證實診斷，術前均未接受放化療;按照FIGO 2000年修訂的國際婦產科聯盟分期標準，Ⅰ、Ⅱ期12例，Ⅲ、Ⅳ期16例;分化程度為高中分化9例，低分化19例;有淋巴結轉移者10例。另選漿液性囊腺瘤10份(囊腺瘤組)，正常卵巢組織5份(正常組)。三組一般資料無統計學差異。

1．2 Survivin、ki67 蛋白表達檢測 單細胞懸液制備:用石蠟切片機切取組織切片，每例石蠟組織切取50 μm厚的切片10片，置于10 ml的試管中，用二甲苯脫蠟(置于37℃的恒溫箱)24 h，依次用100%、95%、70%和50%的酒精梯度水化，各20 min。然后加入蒸餾水5 ml，將組織置于120目不銹鋼網上，下置一平皿，用眼科剪刀將組織剪碎，用眼科鑷子輕搓組織，邊搓邊用生理鹽水沖洗，直至將組織搓完為止。將平皿中的混懸液用300目銅鋼網濾去組織團塊，收集濾下的細胞懸液。以1 000 r/min的轉速離心沉淀4 min，棄去上清液，得到單分散細胞懸液，備用。細胞的免疫熒光標記采用間接免疫熒光標記法。Survivin和ki67蛋白表達定量分析以熒光指數(FI)表示蛋白的相對含量，FI=樣品蛋白表達的平均熒光強度/正常對照樣品的平均熒光強度。

1．3 統計學方法 采用SAS8．1統計軟件，方法采用t檢驗、方差分析、非參數檢驗，計量數據以±s表示。檢驗水準α=0．05。

2 結果

2．1 Survivin和ki67蛋白表達 見表1。

表1 各組Survivin和ki67蛋白表達比較(FI值，±s)

表1 各組Survivin和ki67蛋白表達比較(FI值，±s)

注:與正常組比較，*P ＜0．05;與囊腺瘤組比較，△P ＜0．05

組別 n Survivin蛋白 ki67蛋白囊腺癌組 28 1．79±0．35＊△ 2．53±0．54＊△囊腺瘤組 10 1．36 ±0．17* 1．89 ±0．25*正常組5 1．00 ±0．20 1．00 ±0．38

2．2 Survivin和ki67蛋白表達與漿液性囊腺癌臨床病理特征的關系 見表2。

表2 Survivin和ki67蛋白表達與漿液性囊腺癌臨床病理特征的關系(FI值，ˉx ±s)

2．3 Survivin與ki67蛋白表達的相關性 漿液性囊腺癌組織中Survivin與ki67蛋白的表達量呈正相關(r=0．43，P ＜0．05)。

3 討論

卵巢漿液性癌是發病隱匿，多數病例發現時已是中晚期。因此，探究卵巢癌發生、發展的機制對于卵巢癌的早期診斷和評價腫瘤的惡性程度及預后有重要意義。

研究證實，與腫瘤細胞凋亡密切相關的蛋白—凋亡抑制蛋白過度表達引起的細胞凋亡受阻與腫瘤的發生、發展有密切關系。Survivin是凋亡抑制蛋白家族的成員之一，主要表達于胚胎及未完全分化的器官，在除胸腺、睪丸、胎盤外的終末分化的成人組織中無表達。而在肝癌、宮頸癌、膀胱癌、腎癌等多種惡性腫瘤的研究中均顯示其表達增強。Erkanli等［1］采用免疫組化證實，子宮內膜癌組織中Survivin表達呈陽性，且高于子宮內膜不典型增生和增殖期子宮內膜，但與子宮內膜癌的肌層浸潤、分化程度和淋巴結轉移無關。Liguang等［2］用反轉錄PCR技術檢測卵巢組織中 Survivin mRNA表達，結果顯示Survivin mRNA在卵巢交界性腫瘤和惡性腫瘤中表達增高，且其表達與卵巢癌的臨床分期、組織分化及淋巴結轉移相關。以上結果表明Survivin的異常表達可能與腫瘤的發生、發展過程關系密切。本研究囊腺癌組Survivin蛋白表達量明顯高于囊腺瘤組及正常組，提示Survivin在卵巢癌的發生中起一定的作用;Survivin蛋白表達量與臨床分期相關，提示Survivin可作為評價卵巢漿液性囊腺癌的惡性程度及預后的一個重要指標。

ki67是一種與細胞周期相關的增殖細胞核抗原，表達于除G0、G1早期以外的增殖細胞的各期，與PCNA指數、DNA倍數含量等表示細胞增殖的指標相比，ki67不受生長因子誘導，半衰期短，且背景干擾小，因此得到廣泛應用。在多種惡性腫瘤中可見ki67的高表達。Salakou等［3］對手術切除的重癥肌無力患者的胸腺組織進行研究，結果顯示ki67在胸腺癌中的表達增高，其表達高于胸腺瘤、胸腺增生組織。李秀娟等［4］研究顯示，ki67在卵巢癌中的表達顯著高于卵巢良性上皮性腫瘤;并且晚期卵巢癌ki67表達顯著高于早期，提示晚期卵巢癌具有更高的增殖活性，惡性度高。本研究囊腺癌組ki67蛋白表達量明顯高于囊腺瘤組及正常組，提示ki67表達可作為判斷卵巢腫瘤良惡性的參考;ki67蛋白表達量與臨床分期相關，提示ki67表達可作為評價卵巢癌惡性程度及預后的指標。Survivin蛋白的表達量與ki67蛋白的表達量呈正相關，提示Survivin、ki67蛋白在卵巢癌的發生、發展中有協同作用。

總之，Survivin與Ki67在卵巢癌的發生、發展中起促進作用。

［1］Erkanli S，Bolat F，Kayaselcuk F，et al．COX-2 and survivin are overexpressed and positively correlated in endometrial carcinoma［J］．Gynecologic Oncology，2007，104(2):320-325．

［2］Liguang Z，Peishu L，Hongluan M，et al．Survivin expression in ovarian cancer［J］．Experimental Oncology，2007，29(2):121-125．

［3］Salakou S，Tsamandas AC，Bonikos DS，et al．The potential role of bcl-2，bax，and ki67 expression in thymus of patients with myasthenia gravis，and their correlation with clinicopathologic parameters［J］．Eur J Cardiothorac Surg，2001，20(4):712-721．

［4］李秀娟，廖琪，孫中華，等．ki67和Survivin在卵巢上皮性癌中的表達及意義［J］．中國全科醫學，2009，12(8B):1534-1535．