瘦素基因nt+19A→G多態性與阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征的關系

高春艷，劉運秋，劉曉宇，李宏芬

(河北聯合大學附屬開灤醫院，河北唐山063000)

臨床及流行病學資料證實，肥胖是導致阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(OSAHS)的重要危險因子，遺傳因素在肥胖發生中起重要作用;OSAHS存在明顯的家族聚集現象及種族差異［1］，提示遺傳因素參與OSAHS發病。人類瘦素基因位于染色體7q31．3，近年研究發現該基因區域與人類極度肥胖相關［2］。目前，有關瘦素基因與OSAHS的相關研究較少，我們對瘦素基因外顯子5’非翻譯區第19位核苷酸nt+19A→G的變異進行了研究，旨在探討其基因多態性與中國北方成人OSAHS易感性之間的關系。

1 資料與方法

1．1 臨床資料 選擇2010年1月～2011年6月在我院住院的OSAHS患者180例(OSAHS組)，男141例、女39例，年齡(46．7 ±10．3)歲，BMI(26．18 ±3．22)kg/m2;均符合《阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征診斷及治療專家共識(2007年草案)》中的診斷標準。另選同期查體健康者180例作為對照組，其性別、年齡、BMI與 OSAHS組有可比性。根據BMI分別將兩組又分為體質量正常組(BMI＜25 kg/m2)及肥胖組(BMI≥25 kg/m2)。排除年齡＜18周歲，嚴重頜面畸形，患影響血氧飽和度的疾病，正在服用影響睡眠的藥物，己接受針對OSAHS的治療，多導睡眠儀監測睡眠時間少于6 h，合并高血壓、心腦腎肝疾病、糖尿病及精神疾病者。兩組均為我國北方漢族居民，無血緣關系。

1．2 方法 兩組均于夜間在SRM-9601多導睡眠監測(PSG)系統下進行至少6 h的睡眠監測，并進行頸圍、腰圍、腹圍、上氣道檢查等。

1．2．1 基因型檢測 抽取晨起空腹肘靜脈血5 ml，采用EDTA抗凝，低滲法分離白細胞，氯仿/異戊醇法提取DNA，PCR-RFLP法檢測nt+19A→G基因型。DNA擴增總體系25 μl，上游引物:5'-CCCGCGAGGTGC ACACTG-3'，下 游 引 物:5'-A GGAGGAAGGAGCGCGCC-3'，引物鏈由上海生工生物公司提供。反應條件:94℃預變性5 min，94℃變性30 s，65℃退火30 s，進行30個循環，擴增產物221 bp。經2．5%瓊脂糖電泳確認擴增結果后，在20 μl酶切反應體系中，加入 MspA1I內切酶0．5 μl(NEB 公司)，混勻后置37℃水浴中過夜，酶切產物置入2．5%瓊脂糖凝膠(EB染色)電泳，與Marker對照，在紫外燈下觀察結果。AA純合子無酶切位點，為221 bp;GG純合子為183、38 bp;GA 雜合子為 183、221、38 bp，因 38 bp 太小，在電泳過程中丟失。

1．2．1 統計學方法 采用SPSS13．0統計軟件，計量資料用±s表示，組間比較用獨立樣本t檢驗或方差分析，計數資料比較用χ2檢驗;遺傳平衡檢驗采用Hardy-Weinberg平衡定律。P≤0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 兩組基線資料比較 見表1。

表1 兩組基線資料比較(±s)

表1 兩組基線資料比較(±s)

基線資料 OSAHS組(n=180) 對照組(n=180)P頸圍(cm)41．57 ±2．36 39．42 ±2．53 ＜0．01腹圍(cm) 93．01 ±9．58 89．34 ±8．99 ＜0．01腰臀比 0．930 ±0．051 0．902 ±0．046 ＜0．01體脂含量(%)26．00 ±4．03 25．12 ±3．56 ＜0．05

2．2 兩組nt+19A→G基因型與基因頻率比較見表 2、3。

表2 兩組nt+19A→G位點不同基因型頻率的比較［例(%)］

表3 兩組nt+19A→G等位基因頻率的比較［例(%)］

2．3 不同基因型OSAHS患者的臨床指標比較OSAHS患者中，nt+19A→G各基因型個體比較，BMI、頸圍、腹圍、腰臀比均無統計學差異(P均＞0．05)

2．4 不同基因型OSAHS患者的各睡眠指標比較見表4。

3 討論

OSAHS是具有潛在風險的臨床綜合征，許多研究顯示，肥胖是其重要的危險因子，遺傳參與肥胖及OSAHS的發病。Palmer［3］通過對 OSAHS及肥胖患者的基因組掃描認為，OSAHS及肥胖的易患性可能通過一些共同的基因起作用，而且參與影響AHI、BMI的染色體定位十分相近，提示肥胖與OSAHS可能通過共同的基因調控導致內分泌異常。瘦素基因是近年發現的與肥胖相關的最主要基因。Hager等［4］等研究認為，nt+19A→G基因變異與白種人肥胖者的血清瘦素水平相關。Rossana等［5］研究發現，在意大利嚴重肥胖患者的nt+19A→G基因中，A、G等位基因的分布頻率在肥胖組與對照組間無統計學差異，其基因多態性與瘦素水平無關，與膽固醇、甘油三酯、BMI、脂肪含量等均無相關性，唯一有差異的是GG基因型肥胖女性的腰臀比明顯小于AA或GA基因型者;該學者認為，雖然Hager發現G等位基因攜帶者的瘦素較低，但其未考慮腰臀比的影響，故不能排除其結果因脂肪分布不同所致。張蓉等［6］認為，瘦素基因nt+19A→G變異可影響中國人2型糖尿病的局部體脂(主要是腹部皮下脂肪)分布。

表4 不同基因型OSAHS患者的各睡眠指標比較(±s)

表4 不同基因型OSAHS患者的各睡眠指標比較(±s)

注:PSO2:夜間平均氧飽和度;LSO2:最低氧飽和度;AHI:呼吸暫停低通氣指數;(AT+HT)/TST:(總呼吸暫停時間+總低通氣時間)/總睡眠時間;MAT:最長呼吸暫停時間;△心率:夜間最高心率－夜間最低心率;HR:夜間平均心率。不同基因型OSAHS患者的各睡眠指標比較，P均 ＞0．05

基因型頻率 n PSO2(%) LSO2(%)(AT+HT)/TST(%)MAT(s) AHI(次/h) △心率(次/min)HR(次/min)GG 80 85．74 ±6．38 69．00 ±15．71 26．52 ±20．47 60．09 ±20．86 35．54 ±21．83 58．59 ±12．89 70．18 ±10．36 GA 67 84．90 ±7．98 65．40 ±17．55 24．49 ±20．87 59．46 ±19．66 36．76 ±26．06 56．03 ±15．46 69．27 ± 9．91 AA 33 86．30 ±4．04 68．88 ±14．79 21．31 ±20．17 60．19 ±20．49 29．86 ±20．71 56．70 ±12．80 69．69 ±10．11

瘦素基因nt+19A→G變異存在三種基因型，本研究顯示，OSAHS組 GG型占45．0%，GA型占36．7%，AA型占18．3%，其 G、A 的等位基因頻率分別為63．3%、36．7%;對照組的 GG、GA、AA 基因型頻率分別為37．8%、46．7%、15．5%，其 G、A 等位基因頻率分別為61．1%、38．9%。兩組基因型分布及等位基因頻率分布均無統計學差異。OSAHS組中的GG、GA、AA基因型頻率個體比較，其頸圍、腹圍、腰臀比、BMI等均無統計學差異，提示其變異對局部體脂分布無明顯影響，結果與Rossana等［5］報道一致，但與張蓉等［6］結果不同，可能與相關疾病的選擇、樣本量大小等有關。三種基因型個體PSG各項指標比較均無明顯統計學差異，考慮其單一基因變異在OSAHS發病中可能無重要作用，其原因可能為肥胖及OSAHS發生有多基因參與，且受生活方式、飲食習慣等因素影響;其發病有遺傳異質性，不同個體發病有不同的基因參與，同一個體可能有多致病基因，單一基因可能僅以不同的風險率參與疾病的發生。由于瘦素基因結構復雜，存在多種變異，故對其與肥胖、OSAHS的關系有待于深入研究。

綜上所述，本研究認為瘦素基因nt+19A→G單一基因變異在我國北方漢族居民OSAHS發生中可能無明顯作用。

［1］Taheri S，Miqnot E．The genetics of sleep disorders［J］．Lancet Neurol，2002，1(4):242-250．

［2］Clement K，Garner C，Hager J，et al．Indication for linkage of the human OB gene region with extreme obesity［J］．Diabetes，1996，45(5):687-690．

［3］Palmer LJ．Genomic approaches to understanding obstructive sleep apnea［J］．RespirPhysiol Neurobiol，2003，135(2-3):187-205．

［4］Hager J，Clement K，Francke S，et al．A polymorphism in the 5’untranslated region of the human ob gene is associated with low leptin levels［J］．Int J Obes，1998，22(3):200-205．

［5］Rossana L，Emanuela P，Maria EB，et al．The A19G polymorphism in the 5＇untranslated region of the human obese gene does not affect leptin levels in severely obese patients［J］．J Clin Endocrinol Metab，2000，85(10):3589-3591．

［6］張蓉，鄭以漫，項坤三，等．瘦素基因nt+19A→G變異與中國人2型糖尿病脂代謝、體脂含量及分布的關系［J］．中華內分泌代謝雜志，2000，16(1):6-9．