PSCA基因多態性與青海地區藏族胃癌遺傳易感性的初步研究

沈國雙，趙久達* ，耿排力，王麗娟，曹成珠

(1青海大學附屬醫院，西寧810000;2青海大學醫學院)

前列腺干細胞抗原(PSCA)來源于前列腺，在細胞信號傳導，細胞與細胞間黏附，干細胞、祖細胞自我更新(抗凋亡)或增殖等功能方面起重要作用。有報道，PSCA基因多態性與日本彌漫型胃癌易感性相關［1］。中國為胃癌高發區，而青海省在全國發病率最高，其中藏族胃癌發病率明顯高于其他民族［2］。2009年1月～2010年12月，我們檢測了60例青海藏族胃癌患者PSCA基因rs2976392位點多態性，探討其與胃癌遺傳易感性的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2009～2010年住院、無血緣關系的藏族胃癌患者60例(觀察組)，男42例，女18例;年齡(53.2±11.3)歲。均經胃鏡或手術病理檢查證實診斷;未行放化療;低分化腺癌48例，高、中分化腺癌12例。另選取青海省海南藏族自治州60例正常藏族個體作為對照組。兩組年齡、性別有可比性。標本取材后立即置于液氮中速凍，移至－70℃冰箱保存。

1.2 PSCA基因多態性檢測

1.2.1 基因組DNA提取、擴增及鑒定 兩組均采集靜脈血2 ml，EDTA抗凝，3%明膠吸附紅細胞，10%SDS破膜，酚—氯仿法提取白細胞基因組DNA，經純度鑒定后－20℃保存備用。以PSCA基因組序列為依據，設計PSCA基因rs2976392位點PCR引物。序列為:F5-ctggccatctgtccgcagct-3/R5-cagatggaggaggatggctgga-3，產物長度352 bp。PCR反應體系及擴增條件:PCR反應總體系為25 μl，含100 ng/ml DNA 模板 2 μl，10 × 緩沖液 215 μl，25 mmol/L MgCl22 μl，2.5 mmol/L dNTP 2 μl，10 μmol/L 引物正反向各 1 μl，5 U/μl Taq DNA 聚合酶 0.25 μl。反應在溫度梯度PCR儀進行，條件為:94℃預變性3min，95℃變性30 s，72℃延伸45 s，進行35個循環，72℃后延伸10min。PCR產物2 μl行2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定擴增產物。

1.4 基因組多態性分析 變性高效液相色譜法(DHPLC)分析基因型:5 μl PCR產物在PCR儀內95℃變性3min，緩慢退火至45℃，以形成異源和同源雙鏈DNA分子混合物樣品入進樣室。檢測溫度以WAVEMAKER 4.0軟件包和網站http://insertion.stanford.edu/melt.html提供的預測溫度為參照，通過預實驗獲得各位點最適檢測溫度，洗脫液(A:0.1 mmol/L TEAA 含三乙胺乙酸鹽;B:0.1 mmol/L TEAA含25%乙腈)按線性遞增方式以0.9 ml/min的流速洗脫，260 nm波長處讀取吸光值，形成峰型;采用部分變性法確定PSCA基因rs2976392位點基因型。

1.5 統計學方法 采用用SPSS11.0軟件行統計學處理。以χ2檢驗確定兩組間三個位點基因型頻數分布的差異。以P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

兩組PSCA基因rs2976392位點均為G/G、G/A、A/A三種類型;其頻率見表1。由表1可見，胃癌組G/A基因型頻率明顯高于對照組，提示G/A基因型者胃癌的易感性高于另兩型者。

表1 兩組PSCA基因型頻率比較

3 討論

PSCA基因cDNA由660 bp組成，編碼含123個氨基酸的蛋白，與干細胞抗原-2(SCA-2)有30%的同源性。PSCA基因位于染色體8q 24.2(此區為大多數前列腺癌的等位癌基因擴增區)，嚴格表達于基底細胞，研究證實，PSCA在多數人類前列腺癌組織中過度表達，是鑒別前列腺切除標本中正常組織與前列腺癌組織重要的標志物［3］。

自2008年千年基因組計劃癌癥研究組報告PSCA的基因多態性與日本彌漫型胃癌易感性相關之后，研究者在韓國對上述結果進行了驗證:研究對象為457例彌漫型胃癌患者、418例腸型胃癌患者和390例對照組，結果顯示，PSCA rs2976392和rs2294008與彌漫型胃癌顯著相關，與腸型胃癌相關性較弱;PSCA在胃上皮細胞分化過程中表達，體外實驗表明其具有細胞增殖抑制作用，但在胃癌細胞中“沉默”。認為該基因的多態性可能參與調節胃上皮細胞增殖，并影響彌漫型胃癌易感性［4］。

本研究表明，青海地區藏族人群胃癌與PSCA基因rs2976392位點基因多態性呈相關性，G/A基因型者患胃癌的危險性較高。PSCA基因影響胃癌的發病可能與其參與調節胃上皮細胞增殖有關，因為研究表明，PSCA mRNA在正常胃黏膜中呈高表達(表達主要位于胃腺體峽部)，而胃癌組織中則檢測不到其表達。我們的研究結果與Saeki等的研究一致，提示攜帶PSCA基因rs2976392位點G/A基因型可能是該地區胃癌的遺傳易感因素;PSCA基因可作為該人群胃癌的標記物。目前我們正在進行PSCA基因其它單核苷酸多態性與胃癌遺傳易感性及擴大其他人群的研究。

［1］Study Group of Millennium Genome Project for Cancer，Sakamoto H，Yoshimura K，et al.Genetic variation in PSCA is associated with susceptibility to diffuse-type gastric cancer［J］.Nat Genet，2008，40(6):730-740.

［2］趙久達，李豪，曹成珠，等.1962例胃癌流行病學分析［J］.現代預防醫學，2008，35(3):439-440.

［3］Elsamman EM，Fukumori T，Tanimoto S，et al.The expression of prostate stem cell antigen in human clear cell renal cell carcinoma.a quantiative reverse transcriptase-polymerase chain reaction analysis［J］.BJU Int，2006，98(3):668-673.

［4］Saeki N，Sakamoto H，Yoshida T.Genome-wide association study of gastric cancer and GeMDBJ database［J］.Nippon Rinsho，2009，67(6):1227-1232.