乳腺癌患者外周血CD40、CD40L的表達及意義

孫宏治，宮 建，王 巍，李 晴，李 強，楊 濤，李東升

(1遼寧醫學院附屬第一醫院，遼寧錦州121001;2沈陽藥科大學;3遼寧醫學院附屬第三醫院)

CD40、CD40L作為B、T淋巴細胞激活必不可少的組成部分之一，在特異性免疫應答中居于重要地位，與腫瘤免疫亦密切相關［1］，但乳腺癌患者外周血CD40、CD40L的表達水平及其與臨床病理的關系目前尚不明確。2010年1月～2011年1月，我們觀察了乳腺癌患者外周血CD40、CD40L的表達水平，并探討其與病理分期的關系?，F報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇遼寧醫學院附屬第一醫院收治的女性乳腺癌患者(乳腺癌組)30例，病理診斷均為浸潤型導管癌。其中，年齡41～80歲、中位年齡51歲，腫瘤TNM分期:Ⅰ期13例、Ⅱ期10例、Ⅲ～Ⅳ期7例，所有患者術前未接受放療或化療。同期選擇遼寧醫學院附屬第一醫院女性健康體檢者30例作為對照組，年齡38～82歲、中位年齡49歲。所有研究對象簽署知情同意書，并經臨床和實驗室檢查排除肝腎功能疾病、糖尿病及其他免疫缺陷性疾病。

1.2 方法 所有受試者取外周靜脈血2 ml，予EDTA抗凝，室溫保存，24 h內用于EPICS XL型流式細胞儀(美國貝克曼庫爾特公司生產)進行分析:每份血樣取100 μl抗凝外周血置于a、b管，a管內加入單克 隆 抗 體 CD3-FITC 10 μl、PE/CY5 標 記 的CD40L單抗20 μl，室溫避光孵育20min;b管加入單克隆抗體 CD19-FITC 10 μl、CD40-PE 20 μl混勻，室溫避光孵育20min;a、b管內分別加入3 ml紅細胞裂解液振蕩混勻后避光置10min，至液體透亮;離心后棄上清，加入磷酸鹽緩沖液;離心后棄上清，予1%多聚甲醛液固定，流式細胞儀檢測。單克隆抗體CD3-FITC、CD40-PE、CD40L-PE、CD19-FITC 均為法國Immunotech公司產品。

1.3 統計學方法 采用SPSS12.0統計軟件，結果以±s表示，組間比較采用t檢驗，相關分析采用Spearman相關分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組CD40、CD40L水平比較 乳腺癌組CD40表達水平為(9.26±2.12)%、CD40L 為(7.48±1.36)%，對照組分別為(7.33 ±1.64)%、(6.25 ±1.19)%。乳腺癌組CD40、CD40L表達水平均高于對照組(t=3.94、3.74，P 均 ＜0.01)。

2.2 乳腺癌病理分期與 CD40、CD40L的關系Spearman相關分析顯示，乳腺癌的病理分期與CD40、CD40L 表達水平均呈正相關(rCD40=0.88、rCD40L=0.71，P 均 ＜0.01)。見圖1。

圖1 乳腺癌患者病理分期與CD40、CD40L的相關性

3 討論

乳腺癌是嚴重危害女性健康的惡性腫瘤，僅次于宮頸癌，近年來發病率有上升趨勢。研究表明，乳腺癌患者外周血及骨髓中均有癌細胞的微小轉移［2］。因此認為，乳腺癌可能是一種全身性疾病，而乳腺的癌塊只是全身性疾病在局部的集中體現。其治療主要以手術、化療和放療為主的綜合治療，但5年生存率并不理想。

近年來，腫瘤的免疫治療已成為國內外研究的熱點。CD40、CD40L是T、B淋巴細胞最重要的第二活化信號之一;如缺少第二活化信號，T、B淋巴細胞將不能被活化，從而產生“無反應”現象或死亡。因此，CD40、CD40L在T、B淋巴細胞激活中起到了重要的作用。CD40屬神經生長因子超家族，在正常B淋巴細胞的發育、成熟、功能的介導及存活中有重要作用，不僅在控制上皮細胞的生長和分化上起作用，而且也可調節黏膜和皮膚部位的炎癥反應。在人類的惡性腫瘤中，大多數的惡性淋巴瘤、上皮性腫瘤都表達 CD40 分子［3，4］。CD40 的配體 CD40L 是腫瘤壞死因子家族成員之一，CD40、CD40L的相互作用參與機體的體液免疫和細胞免疫反應，在B細胞的活化與增殖分化、抗體產生中起關鍵作用［5，6］。有研究表明，CD4+CIK可能通過CD40/CD40L交聯提升腫瘤細胞表面功能性Fas表達來誘導其凋亡［7］。CD40配基化能明顯抑制乳腺癌細胞株使乳腺癌細胞處于凋亡和死亡，使血管內皮細胞處于早期凋亡［8］。

本研究結果表明，乳腺癌組外周血 CD40、CD40L表達水平均較對照組明顯升高(P均＜0.01)，且其水平與乳腺癌的病理分期均呈正相關。說明CD40、CD40L可能參與乳腺癌的發生、發展和轉移過程，可將其作為判斷乳腺癌病變程度和腫瘤轉移的指標之一。

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［8］蔣國勤，吳斌，劉燕.CD40配基化對乳腺癌細胞株和血管內皮細胞的作用［J］.中國癌癥雜志，2005，15(5):435-437.